OECD TG 435 Cilt Tahrişi için In Vitro Membran Bariyer Test Yöntemi

OECD çok uluslu şirketler için sorumlu iş davranışına ilişkin kılavuz ilkeleri (OECD kılavuzları) kapsamında yayınlanan “OECD TG 435 Cilt tahrişi için in vitro membran bariyer test yöntemi” standardında, aşındırıcı kimyasalları tanımlamak için kullanılan bir in vitro membran bariyer test yöntemi açıklanmaktadır. Bu test yöntemi, aşındırıcı kimyasallara hayvan derisine benzer şekilde tepki vermek üzere tasarlanmış yapay bir membran kullanır.

In vitro membran bariyer test yöntemi, katıları, sıvıları ve emülsiyonları test etmek için kullanılabilir. Ancak pH değeri 4,5 ila 8,5 aralığında olan sulu maddeler genellikle test için uygun değildir.

Açıklanan test yöntemi, aşındırıcı kimyasal maddelerin ve karışımların tanımlanmasına ve kimyasalların sınıflandırılması ve etiketlenmesine ilişkin küresel uyumlu sisteminde izin verilen şekilde aşındırıcı maddelerin alt kategorilere ayrılmasına olanak tanır. Bu sınıflandırma, maddenin membran bariyerinden nüfuz etme süresine dayanır.

Bu test sistemi iki bileşenden oluşur:

• Sentetik bir makromoleküler biyo-bariyer
• Bir kimyasal algılama sistemi (test maddesini algılayan)

Bu test sistemi uygulanırken, her bir test maddesi ve karşılık gelen kontrolleri için uygun sayıda tekrar hazırlanır. Test maddesinin membran bariyerine uygulanma süreleri kaydedilir ve kademeli olarak düzenlenir. Test maddesinin membran bariyerine uygulanması ile bariyer penetrasyonu arasında geçen süre (dakika cinsinden), test maddesinin aşındırıcılığını tespit etmek için kullanılır.

Cilt aşındırıcılığı geleneksel olarak test kimyasalını canlı hayvanların cildine uygulayarak ve belirli bir süre sonra doku hasarının derecesini değerlendirerek tespit edilmiştir. OECD TG 435 standardı yanı sıra, aşındırıcı kimyasalları tanımlamak için kullanılan standart in vivo tavşan cilt prosedürüne (OECD TG 404) alternatif olarak bir dizi başka in vitro test yöntemi benimsenmiştir. OECD kılavuz ilkeleri, doğrulanmış ve kabul görmüş in vitro test yöntemlerinin kullanılmasını önermektedir.

Bu modüler yaklaşımda, in vitro test yöntemlerinden elde edilen olumlu sonuçlar, hayvan testlerine gerek kalmadan bir kimyasalın aşındırıcı olarak sınıflandırılmasında kullanılmaktadır. Bu şekilde testlerde hayvanların kullanılmasının önüne geçilmesi ve hayvanların bu amaçla kullanılması durumunda ortaya çıkabilecek acı ve sıkıntın önlenmesi hedeflenmiştir.

Bu test yöntemi, sentetik makromoleküler membran bariyerinin yüzeyine test kimyasalının uygulanması sonrasında aşındırıcı test kimyasallarının neden olduğu membran bariyer hasarını, muhtemelen canlı ciltte işleyen aynı tahriş mekanizmaları ile “kimyasal tespit sistemi” aracılığıyla tespit eder.

Membran bariyerinin nüfuz etmesi veya kırılması, pH gösterge boyasının rengindeki veya bariyerin altındaki gösterge çözeltisinin başka bir özelliğindeki değişiklik dahil olmak üzere bir dizi prosedür veya kimyasal tespit sistemi ile ölçülebilir.

Membran bariyerinin amaçlanan kullanımı için geçerli, yani ilgili ve güvenilir olduğu belirlenmelidir. Bu, farklı preparatların bariyer özellikleri açısından tutarlı olmasını sağlamayı içerir, örneğin aşındırıcı olmayan kimyasallara karşı bir bariyeri koruyabilme, kimyasalların aşındırıcı özelliklerini kimyasalların sınıflandırılması ve etiketlenmesine ilişkin küresel uyumlu sistem aşındırıcılık alt kategorileri arasında kategorize edebilme gibi. Atanan sınıflandırma, bir kimyasalın membran bariyerini geçerek gösterge çözeltisine nüfuz etmesinin aldığı zamana dayanır.

