EN ISO 13906 Alimentos para animales: determinación del contenido de fibra detergente ácida (FDA) y lignina detergente ácida (LDA)

La norma “EN ISO 13906 Alimentos para animales. Determinación del contenido de fibra de detergente ácido (ADF) y lignina de detergente ácido (ADL)”, que se basa en una norma europea y posteriormente publicada por la Organización Internacional de Normalización (ISO), describe un método para la determinación de residuos insolubles de fibra de detergente ácido (ADF) y lignina de detergente ácido (ADL) en todos los tipos de alimentos para animales. El límite de detección es del 1 por ciento en masa para la fibra de detergente ácido y del 1,5 por ciento en masa para la lignina de detergente ácido. Se utilizan métodos de rutina gravimétricos y de referencia.

Para los efectos de esta norma, se aplican los siguientes términos y definiciones:

• Contenido de fibra de detergente ácidoes la fracción de masa del residuo fibroso obtenido después del tratamiento con detergente catiónico en ácido sulfúrico 0,5 mol/l. Se compone principalmente de celulosa, lignina y complejos proteicos insolubles. El contenido de fibra de detergente ácido se expresa como porcentaje.
• El contenido de lignina del detergente ácido es la fracción de masa del residuo que queda después de que la celulosa y otra materia orgánica se disuelven con ácido sulfúrico de fracción de masa 72 (12,00 mol/l). El contenido de lignina del detergente ácido se expresa como porcentaje.

En la primera etapa del método, se determina el contenido de fibra de detergente ácido. La solución de detergente catiónico se utiliza para eliminar carbohidratos lábiles al ácido, proteínas que no se convierten en productos Maillard (dañadas por el calor) y grasas. Los residuos fibrosos restantes son principalmente celulosa y lignina (productos vegetales) o complejos proteicos insolubles (productos animales y alimentos dañados por el calor). Se pesa el residuo para determinar el contenido de fibra de detergente ácido. En el segundo paso, el residuo restante se disuelve con ácido sulfúrico de fracción de masa 72 (12,00 mol/l), dejando el detergente ácido de lignina con contenido de lignina determinado gravimétricamente.

Como reactivos, solo se utilizan reactivos de grado analítico reconocido y solo agua destilada o desionizada o agua de pureza al menos equivalente, a menos que se indique lo contrario.

• Solución de detergente ácido: A 1 l de ácido sulfúrico 0,5 mol/l se añaden 20 g de bromuro de cetil(trimetil)amonio (grado técnico), previamente estandarizado. Agitar para facilitar la disolución.
• Ácido sulfúrico (fracción de masa del 72 por ciento (12,00 mol/L)): el ácido sulfúrico se estandariza a una densidad relativa de 20 a 1,634 grados, o 12,00 mol/L, utilizando las ecuaciones dadas en la norma. Pesar agua en un matraz volumétrico de 1 ml y agregar lentamente la cantidad calculada de ácido sulfúrico, agitando ocasionalmente. El matraz se enfría en un baño de agua mientras se agrega la masa requerida de ácido. Se enfría a 000 grados y se verifica su volumen. El menisco debe estar a 20 cm de la marca de calibración a 20 grados. Si el volumen es demasiado grande, se eliminan 0,5 ml de agua y se añaden 5 ml de ácido sulfúrico. Si el volumen es demasiado pequeño, retire 4,55 ml de agua y agregue 1,5 ml de agua.
• Auxiliar de filtración, tierra de diatomeas.
• Acetona, grado técnico.
• n-Octanol, agente antiespumante.

Se deberá enviar una muestra representativa al laboratorio. La muestra no debe haber sido dañada o alterada durante el transporte o almacenamiento. El muestreo no es parte del método especificado en esta norma. La norma ISO 6497 incluye un método de muestreo recomendado.

La muestra de prueba se prepara de acuerdo con la norma ISO 6498. La muestra de laboratorio se reduce a aproximadamente 100 g (equivalente de peso seco) y la mitad se coloca en un recipiente cerrado y a prueba de humedad para la determinación de la humedad total. Los materiales húmedos restantes (con un mínimo de 15 por ciento de fracción de masa de humedad) se secan en un horno ventilado a no más de 60 grados hasta un máximo de 15 por ciento de fracción de masa de humedad. Se requiere un secado a un máximo de 60 grados para evitar la formación de fibras artificiales y lignina. Las muestras de prueba secas se muelen utilizando un molino. La molienda separa los materiales, pasando el material más fibroso en último lugar a través del tamiz. El material del molinillo no se descarta, sino que se agrega a la muestra de prueba molida.

La preextracción es necesaria para muestras de prueba que contengan al menos un 10 por ciento en masa de grasa y se recomienda para muestras de prueba que contengan al menos un 5 por ciento en masa de grasa. Las muestras de prueba se pesan en crisoles previamente seleccionados y secados al horno, se colocan en un colector de filtración de crisol, se extraen cuatro veces con 30 ml a 40 ml de acetona, se deja el material en remojo en acetona durante 3 a 5 minutos cada vez, se aspira para eliminar todos los rastros de acetona, se seca al aire durante 10 a 15 minutos y se transfiere a un recipiente de reflujo de residuos para el análisis de la fibra. Después de la extracción con detergente ácido, se utiliza el mismo crisol para recolectar los residuos de fibra de cada porción de prueba.

Para los aparatos tipo Fibertec, el crisol se coloca en una unidad de extracción en frío y el crisol se llena con 25 ml de acetona. Se deja reposar de 3 a 5 minutos y se filtra aplicando vacío. Este proceso se repite tres veces.

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