W przypadku testów zgodności biologicznej wymagających badania genotoksyczności oferujemy wiele typów testów, w tym mutagenność Amesa, aberrację chromosomową, chłoniak myszy i mikrojąderkę myszy, w zależności od rodzaju produktu i wymagań dotyczących danych. Testy te są zgodne z wytycznymi OECD i ISO jako jeden z trzech poziomów testów in vitro genotoksyczności.
Test mutagenności Amesa służy do określenia potencjalnej mutagennej aktywności ekstraktu z wyrobu / materiału medycznego. Bacterial Reverse Mutation Test (test Amesa) jest wykonywany jako część zestawu testów genotoksyczności w celu określenia, czy wycieki z urządzenia medycznego / materiału są mutagenne.
Test aberracji chromosomowej służy do skanowania urządzeń / materiałów medycznych w celu określenia, czy powodują one strukturalne nieprawidłowości chromosomalne w komórkach jajnika chomika chińskiego (CHO). Badanie przeprowadza się na urządzeniach / materiałach, które mają stały kontakt z pacjentem, przedłużony kontakt z pacjentem lub kontakt z krwią. Test aberracji chromosomowej jest zgodny z wytycznymi OECD i ISO jako jeden z trzech poziomów badań genotoksyczności in vitro.
Testy na chłoniaka myszy często wykorzystują hodowle komórek ssaków do identyfikacji mutacji genów, zmian w strukturze i liczbie chromosomów oraz innych toksyczności genów spowodowanych przez urządzenia medyczne, materiał lub ekstrakty. Testy te służą do zapewnienia, że urządzenia, które mają długotrwały kontakt z ciałem, nie ujawniają genotoksyczności, która mogłaby prowadzić do mutacji genów o potencjale rakowym.
Test mikrojądrowy myszy służy do oceny potencjału urządzenia medycznego do indukowania tworzenia się mikrojąder w niedojrzałych erytrocytach polichromatycznych występujących w szpiku kostnym dorosłych myszy.
Mutagenność Amesa
W teście mutagenności Amesa wykorzystuje się kilka szczepów Salmonella typhimurium wybranych ze względu na ich podatność na mutacje z powodu:
Badane szczepy wymagają również histydyny do wzrostu z powodu mutacji w genie kontrolującym produkcję histydyny.
Testy Amesa przeprowadza się przez zmieszanie ekstraktu substancji badanej z organizmem testowym w miękkim roztworze agaru zawierającym tylko niewielką ilość histydyny. Histydyna pozwala zaszczepionemu organizmowi testowemu na wejście do ograniczonej liczby przedziałów, ale jest niewystarczająca, aby umożliwić normalny wzrost.
Jeśli jednak szczep przechodzi mutację odwrotną (spontaniczną lub indukowaną przez substancję badaną lub materiał kontroli dodatniej), organizm nie potrzebuje już histydyny do wzrostu i może wytworzyć widoczną kolonię lub odwrócenie. Mutacje w organizmie testowym tylko w regionie genu histydyny powodują, że organizm testowy odwraca mutację do organizmu, który nie wymaga już histydyny.
Szczepy testowe są wybierane w celu wykrycia różnych typów mutagenu. Zastosowane szczepy testowe to TA97A, TA98, TA100, TA102 i TA1535.
Wykonywany jest również test plamkowy, w którym ekstrakty badanego produktu są wybarwione na płytce zawierającej niewielką ilość organizmu testowego zawierającego histydynę. Gdy substancja testowa przenika przez agar, staje się bardziej rozcieńczona. Pozwala to na wykrycie mutagenów, które powodują pewne zahamowanie szczepów testera. Testy są wykonywane z aktywacją S-9 lub bez aktywacji S-9. System aktywacji S-9 jest przeznaczony do symulacji układów enzymatycznych wątroby ssaków i jest używany do wykrywania substancji podlegających aktywacji metabolicznej z form niemutagennych.
Test aberracji chromosomowej przeprowadza się wystawiając komórki CHO na działanie ekstraktu substancji testowej. Pożywka do wykrwawiania jest zawarta w teście jako kontrola negatywna.
