OECD 492B Göz Tehlikesi Tanımlaması için Yeniden Oluşturulmuş İnsan Kornea Benzeri Epitel (RhCE) Test Yöntemi

OECD çok uluslu şirketler için sorumlu iş davranışına ilişkin kılavuz ilkeleri (OECD kılavuzları) kapsamında yayınlanan “OECD 492B Göz tehlikesi tanımlaması için yeniden oluşturulmuş insan kornea benzeri epitel (RhCE) test yöntemi” standardında, UN GHS oküler tehlike kategorilerine göre sınıflandırma gerektirmeyen (Cat no Cat), göz tahrişi için sınıflandırma gerektiren (Cat 2) ve ciddi göz hasarı için sınıflandırma gerektiren (Cat 1) kimyasalların (maddeler ve karışımlar) kendi başına tanımlanmasını sağlayan bir in vitro prosedür açıklanmaktadır.

Bu prosedür, insan kornea epitelinin histolojik, morfolojik, biyokimyasal ve fizyolojik özelliklerini yakından taklit eden yeniden yapılandırılmış insan kornea benzeri epitel (RhCE) kullanır. Test, bir test kimyasalının MTT testi ile ölçülen bir insan kornea benzeri epitel (RhCE) doku yapısında sitotoksisiteyi indükleme yeteneğini değerlendirir. MTT testi, hücre metabolik aktivitesini değerlendirmek için kolorimetrik bir tahlil yöntemidir.

Bir test kimyasalına maruziyetten sonra insan kornea benzeri epitel (RhCE) doku canlılığı, dokuların canlı hücreleri tarafından hayati boya MTT’nin dokulardan çıkarıldıktan sonra kantitatif olarak ölçülen mavi bir MTT formazan tuzuna enzimatik dönüşümü ile ölçülür. Sitotoksisite, maruziyetin farklı zaman noktalarında ölçülür.

İnsan kornea benzeri epitel (RhCE) dokusunun canlılığı, negatif kontrol maddesiyle (yüzde canlılık) tedavi edilen dokularla karşılaştırılarak belirlenir ve daha sonra test kimyasalının göz tehlikesi potansiyelini tahmin etmek için kullanılır. BM GHS2ye göre sınıflandırma ve etiketleme gerektirmeyen kimyasallar, doku canlılığını belirli bir eşiğin altına düşürmeyen (yani BM GHS kategorilenmemiş için doku canlılığı en düşük yüzde 60) kimyasallar olarak tanımlanmaktadır.

OECD 492B standardında açıklanan test yöntemi, GHS Kategori 1, Kategori 2 ve kategorilendirilmemiş maddeler ve karışımlar arasında ayrım yapmak için kullanılan ilk tek hayvan dışı göz tahrişi test yöntemidir. Yakın zamana kadar, GHS Kategori 2 göz tahriş edicilerinin çözümü, tek bir in vitro testinin Kategori 1, Kategori 2 ve kategorilendirilmemiş test materyalleri arasında ayrım yapamaması nedeniyle kanıt ağırlığı yaklaşımına dayanıyordu. OECD 492B test kılavuzunun onaylanması ile birlikte bu sınıflandırmaların belirlenmesi artık mümkün olmuştur.

Test maddeleri, Birleşmiş Milletler Kimyasalların Sınıflandırılması ve Etiketlenmesine İlişkin Küresel Uyumlu Sistem (UN GHS) kapsamında göz tahrişi tehlikeleri açısından şu kategorilere göre sınıflandırılmıştır:

• GHS Kategori 1: Tek bir maruziyetten sonra tamamen geri döndürülemeyen ciddi göz hasarına veya görme kaybına neden olan test maddeleri veya karışımları
• GHS Kategori 2: Bir test maddesine tek bir maruziyetten sonra tamamen geri dönüşümlü olan göz tahrişi ve gözdeki değişiklikler
• GHS Kategori yok: Göz tahrişi veya ciddi göz hasarı için sınıflandırılmamış test maddeleri, sınıflandırma gerekliliklerini karşılamayan maddeler olarak tanımlanır

Günümüzde insan kornea epiteli dokuları, toksisiteye kadar geçen süre protokolüne göre test maddeleriyle tedavi edilir. Kornea hücresi hasarı ve canlılık kaybı, kornea fonksiyonu ve görme keskinliği üzerindeki olumsuz etkilerle oldukça ilişkili olduğundan, HCE dokularının canlılığı, MTT azaltma canlılık uç noktası kullanılarak test maddesine maruziyetten sonra ölçülür.

BM GHS kategorizasyonu için tahmin modeli şu şekildedir:

• Sıvılar için TTL toksisite süresi
  • Kategori yok: Her üç maruziyetten sonra ortalama doku canlılığı az yüzde 50
  • Kategori 2: Uygulanabilirlik sonuçlarının herhangi bir diğer kombinasyonu
  • Kategori 1: Her üç maruziyetten sonra ortalama doku canlılığı an fazla yüzde 50
• Katılar için TTS toksisite süresi
  • Kategori yok: Ortalama doku canlılığı 30 dakikalık maruziyetten sonra yüzde 40’ın üzerinde ve 120 dakikalık maruziyetten sonra yüzde 60’ın üzerinde
  • Kategori 2: Uygulanabilirlik sonuçlarının herhangi bir diğer kombinasyonu
  • Kategori 1: Ortalama doku canlılığı 30 dakikalık maruziyetten sonra en fazla yüzde 40 ve 120 dakikalık maruziyetten sonra an fazla yüzde 60

Birçok üretici firma bir dizi yasal düzenlemeye uyum sağlamak için tehlike tanımlama ve etiketleme amaçları için OECD TG 492B standardını kullanır.

Kuruluşumuz, çeşitli sektörlerdeki işletmeler için verdiği sayısız test, ölçüm, analiz ve değerlendirme çalışmaları arasında, eğitimli ve uzman bir kadro ve gelişmiş teknolojik donanımı ile, “OECD 492B Göz tehlikesi tanımlaması için yeniden oluşturulmuş insan kornea benzeri epitel (RhCE) test yöntemi” standardında tanımlanan test hizmetleri de vermektedir.