ASTM E2197-17 Kimyasalların Bakterisidal, Virüsidal, Fungisidal, Mikobakterisidal ve Spoicidal Aktivitelerini Belirlemek İçin Standart Kantitatif Disk Taşıyıcı Test Yöntemi

Amerikan Test ve Malzeme Kuruluşu (ASTM) tarafından geliştirilen “ASTM E2197-17 Kimyasalların bakterisidal, virüsidal, fungisidal, mikobakterisidal ve spoicidal aktivitelerini belirlemek için standart kantitatif disk taşıyıcı test yöntemi” standardında, sert, gözeneksiz çevresel yüzeyler ve tıbbi cihazları temsil eden fırçalanmış paslanmaz çelik disk taşıyıcılar üzerindeki vejetatif bakterileri, virüsleri, mantarları, mikobakterileri ve bakteri sporlarını etkisiz hale getirme yeteneğini değerlendirmek amacı ile kullanılan bir test yöntemi açıklanmaktadır.

Aynı zamanda bu standart, performans standardının karşılanıp karşılanmadığını tespit etmek amacı ile en az üç kontrol taşıyıcısının ortalamasıyla karşılaştırılabilecek sağ kalanlara sahip olacak şekilde tasarlanmıştır. Sonuçların uygun istatistiksel değerlendirmesi için, test inokulumundaki canlı organizma sayısı hem performans standardını hem de sonuçlardaki deneysel varyasyonları hesaba katacak kadar yüksek olmalıdır. Ayrıca bu test yöntemi herhangi bir silme veya ovalama eylemi içermez. Bu nedenle silme işlemlerini test etmek için tasarlanmamıştır.

Bu standardın amaçları doğrultusunda “ASTM E2756-19 Antimikrobiyal ve antiviral ajanlarla ilgili standart terminoloji” standardındaki terimler ve tanımlar yanı sıra şu tanımlar geçerlidir:

• Taşıyıcı, test organizması ile aşılanmış cansız bir yüzey veya nesneyi ifade eder.
• Eluat, geri kazanılan organizmayı veya organizmaları içeren bir eluantı ifade eder.
• Eluant, test organizması veya organizmaları için zararsız olan ve organizmayı veya organizmaları geri kazanmak için bir taşıyıcıya eklenen herhangi bir çözeltidir.
• Nötralizasyon, bir test maddesinin antimikrobiyal aktivitesini söndürme işlemini ifade eder. Bu işlem, organizma veya test maddesi karışımının seyreltilmesi veya buna bir veya daha fazla kimyasal nötrleştirici eklenmesiyle gerçekleştirilebilir.
• Toprak yükü, test organizmasının süspansiyonuna vücut salgılarının, atılımlarının veya diğer yabancı maddelerin varlığını simüle etmek için eklenen bir veya daha fazla organik veya inorganik madde veya her ikisinin bir çözeltisidir.
• Test organizması, kolayca tanımlanmasını sağlayan özelliklere sahip bir organizmadır. Ayrıca bir vekil, bir simülan veya bir işaretleyici organizma olarak da adlandırılabilir.
• Test maddesi, antimikrobiyal bileşenleri içeren bir formülasyondur.

Her disk (çapı 1 cm) toprak yüküyle 10 µL test organizması alır. Aşı kurutulur ve ardından disk, test maddesinin kullanım seyreltmesinin 50 µL’siyle temas etmeden önce steril bir plastik şişenin iç alt yüzeyine yerleştirilir. Temas süresi ve sıcaklık gerektiği gibi değişebilir. Kontrol taşıyıcıları, varsa test organizmaları ve konak hücreleri için zararsız olan 50 µL sıvı alır, ancak aksi takdirde test taşıyıcılarıyla aynı şekilde işlenir.

Vejetatif bakterilere, mantarlara, mikobakterilere ve bakteri sporlarına karşı testler için, test maddesi daha sonra nötrleştirilir ve aşı elue edilir. Taşıyıcının ve şişesinin eluat ve sonraki durulamaları membran filtresinden geçirilir. Filtreli kültür plakaları inkübe edilir, koloniler sayılır ve log10 indirgemeleri hesaplanır.

Virüslü testler için, eluatın uygun seyreltmeleri uygun hücre kültürlerine aşılanır, kültürler sitopatoloji / enfeksiyöz odaklar açısından incelenir, bunlar en olası sayı olarak tahmin edilir veya odaklar veya plaklar olarak sayılır ve log10 hesaplanır.

Bu testin tasarımı, yıkama yoluyla herhangi bir canlı organizma kaybını ortadan kaldırır ve böylece basit en olası sayı tahminlerine dayalı yöntemler için gerekenden çok daha az test taşıyıcısı kullanılarak istatistiksel olarak geçerli veriler üretmeyi mümkün kılar.

Testteki titizlik, bir toprak yükünün, fırçalanmış paslanmaz çelik taşıyıcı yüzeyinin mikro topografisinin ve birçok dezenfektan uygulaması için tipik olan test maddesinin yüzey alanına göre daha küçük oranının kullanılmasıyla sağlanır. Böylece, değerlendirilen test maddesi, aşılanmış taşıyıcılardan test organizmalarının verimli bir şekilde geri kazanılmasına izin verirken makul bir zorlukla karşı karşıya kalır. Temel testteki metal diskler ayrıca çok çeşitli aktif maddelerle uyumludur.

Taşıyıcıların tasarımı, her birine hassas bir şekilde ölçülmüş bir test organizması hacmi (10 µL) ve kontrol sıvısı veya test maddesi (50 µL) yerleştirmeyi mümkün kılar.

Aşılama, her diskin ortasına yerleştirilirken test maddesinin hacimleri neredeyse tüm disk yüzeyini kaplar ve böylece herhangi bir organizmanın maruz kalmaması riski neredeyse ortadan kalkar.

Virüslere karşı yapılanlar hariç tüm testlerde, 10 mL eluent / seyreltici eklenmesi, temas süresinin hemen sonunda test maddesinin 1:200 oranında seyreltilmesini sağlar. Bu adım kendi başına çoğu aktifin mikrobisidal aktivitesini durdurmak için yeterli olsa da test protokolü, gerekirse eluent / seyrelticiye belirli bir nötrleştiricinin eklenmesine izin verir. Virüsler hariç, membran filtrasyon adımı ayrıca test taşıyıcılarından gelen tüm eluatın işlenmesine ve dolayısıyla mevcut olabilecek düşük sayıda canlı organizmanın bile yakalanmasına ve ardından tespit edilmesine olanak tanır. Membran filtrelerinin daha sonra tuzlu su ile durulanması, herhangi bir inhibitör kalıntısının geri kazanım ortamına taşınması riskini de azaltır.

Kuruluşumuz, çeşitli sektörlerdeki işletmeler için verdiği sayısız test, ölçüm, analiz ve değerlendirme çalışmaları arasında, eğitimli ve uzman bir kadro ve gelişmiş teknolojik donanımı ile, “ASTM E2197-17 Kimyasalların bakterisidal, virüsidal, fungisidal, mikobakterisidal ve spoicidal aktivitelerini belirlemek için standart kantitatif disk taşıyıcı test yöntemi” standardında tanımlanan test hizmetleri de vermektedir.