Genotoksisite testi gerektiren biyouyumluluk testleri için, Ames Mutajenisitesi, Kromozomal Sapma, Fare Lenfoması ve Fare Mikronükleusu dahil olmak üzere ürün türünüze ve veri gereksinimlerinize bağlı olarak birden fazla test türü sunuyoruz. Bu testler, genotoksisite için üç in vitro test seviyesinden biri olarak OECD ve ISO yönergelerine uygundur.
Ames Mutajenisite testi, bir tıbbi cihazın / malzemeden bir ekstraktın potansiyel mutajenik aktivitesini belirlemek için kullanılır. Bakteriyel Ters Mutasyon Deneyi (Ames testi), bir tıbbi cihazdan / malzemeden sızıntıların mutajenik olup olmadığını belirlemek için testlerin genotoksisite pilinin bir parçası olarak gerçekleştirilir.
Kromozomal Sapma testi, Çin Hamster Yumurtalık (CHO) hücrelerinde yapısal kromozomal anormalliklere neden olup olmadıklarını belirlemek için tıbbi cihazları / malzemeleri taramak için kullanılır. Test, kalıcı hasta teması, uzun süreli hasta teması veya kan teması olan cihazlarda / materyallerde gerçekleştirilir. Kromozomal Sapma testi , genotoksisite için üç in vitro test seviyesinden biri olarak OECD ve ISO yönergelerine uygundur .
Fare Lenfoma testi, gen mutasyonlarını, kromozom yapısı ve sayısındaki değişikliği ve tıbbi cihazların, materyalin veya ekstraktlarının neden olduğu diğer gen toksisitelerini belirlemek için genellikle memeli hücre kültürlerini kullanır. Bu testler, vücutla uzun süreli teması olan cihazların, kanser potansiyeli olan gen mutasyonlarına neden olabilecek genotoksisiteyi ortaya çıkarmamasını sağlamak için kullanılır.
Fare Mikronükleus deneyi, bir tıbbi cihazın yetişkin farelerin kemik iliğinde bulunan olgunlaşmamış polikromatik eritrositlerde mikronükleus oluşumunu indükleme potansiyelini değerlendirmek için kullanılır.
Ames Mutajenitesi
Ames Mutajenisite testi, aşağıdakiler nedeniyle mutasyona duyarlılıklarına göre seçilen birkaç Salmonella typhimurium suşu kullanır:
Test suşları ayrıca, histidin üretimini kontrol eden gendeki bir mutasyon nedeniyle büyüme için histidin gerektirir.
Ames testleri, test maddesinin bir ekstresinin test organizması ile sadece az miktarda histidin içeren yumuşak bir agar çözeltisi içinde karıştırılmasıyla gerçekleştirilir. Histidin, aşılanmış test organizmasının sınırlı sayıda bölüme girmesine izin verir, ancak normal büyümeye izin vermek için yetersizdir.
Bununla birlikte, suş ters bir mutasyona (spontan veya test maddesi veya pozitif bir kontrol materyali tarafından uyarılmış) tabi tutulursa, organizma artık büyümek için histidin gerektirmez ve görünür bir koloni veya geri döndürücü üretebilir. Sadece histidin geni bölgesindeki test organizmasına mutasyonlar, test organizmasının bir organizmaya ters mutasyon geçirmesine neden olur ve bu artık histidin gerektirmez.
Test suşları çeşitli mutajen tiplerini tespit etmek için seçilir. Kullanılan test suşları TA97A, TA98, TA100, TA102 ve TA1535'tir.
Test ürününün ekstrelerinin, az miktarda histidin içeren test organizmasını içeren bir plaka üzerinde lekelendiği bir nokta testi de gerçekleştirilir. Test maddesi agardan yayıldığı için daha seyreltik hale gelir. Bu, test cihazı suşlarının bir miktar inhibisyonuna neden olan mutajenlerin saptanmasına izin verir. Testler S-9 aktivasyonu ile veya S-9 aktivasyonu olmadan yapılır. S-9 aktivasyon sistemi, memeli karaciğer enzim sistemlerini simüle etmek için tasarlanmıştır ve mutajenik olmayan formlardan metabolik aktivasyona giren maddeleri tespit etmek için kullanılır.