Komórki CHO wysiewa się w 75 cm2 kolbach do hodowli komórek i inkubuje z pożywką do hodowli komórek + 10% surowicy do 40-60% konfluencji.
Komórki CHO są wystawiane na działanie ekstraktu produktu testowego w obecności i przy braku systemu aktywacji metabolicznej. System aktywacji metabolicznej to mieszanina homogenatu S9, izocytrynianu i NADP. Stosowane kontrole pozytywne to cyklofosfamid z aktywacją metaboliczną i mitomycyna C bez aktywacji metabolicznej.
Przed pobraniem komórek komórki bada się pod kątem cytotoksyczności. Fiolki ocenia się według stopnia rozpoznawalnej morfologicznej cytotoksyczności we względnej skali 10993 - 5 według AAMI / ANSI / ISO 87-0 i USP <4>. Średnia wyników z trzech butelek jest uśredniana, aby uzyskać ostateczny wynik cytotoksyczności.
Pod koniec okresów ekspozycji i ekspresji komórki są zatrzymywane w metafazie z koltazydem. Komórki są następnie usuwane z fiolek i traktowane hipotonicznym roztworem i utrwalaczem. Komórki osadza się na szkiełkach mikroskopowych. Chromosomy są barwione barwnikiem Giemsa i pokryte Permount. Komórki są następnie badane mikroskopowo pod kątem nieprawidłowości chromosomalnych.
Zgodność biologiczna W teście genotoksyczności mysie komórki chłoniaka są wykorzystywane do określenia, czy badany materiał jest zdolny do wywoływania mutacji punktowych lub klastogenności (pękanie chromosomów) w hodowanej linii komórek ssaków. W tym przypadku gen docelowy, kinaza tymidynowa (TK), jest genem zbędnym. Utrata aktywności TK wskazuje, że wystąpiła mutacja. Ponieważ TK bierze udział w szlaku ratunkowym dla tymidyny pochodzącej z metabolizmu DNA, komórki mogą syntetyzować tymidynę de novo. Dlatego utrata TK nie powoduje nieożywienia komórki.
Mutanty można wyselekcjonować, a częstości występowania mutacji można wyprowadzić przez wprowadzenie analogu tymidyny (trifluorotymidyny lub TFT) do pożywki hodowlanej komórek po ekspozycji na badany materiał. Normalne komórki z nienaruszoną TK obejmują analog i matrycę; Zmutowane komórki (pozbawione aktywności TK) przeżywają, tworzą kolonie i określają ilościowo.
W teście mikrojądrowym myszy urządzenie medyczne jest usuwane w środowisku polarnym i niepolarnym. Kontrole pozytywne i negatywne ekstraktu badanego produktu podaje się w ilości 20 ml / kg zarówno samcom, jak i samicom myszy. Następnie szpik kostny pobiera się 24 i 48 godzin po podaniu i bada na obecność mikrojądrowych erytrocytów polichromatycznych (PCE). Obecność PCE wskazuje na wyciek mutagennej substancji z urządzenia.
EUROLAB ze swoim wysoce wyspecjalizowanym zespołem i międzynarodowymi akredytowanymi laboratoriami, Testy genotoksyczności Wszystkie usługi związane z testami, analizami, pomiarami, ocenami i generowaniem raportów są wykonywane całkowicie i niezawodnie.
Możesz poprosić nas o wypełnienie formularza, aby umówić się na spotkanie, uzyskać bardziej szczegółowe informacje lub poprosić o ocenę.
EuroLabdziałania sprawozdawcze i certyfikacyjne, Fundacja United Accreditation Foundation (UAF), Turecka Agencja Akredytacyjna (TÜRKAK), Fundacja Akredytacji Przedsiębiorczości (EAF) na podstawie akredytacji udzielonej przez jego instytucję. Fundacja Akredytacji Przedsiębiorczości (EAF) jest również sygnatariuszem Organizacji Narodów Zjednoczonych (UN GLOBAL COMPACT).
