“EPI-200-SIT Cilt tahrişi testi”, Avrupa Birliği sınıflandırma sistemine göre cilt tahrişi tehlikesinin tanımlanması ve sınıflandırılması bağlamında saf test maddelerinin cilt tahrişi potansiyelini tahmin etmek için tasarlanmıştır. Avrupa Birliği ile ve Kimyasalların Sınıflandırılması ve Etiketlenmesine İlişkin Küresel Uyumlu Sistem (GHS) ile uyumlu hale getirildiği için, bu standartta açıklanan prosedür ayrıca tahriş edici maddelerin GHS’ye uygun olarak tehlike tanımlanmasına da olanak tanır.
Bu standart, kategori 2 tahriş ediciler ile tahriş edici olmayanlar arasında ayrım yapılmasına olanak tanır. Açıklanan test yöntemi, GHS’nin zorunlu olmayan alt kategorileri arasında ayrım yapmaz, yani GHS kategori 2 ve kategori 3 tahriş ediciler arasında ayrım yapmaz.
EPI-200-SIT standardında tanımlanan yöntem, saf test kimyasalının yeniden yapılandırılmış bir insan epidermisi modeline topikal olarak maruz bırakılması ve ardından hücre canlılığı testinden oluşur. Hücre canlılığı, hücre mitokondrilerinde bulunan MTT’nin dehidrogenaz dönüşümü ile ölçülür ve dokulardan çıkarıldıktan sonra kantitatif olarak ölçülen mavi bir formazan tuzuna dönüştürülür.
Kimyasallara maruz kalan dokuların canlılığının, negatif kontrollere (suyla muamele edilmiş) kıyasla azalması, cilt tahrişi potansiyelini tahmin etmek için kullanılır. Topikal formülasyonların cilt tahrişini tahmin etmek için çeşitli uç noktaları kullanan insan epidermisi modellerinde yapılan son karşılaştırmalı çalışmalar, MTT uç noktasının, salınımı gibi mekanik temelli uç noktalara göre bile belirgin avantajlara sahip olduğunu göstermiştir.
Yeniden yapılandırılmış insan epidermal modeli, insan epidermisinin çok katmanlı, oldukça farklılaşmış bir modelini oluşturmak üzere kültürlenmiş normal insan kaynaklı epidermal keratinositlerden oluşur. Düzenli bazal, dikenli ve granüler katmanlardan ve canlı dokuda bulunanlara benzer desenlerde düzenlenmiş hücreler arası lameller lipid katmanları içeren çok katmanlı bir stratum korneumdan oluşur. Yeniden yapılandırılmış insan cilt modellerinin uyması gereken genel ve işlevsel koşulların genel bir açıklaması yeni OECD test yönergelerinde yer almaktadır (“431 İn vitro cilt korozyonu: İnsan cilt modeli” ve “439 İn vitro cilt tahrişi: Yeniden oluşturulmuş insan epidermisi test yöntemi”).
Epidermisin tüm biyolojik bileşenleri ve kültür ortamı, üretici tarafından viral, bakteriyel, fungal ve mikoplazma kontaminasyonu açısından test edilir. Sonuçların geçmiş veri tabanına göre belirlenen bir aralıkta olması beklenir.
Uzun inkübasyon sonrası süre nedeniyle, testin mikrobiyolojik güvenlik kabininde (laminar akış davlumbazı) aseptik koşullar altında gerçekleştirilmesi gerekir.
EPI-200-SIT Cilt tahrişi testi, kozmetik ve farmasötik bileşenler dahil olmak üzere kimyasalların in vitro cilt tahrişi testi için geliştirilmiş ve doğrulanmıştır. Test, ön inkübasyon, 60 dakikalık maruziyet, 42 saatlik inkübasyon sonrası ve MTT canlılık testinden oluşan 4 günlük bir zaman dilimi boyunca gerçekleştirilir. Doku alımı ve bir gecelik ön inkübasyondan (0. gün) sonra, dokular sıvı, yarı katı, katı veya mum olabilen test kimyasallarına (1. gün) topikal olarak maruz bırakılır. Her test kimyasalı için ve pozitif kontrol (yüzde 5 sulu sodyum dodesil sülfat çözeltisi) ve bir negatif kontrol için üç doku kullanılır. Kimyasal maruziyet 60 dakika sürer, bunun 35 dakikasında dokular 37 derecede bir inkübatörde tutulur. Daha sonra test maddeleri kapsamlı bir yıkama prosedürü ile doku yüzeyinden uzaklaştırılır. Doku ekleri lekelenir ve taze ortama aktarılır.
24 saatlik bir inkübasyon süresinden sonra (2. gün), ortam değiştirilir. Ortam, sitokinlerin veya ilgi duyulan diğer uç noktaların daha fazla analizi için saklanabilir. Ortam değişiminden sonra, dokular ek 18 saat daha inkübe edilir. Tüm 42 saatlik inkübasyon sonrası (3. gün) sonunda, dokular sarı MTT çözeltisine aktarılır ve 3 saat inkübe edilir.
Esas olarak mitokondriyal metabolizma tarafından oluşturulan elde edilen mor-mavi formazan tuzu, izopropanol kullanılarak 2 saat boyunca çıkarılır. Çıkarılan formazanın optik yoğunluğu bir spektrofotometre kullanılarak belirlenir. Bir kimyasal, negatif kontrol ile tedavi edilen dokulara göre doku canlılığı yüzde 50’nin altına düşerse tahriş edici olarak sınıflandırılır. Bu prosedür, Avrupa Birliği yönetmeliklerine uygun olarak kimyasalların tehlike tanımlaması ve etiketlenmesi için in vivo tavşan deri tahrişi testinin tam bir ikamesi olarak kullanılabilir.
Kuruluşumuz, çeşitli sektörlerdeki işletmeler için verdiği sayısız test, ölçüm, analiz ve değerlendirme çalışmaları arasında, eğitimli ve uzman bir kadro ve gelişmiş teknolojik donanımı ile, “EPI-200-SIT Cilt tahrişi testi” standardında tanımlanan test hizmetleri de vermektedir.
Randevu almak, daha detaylı bilgi edinmek yada değerlendirme talep etmek için formumuzu doldurarak size ulaşmamızı isteyebilirsiniz.
EUROLAB , raporlama ve belgelendirme faaliyetlerini, United Accreditation Foundation (UAF), Türk Akreditasyon Kurumu (TÜRKAK), Enterprise Accreditation Foundation (EAF) kuruluşundan sağladığı akreditasyona dayanarak sürdürmektedir. Enterprise Accreditation Foundation (EAF), aynı zamanda Birleşmiş Milletler (UN GLOBAL COMPACT) imzacısıdır.
