OECD TG 439 In Vitro Cilt Tahrişi: Yeniden Oluşturulmuş İnsan Epidermisi Test Yöntemi

OECD çok uluslu şirketler için sorumlu iş davranışına ilişkin kılavuz ilkeleri (OECD kılavuzları) kapsamında yayınlanan “OECD TG 439 In vitro cilt tahrişi: Yeniden oluşturulmuş insan epidermisi test yöntemi” standardında, BM Küresel Uyumlu Sınıflandırma ve Etiketleme Sistemi (GHS) Kategori 2’ye uygun olarak tahriş edici kimyasalların (maddeler ve karışımlar) tehlike tanımlaması için kullanılan bir in vitro test yöntemi açıklanmaktadır.

Bu yöntem, genel tasarımında insan derisinin üst kısımlarının biyokimyasal ve fizyolojik özelliklerini yakından taklit eden yeniden yapılandırılmış insan epidermisine (RhE) dayanmaktadır. Hücre canlılığı, dokulardan çıkarıldıktan sonra kantitatif olarak ölçülen hayati boya MTT’nin mavi formazan tuzuna enzimatik dönüşümüyle ölçülür. Tahriş edici test maddeleri, hücre canlılığını tanımlanmış eşik seviyelerinin altına düşürme yeteneklerine göre tanımlanır (kategori 2 için yüzde 50 veya altına eşit). Renkli kimyasallar ayrıca bir HPLC (yüksek performanslı sıvı kromatografisi) prosedürü kullanılarak da test edilebilir.

OECD TG 439 standardına uyan üç doğrulanmış test yöntemi bulunmaktadır. Düzenleyici çerçeveye ve kullanılan sınıflandırma sistemine bağlı olarak, bu prosedür, in vivo cilt tahrişi testi için tek başına bir yedek test olarak veya kademeli bir test stratejisi kapsamında kısmi bir yedek test olarak test maddelerinin cilt tahrişini belirlemek için kullanılabilir.

Prensip olarak test kimyasalı, insan epidermisinin çok katmanlı, oldukça farklılaşmış bir modelini oluşturmak için kültürlenmiş, dönüştürülmemiş insan kaynaklı epidermal keratinositlerden oluşan üç boyutlu bir RhE (yeniden yapılandırılmış insan epidermisi) modeline topikal olarak uygulanır. Düzenli bazal, dikenli ve granüler katmanlardan ve in vivo bulunanlara benzer ana lipit sınıflarını temsil eden hücreler arası lameller lipit katmanları içeren çok katmanlı bir stratum korneumdan oluşur.

Kimyasal kaynaklı cilt tahrişi, esas olarak eritem ve ödemle kendini gösterir ve kimyasalların stratum korneumdan geçerek keratinositlerin ve diğer cilt hücrelerinin alt katmanlarına zarar vermesiyle başlayan bir olaylar dizisinin sonucudur.

Hasarlı hücreler, inflamatuar medyatörleri serbest bırakabilir veya dermisteki hücreler, özellikle kan damarlarının stromal ve endotel hücreleri üzerinde de etkili olan bir inflamatuar kaskadı başlatabilir. Gözlenen eritem ve ödemi üreten endotel hücrelerinin genişlemesi ve artan geçirgenliğidir. Özellikle, RhE tabanlı test yöntemleri, in vitro test sisteminde herhangi bir vaskülarizasyon olmadığında, kaskaddaki başlatıcı olayları, örneğin hücre veya doku hasarını, okuma olarak hücre canlılığını kullanarak ölçer.

RhE modelinde hücre canlılığı, dokulardan çıkarıldıktan sonra kantitatif olarak ölçülen, hayati boya MTT’nin mavi formazan tuzuna enzimatik dönüşümüyle ölçülür (MTT, hücre canlılığını redoks potansiyelinin bir fonksiyonu olarak değerlendirmek için kullanılır). Tahriş edici kimyasallar, hücre canlılığını tanımlanmış eşik seviyelerinin altına düşürme yetenekleriyle tanımlanır (yani kategori 2 için en az yüzde 50). Düzenleyici çerçeveye ve bu test yönteminin uygulanabilirliğine bağlı olarak, tanımlanmış eşik seviyesinin üzerinde hücre canlılığı üreten test kimyasalları tahriş edici olmayan (yani, kategori yok, en az yüzde 50) olarak kabul edilebilir.

Epitelyumu yeniden yapılandırmak için dönüştürülmemiş insan keratinositleri kullanılmalıdır. İşlevsel bir stratum korneumun altında çok sayıda canlı epitel hücresi katmanı (bazal katman, stratum spinosum, stratum granulosum) bulunmalıdır. Stratum korneum, sitotoksik referans kimyasalların, örneğin sodyum dodeasil sülfatın hızlı penetrasyonuna direnmek için sağlamlığa sahip işlevsel bir bariyer oluşturmak üzere temel lipid profilini içeren çok katmanlı olmalıdır.

Bariyer fonksiyonu gösterilmeli ve bir referans kimyasalın sabit bir maruz kalma süresinden sonra doku canlılığını yüzde 50 oranında azalttığı konsantrasyonun belirlenmesi ile veya referans kimyasalın belirli, sabit bir konsantrasyonda uygulanması üzerine hücre canlılığını yüzde 50 oranında azaltmak için gereken maruz kalma süresinin belirlenmesi ile değerlendirilebilir. RhE (yeniden yapılandırılmış insan epidermisi) modelinin tutma özellikleri, stratum korneum etrafındaki materyalin canlı dokuya geçmesini önlemelidir, bu da cilt maruziyetinin zayıf modellenmesine yol açar. RhE modeli bakteri, virüs, mikoplazma veya mantar kontaminasyonundan arındırılmış olmalıdır.

Kuruluşumuz, çeşitli sektörlerdeki işletmeler için verdiği sayısız test, ölçüm, analiz ve değerlendirme çalışmaları arasında, eğitimli ve uzman bir kadro ve gelişmiş teknolojik donanımı ile, “OECD TG 439 In vitro cilt tahrişi: Yeniden oluşturulmuş insan epidermisi test yöntemi” standardında tanımlanan test hizmetleri de vermektedir.