In vitro membran bariyer test yönteminin rutin kullanımına geçilmeden önce, laboratuvarlar bu standarda uyarak, önerilen yeterlilik maddelerini doğru şekilde sınıflandırarak teknik yeterliliklerini göstermek zorundadır. Listelenen bir maddenin bulunmadığı veya haklı olduğu durumlarda, yeterli in vivo ve in vitro referans verilerinin mevcut olduğu başka bir madde kullanılabilir.

Testler, ortam sıcaklığında (17-25 derece aralığında) yapılmalı ve bileşenler standartta belirtilen koşullara uymalıdır.

Membran bariyer testini gerçekleştirmeden önce, test kimyasalının kimyasal tespit sistemi tarafından tespit edilebilir olup olmadığını belirlemek için bir kimyasal uyumluluk testi gerçekleştirilir. Kimyasal tespit sistemi test kimyasalını tespit etmezse, membran bariyer test yöntemi söz konusu test kimyasalının potansiyel aşındırıcılığını değerlendirmek için uygun değildir ve farklı bir test yöntemi kullanılmalıdır. Kimyasal tespit sistemi ve uyumluluk testi için kullanılan maruz kalma koşulları, sonraki membran bariyer testindeki maruziyeti yansıtmalıdır.

Test yöntemi için uygunsa, uyumluluk testiyle nitelendirilmiş bir test kimyasalı, zayıf ve güçlü asitler veya bazlar arasında ayrım yapmak için bir tarama testi olan bir zaman ölçeği kategori testine tabi tutulmalıdır. Örneğin, doğrulanmış referans test yönteminde, önemli asit veya alkali rezervinin tespit edilip edilmediğine bağlı olarak hangi iki zaman ölçeğinin kullanılması gerektiğini belirtmek için bir zaman ölçeği kategorizasyon testi kullanılır. Test kimyasalının asit veya alkali rezervine bağlı olarak, aşındırıcılığı ve kimyasalların sınıflandırılması ve etiketlenmesine ilişkin küresel uyumlu sistem cilt aşındırıcılığı alt kategorisini belirlemek için iki farklı atılım zaman ölçeği kullanılmalıdır.

Membran bariyeri iki bileşenden oluşur: proteinli makromoleküler sulu jel ve geçirgen destekleyici membran. Proteinli jel sıvılara ve katılara karşı geçirimsiz olmalı ancak aşınabilir ve geçirgen hale getirilebilir. Tamamen inşa edilmiş membran bariyeri, jelin bozulmasını, örneğin kuruma, mikrobiyal büyüme, kayma veya çatlamayı önlediği gösterilen önceden belirlenmiş koşullar altında saklanmalıdır, bu da performansını düşürür. Kabul edilebilir saklama süresi belirlenmeli ve membran bariyer preparatları bu süreden sonra kullanılmamalıdır. Geçirgen destekleyici membran, jelleşme süreci ve test kimyasalına maruz kalma sırasında proteinli jele mekanik destek sağlar. Destekleyici membran, jelin sarkmasını veya kaymasını önlemeli ve tüm test kimyasallarına kolayca geçirgen olmalıdır.

Kimyasal algılama sistemi açısından, uyumluluk testi için kullanılan aynı solüsyon olan gösterge solüsyonu, bir test kimyasalının varlığına yanıt vermelidir. Bir pH gösterge boyası veya boya kombinasyonu, örneğin test kimyasalının varlığına yanıt olarak bir renk değişimi gösterecek olan kresol kırmızısı ve metil turuncusu kullanılmalıdır.

Kuruluşumuz, çeşitli sektörlerdeki işletmeler için verdiği sayısız test, ölçüm, analiz ve değerlendirme çalışmaları arasında, eğitimli ve uzman bir kadro ve gelişmiş teknolojik donanımı ile, “OECD TG 435 Cilt tahrişi için in vitro membran bariyer test yöntemi” standardında tanımlanan test hizmetleri de vermektedir.