Pour les tests de biocompatibilité nécessitant des tests de génotoxicité, nous proposons plusieurs types de tests, y compris la mutagénicité d'Ames, l'aberration chromosomique, le lymphome de la souris et le micronoyau de la souris, en fonction de votre type de produit et des exigences en matière de données. Ces tests sont conformes aux lignes directrices de l'OCDE et de l'ISO comme l'un des trois niveaux d'essai in vitro de génotoxicité.
Le test de mutagénicité d'Ames est utilisé pour déterminer l'activité mutagène potentielle d'un extrait d'un dispositif / matériel médical. Le test de mutation bactérienne inverse (test d'Ames) est effectué dans le cadre de la batterie de tests de génotoxicité pour déterminer si les fuites d'un dispositif / matériel médical sont mutagènes.
Le test d'aberration chromosomique est utilisé pour scanner les dispositifs / fournitures médicaux afin de déterminer s'ils causent des anomalies chromosomiques structurelles dans les cellules de l'ovaire de hamster chinois (CHO). Le test est effectué sur des dispositifs / matériaux avec un contact permanent avec le patient, un contact prolongé avec le patient ou un contact avec le sang. Le test d'aberration chromosomique est conforme aux lignes directrices de l'OCDE et de l'ISO en tant que l'un des trois niveaux de tests in vitro de génotoxicité.
Les tests de lymphome de souris utilisent souvent des cultures de cellules de mammifères pour identifier les mutations géniques, les changements dans la structure et le nombre des chromosomes et d'autres toxicités génétiques causées par des dispositifs médicaux, du matériel ou des extraits. Ces tests sont utilisés pour s'assurer que les dispositifs qui ont un contact à long terme avec le corps ne révèlent pas de génotoxicité qui pourrait conduire à des mutations génétiques potentiellement cancéreuses.
Le test du micronoyau de souris est utilisé pour évaluer le potentiel d'un dispositif médical à induire la formation de micronoyaux dans les érythrocytes polychromatiques immatures trouvés dans la moelle osseuse de souris adultes.
Mutagénicité d'Ames
Le test de mutagénicité d'Ames utilise plusieurs souches de Salmonella typhimurium sélectionnées pour leur sensibilité aux mutations dues à:
Les souches de test nécessitent également de l'histidine pour la croissance en raison d'une mutation dans le gène qui contrôle la production d'histidine.
Les tests d'Ames sont effectués en mélangeant un extrait de la substance d'essai avec l'organisme d'essai dans une solution d'agar molle contenant seulement une petite quantité d'histidine. L'histidine permet à l'organisme d'essai inoculé d'entrer dans un nombre limité de compartiments, mais est insuffisante pour permettre une croissance normale.
Cependant, si la souche est soumise à une mutation inverse (spontanée ou induite par la substance d'essai ou un matériel témoin positif), l'organisme n'a plus besoin d'histidine pour se développer et peut produire une colonie ou un inverseur visible. Les mutations de l'organisme d'essai uniquement dans la région du gène de l'histidine amènent l'organisme d'essai à inverser la mutation en un organisme, qui n'a plus besoin d'histidine.
Les souches d'essai sont sélectionnées pour détecter divers types de mutagène. Les souches de test utilisées sont TA97A, TA98, TA100, TA102 et TA1535.
Un test ponctuel est également effectué dans lequel des extraits du produit à tester sont colorés sur une plaque contenant une petite quantité d'organisme de test contenant de l'histidine. Au fur et à mesure que la substance d'essai diffuse à travers la gélose, elle devient plus diluée. Cela permet la détection de mutagènes qui provoquent une certaine inhibition des souches de test. Les tests sont effectués avec activation S-9 ou sans activation S-9. Le système d'activation S-9 est conçu pour simuler les systèmes d'enzymes hépatiques de mammifères et est utilisé pour détecter des substances subissant une activation métabolique à partir de formes non mutagènes.
Le test d'aberration chromosomique est effectué en exposant les cellules CHO à l'extrait de substance d'essai. Un milieu de prélèvement est inclus dans le test en tant que contrôle négatif.
Les cellules CHO sont ensemencées dans des flacons de culture cellulaire de 75 cm2 et incubées avec du milieu de culture cellulaire + 10% de sérum jusqu'à 40-60% de confluence.
Les cellules CHO sont exposées à l'extrait du produit testé en présence et en l'absence d'un système d'activation métabolique. Le système d'activation métabolique est un mélange d'homogénat S9, d'isocitrate et de NADP. Les contrôles positifs utilisés sont le cyclophosphamide avec activation métabolique et la mitomycine C sans activation métabolique.
Avant la récolte de cellules, les cellules sont examinées pour leur cytotoxicité. Les flacons sont notés en fonction du degré de cytotoxicité morphologique distinguable sur une échelle relative de 10993 à 5 par AAMI / ANSI / ISO 87-0 et USP <4>. La moyenne des résultats des trois bouteilles est moyennée pour donner un score final de cytotoxicité.
A la fin des périodes d'exposition et d'expression, les cellules sont arrêtées en métaphase avec du coltazide. Les cellules sont ensuite retirées des flacons et traitées avec une solution hypotonique et un fixateur. Les cellules sont déposées sur des lames de microscope. Les chromosomes sont colorés avec un colorant Giemsa et recouverts de Permount. Les cellules sont ensuite examinées au microscope pour des anomalies chromosomiques.
Biocompatibilité Dans les tests de génotoxicité, des cellules de lymphome de souris sont utilisées pour déterminer si un matériel d'essai est capable d'induire des mutations ponctuelles ou clastogène (rupture chromosomique) dans une lignée cellulaire de mammifère en culture. Dans ce cas, le gène cible, la thymidine kinase (TK), est un gène dispensable. La perte d'activité TK indique qu'une mutation s'est produite. Puisque la TK est impliquée dans une voie de sauvetage pour la thymidine dérivée du métabolisme de l'ADN, les cellules peuvent synthétiser la thymidine de novo. Par conséquent, la perte de savoirs traditionnels ne rend pas la cellule inanimée.
Des mutants peuvent être sélectionnés et des fréquences mutantes peuvent être dérivées en incorporant l'analogue de thymidine (trifluorothymidine ou TFT) dans le milieu de culture de cellules après exposition au matériel d'essai. Les cellules régulières avec TK intactes comprennent l'analogue et la matrice; Les cellules mutantes (sans activité TK) survivent, forment des colonies et se quantifient.
Dans le test du micronoyau de la souris, un dispositif médical est retiré dans un environnement polaire et non polaire. Les contrôles positifs et les contrôles négatifs à l'extrait de produit à tester sont administrés à raison de 20 ml / kg chez les souris mâles et femelles. La moelle osseuse est ensuite récoltée 24 et 48 heures après l'administration et examinée pour la présence d'érythrocytes polychromatiques micronucléaires (PCE). La présence de PCE est une indication de la fuite de la substance mutagène du dispositif.
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