EN ISO 16472 Rações Animais - Determinação do Teor de Fibras em Detergente Neutro Tratado com Amilase (aNDF)

A norma “EN ISO 16472 Alimentos para animais - Determinação do teor de fibras em detergente neutro tratadas com amilase (aNDF)”, que se baseia em uma norma europeia e posteriormente publicada pela Organização Internacional de Padronização (ISO), descreve métodos para determinar o teor de resíduos de fibras insolúveis em detergente neutro tratadas com amilase em todos os tipos de ração animal. Esta norma inclui um método de rotina gravimétrico e um método de referência.

Para os fins desta norma, o teor de fibra em detergente neutro tratada com amilase (teor de aNDF) refere-se à fração de massa de resíduos de fibra insolúvel determinada pelo procedimento especificado nesta norma. O conteúdo de NDF é expresso como uma porcentagem em massa.

Em princípio, a solução de detergente neutro (ND) e a alfa-amilase termoestável são usadas para dissolver proteínas, lipídios, açúcares, amidos e pectinas facilmente digeríveis em rações, deixando um resíduo fibroso insolúvel constituído de substâncias nitrogenadas que são componentes da parede celular de materiais vegetais (celulose, hemicelulose e lignina) e indigeríveis em produtos de origem animal.

Além dos equipamentos usuais de laboratório, os seguintes equipamentos são utilizados nestes testes:

• Balança analítica com leitura de 0,1 mg, capaz de pesar com precisão de 0,1 mg.
• Moinho ciclone com malha de 220 mm ou moinho de corte com malha de 260 mm que pode moer amostras para obter tamanho médio geométrico de partículas de 2 µm a 1 µm
• Dispositivo de refluxo com unidades de aquecimento separadas e condensadores de água fria, adequado para recipientes de 600 ml. Qualquer instrumento convencional adequado para determinação de fibra bruta é aceitável. Ao utilizar condensadores de água fria, as configurações da unidade de aquecimento são calibradas para que 50 ml de água fervam em 4 a 5 minutos. Pode ser utilizado um aparelho do tipo Fibertec, que deve ferver 50 ml de água em 10 minutos.
• Cadinho Gooch com disco fritado, cadinho de porosidade grossa (tamanho de poro de 40 µm a 60 µm), formato alto, capacidade de 40 ml a 50 ml ou P2 (tamanho de poro de 40 µm a 100 µm), capacidade de 26 ml a 28 ml.

Os cadinhos e as cinzas novos são limpos a 1 graus por 500 hora. Após cada uso, os cadinhos são limpos por incineração a 3 graus por 500 horas, removendo as cinzas, virando-os de cabeça para baixo na solução de detergente e sonicando por 7 a 10 minutos. Os cadinhos são enxaguados em água quente e deixados em água em temperatura ambiente por pelo menos 30 minutos. Uma rolha de borracha é colocada na parte superior de cada cadinho, equipada com uma armadilha e uma porta conectada à linha de vácuo. Ao mergulhar e remover repetidamente cada pote, ele é retrolavado com água, criando um forte efeito de enxágue. A taxa de filtragem é verificada ocasionalmente. Se a limpeza não melhorar a taxa de filtração, o cadinho é descartado.

• Coletor de filtro de vácuo (por exemplo, tipo Fibertec) que permite umedecimento adequado de detritos fibrosos. O coletor deve fornecer uma vedação hermética ao cadinho para reduzir a formação de espuma nas linhas de vácuo. Um tubo de vácuo de parede espessa é usado para conectar o coletor a uma armadilha e a uma fonte de vácuo. Recomenda-se uma câmara de vácuo entre a armadilha e a fonte de vácuo para fornecer capacidade de vácuo adequada para remover a espuma.
• É utilizado um gerador de água fervente contínuo ou uma alternativa adequada. O instrumento deve fornecer água fervente suficiente (pelo menos 95 graus) para todas as amostras lavadas de uma só vez e deve ser alimentado através de um bico que produza um jato fino (uma vazão de 10 ml a 35 ml em 40 segundos, uma ponta de pipeta de plástico descartável de 2,5 ml é um bico aceitável). Um bico fino minimiza a água necessária para transferir partículas para o cadinho, mas fornece a pressão de água necessária para remover detritos aderidos à lateral do frasco. É essencial que a água ferva quando adicionada aos cadinhos, especialmente para amostras que contêm amido, substâncias de pectina, mucilagem ou glicoproteínas. Para o dispositivo do tipo Fibertec, uma seringa com bico de pulverização cônico é usada para enxaguar os condensadores e uma seringa descartável de 10 ml com uma agulha de calibre 12 de 60 cm de comprimento é usada para remover detritos aderidos aos condensadores.

A amostragem não faz parte do método especificado nesta norma. Um método de amostragem recomendado está incluído no padrão ISO 6497. É importante que o laboratório receba uma amostra que seja verdadeiramente representativa e que não tenha sido danificada ou alterada durante o transporte ou armazenamento.

As amostras de teste são preparadas de acordo com a norma ISO 6498. As amostras devem ser secas ao ar (aproximadamente 90% de matéria seca) para facilitar o armazenamento e a moagem da amostra. Para evitar a formação de fibras artificiais, as amostras úmidas são secas a uma temperatura máxima de 60 graus. A quantidade de resíduo restante após a extração é afetada pelo tamanho das partículas da amostra. Amostras representativas são moídas para obter um tamanho médio geométrico de partículas de 220 µm a 260 µm.

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