Kromozomal Sapma deneyi, CHO hücrelerinin test maddesi ekstraktına maruz bırakılmasıyla gerçekleştirilir. Negatif kontrol olarak tahlile bir boşaltma ortamı dahil edilir.
CHO hücreleri 75 cm2 hücre kültürü şişelerine tohumlanır ve hücre kültürü ortamı +% 10 serum ile birlikte% 40-60 birleşene kadar inkübe edilir.
CHO hücreleri, bir metabolik aktivasyon sisteminin varlığında ve yokluğunda test ürünü ekstraktına maruz bırakılır. Metabolik aktivasyon sistemi bir S9 homojenat, izositrat ve NADP karışımıdır. Kullanılan pozitif kontroller metabolik aktivasyonu olan Siklofosfamid ve metabolik aktivasyonu olmayan Mitomisin C'dir.
Hücre toplanmadan önce hücreler sitotoksisite açısından incelenir. Şişeler, AAMI / ANSI / ISO 10993-5 ve USP <87> uyarınca 0 - 4 nispi bir ölçekte ayırt edilebilir morfolojik sitotoksisite derecesine göre puanlanır. Üç şişeden elde edilen sonuçların ortalaması, nihai bir sitotoksisite skoru verecek şekilde ortalanır.
Maruz kalma ve ekspresyon dönemlerinin sonunda, hücreler koltazid ile metafazda tutuklanır. Hücreler daha sonra şişelerden çıkarılır ve hipotonik bir çözelti ve fiksatif ile işlenir. Hücreler mikroskop lamları üzerine bırakılır. Kromozomlar Giemsa boyası ile boyanır ve Permount ile kaplanır. Hücreler daha sonra kromozomal anormallikler açısından mikroskobik olarak incelenir.
Biyouyumluluk Genotoksisite testinde, bir test materyalinin kültürlenmiş bir memeli hücre hattında nokta mutasyonları veya klastojenik (kromozomal kırılma) indükleme kapasitesine sahip olup olmadığını belirlemek için fare lenfoma hücreleri kullanılır. Bu durumda, hedef gen, timidin kinaz (TK), dağıtılabilir bir gendir. TK aktivitesinin kaybı bir mutasyon meydana geldiğini gösterir. TK, DNA metabolizmasından türetilmiş timidin için bir kurtarma yolunda yer aldığından, hücreler timidin de novo'yu sentezleyebilir. Bu nedenle, TK'nin kaybı hücreyi cansız hale getirmez.
Mutantlar seçilebilir ve mutant frekansları, test materyaline maruz bırakıldıktan sonra hücrelerin kültür ortamına timidin analogu (triflorotimidin veya TFT) dahil edilerek türetilebilir. Bozulmamış TK'ye sahip normal hücreler, analog ve kalıbı içerir; (TK aktivitesinden yoksun olan) mutant hücreler hayatta kalır, koloniler oluşturur ve nicelendirilir.
Fare Mikronükleus testinde, tıbbi bir cihaz polar ve polar olmayan bir ortamda çıkarılır. Test ürünü ekstresi pozitif kontroller ve negatif kontroller hem erkek hem de dişi farelerde 20 mL / kg'da uygulanır. Kemik iliği daha sonra dozlamadan 24 ve 48 saat sonra toplanır ve mikronükleer polikromatik eritrositlerin (PCE'ler) varlığı açısından incelenir. PCE'lerin varlığı, cihazdan sızan mutajenik maddenin bir göstergesidir.
EUROLAB, konusunda son derece uzman ekibiyle ve uluslararası akredite laboratuvarlarıyla birlikte, Genotoksisite Testleri kapsamında tüm test, analiz, ölçüm, değerlendirme ve rapor oluşturma hizmetlerini eksiksiz ve güvenilir bir şekilde gerçekleştirir.
Randevu almak, daha detaylı bilgi edinmek yada değerlendirme talep etmek için formumuzu doldurarak size ulaşmamızı isteyebilirsiniz.
EUROLAB, raporlama ve belgelendirme faaliyetlerini, United Accreditation Foundation (UAF), Türk Akreditasyon Kurumu (TÜRKAK), Enterprise Accreditation Foundation (EAF) kuruluşundan sağladığı akreditasyona dayanarak sürdürmektedir. Enterprise Accreditation Foundation (EAF), aynı zamanda Birleşmiş Milletler (UN GLOBAL COMPACT) imzacısıdır.
