နိုင်ငံစုံကုမ္ပဏီများအတွက် တာဝန်ယူမှုရှိသော စီးပွားရေးလုပ်ငန်းအပြုအမူဆိုင်ရာ OECD လမ်းညွှန်ချက်များ (OECD လမ်းညွှန်ချက်များ) အောက်တွင် ထုတ်ဝေသော “OECD TG 439 In vitro အရေပြားယားယံခြင်း- ပြန်လည်ဖွဲ့စည်းထားသော လူ့အရေပြား အပေါ်ယံ စစ်ဆေးခြင်းနည်းလမ်း” စံနှုန်းသည် ကုလသမဂ္ဂ ကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာ သဟဇာတဖြစ်သော ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်းနှင့် တံဆိပ်ကပ်ခြင်းစနစ် (GHS) အမျိုးအစား ၂ နှင့်အညီ ယားယံစေသော ဓာတုပစ္စည်းများ (ပစ္စည်းများနှင့် ရောစပ်ပစ္စည်းများ) ၏ အန္တရာယ်ခွဲခြားသတ်မှတ်ရန်အတွက် အသုံးပြုသည့် in vitro စမ်းသပ်နည်းလမ်းကို ဖော်ပြသည်။
ဤနည်းလမ်းသည် လူသားအရေပြားအပေါ်ပိုင်းအစိတ်အပိုင်းများ၏ ဇီဝဓာတုနှင့် ဇီဝကမ္မဂုဏ်သတ္တိများကို အနီးကပ်တုပထားသည့် ပြန်လည်တည်ဆောက်ထားသော လူသား epidermis (RhE) ကို အခြေခံထားသည်။ ဆဲလ်များ၏ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို တစ်ရှူးများမှထုတ်ယူပြီးနောက် ပမာဏအလိုက်တိုင်းတာသည့် အရေးကြီးသောဆိုးဆေး MTT ကို အပြာရောင်ဖော်မာဇန်ဆားသို့ အင်ဇိုင်းအဖြစ်ပြောင်းလဲခြင်းဖြင့် တိုင်းတာသည်။ ညစ်ညမ်းစေသော စမ်းသပ်ပစ္စည်းများကို သတ်မှတ်ထားသော အဆင့်များအောက်ရှိ ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို လျှော့ချနိုင်စွမ်း (အမျိုးအစား 2 အတွက် 50 ရာခိုင်နှုန်း သို့မဟုတ် ထို့ထက်နည်းသည်) ဖြင့် သတ်မှတ်သည်။ ရောင်စုံဓာတုပစ္စည်းများကို HPLC (စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားသောအရည်ခရိုမာတိုဂရာ) လုပ်ငန်းစဉ်ကို အသုံးပြု၍လည်း စမ်းသပ်နိုင်သည်။
OECD TG 439 စံနှုန်းနှင့် ကိုက်ညီသော တရားဝင် စမ်းသပ်မှု နည်းလမ်း သုံးခု ရှိပါသည်။ အသုံးပြုထားသော စည်းမျဉ်းစည်းမျဥ်းနှင့် အမျိုးအစားခွဲသည့်စနစ်ပေါ်မူတည်၍ vivo အရေပြားယားယံခြင်းစမ်းသပ်ခြင်းအတွက် သီးခြားကိုယ်ဝန်ကိုယ်ဝန်စမ်းသပ်မှုအဖြစ် သို့မဟုတ် အဆင့်ခွဲစမ်းသပ်မှုဗျူဟာအတွင်း တစ်စိတ်တစ်ပိုင်းကိုယ်ဝန်ကိုယ်ဝန်စမ်းသပ်မှုအဖြစ် စမ်းသပ်ပစ္စည်းများ၏အရေပြားယားယံမှုကို ဆုံးဖြတ်ရန် ဤလုပ်ငန်းစဉ်ကို အသုံးပြုနိုင်သည်။
နိယာမအရ၊ စမ်းသပ်ဓာတုပစ္စည်းကို လူသား epidermis ၏ အလွှာပေါင်းစုံ၊ အလွန်ကွဲပြားခြားနားသော ပုံစံတစ်ခုကို ဖန်တီးရန်အတွက် ယဉ်ကျေးမှု၊ မပြောင်းလဲသော လူသားမှဆင်းသက်လာသော epidermal keratinocytes ပါဝင်သော သုံးဖက်မြင် RhE (ပြန်လည်တည်ဆောက်ထားသော လူသား epidermis) မော်ဒယ်တွင် အသုံးချပါသည်။ ၎င်းတွင် ပုံမှန် basal၊ spiny နှင့် granular layers နှင့် vivo တွင်တွေ့ရသော အဓိက lipid classes များကိုကိုယ်စားပြုသော intercellular lamellar lipid အလွှာများပါရှိသော multilayered stratum corneum ပါဝင်သည်။
ဓာတုဗေဒပစ္စည်းများကြောင့် အရေပြားယားယံခြင်းကို အဓိကအားဖြင့် erythema နှင့် edema တို့မှ ထင်ရှားစေပြီး ဓာတုပစ္စည်းများသည် stratum corneum မှတဆင့် ဖြတ်သန်းသွားကာ keratinocytes နှင့် အခြားအရေပြားဆဲလ်များ၏ အောက်ပိုင်းအလွှာများကို ပျက်စီးသွားသောအခါတွင် ဖြစ်ပေါ်လာသည့် ဖြစ်ရပ်များ၏ရလဒ်ဖြစ်သည်။
ပျက်စီးနေသောဆဲလ်များသည် ရောင်ရမ်းသောဖျန်ဖြေပေးသူများကို ထုတ်လွှတ်ပေးနိုင်သည် သို့မဟုတ် အရေပြားအရေပြားရှိဆဲလ်များ အထူးသဖြင့် သွေးကြောများ၏ stromal နှင့် endothelial ဆဲလ်များပေါ်တွင်လည်း လုပ်ဆောင်သည့် ရောင်ရမ်းသော cascade တစ်ခုကို စတင်နိုင်သည်။ ၎င်းသည် သတိပြုမိသော erythema နှင့် edema ကိုဖြစ်စေသော endothelial ဆဲလ်များ၏ ချဲ့ထွင်မှုနှင့် တိုးများစိမ့်ဝင်နိုင်မှုဖြစ်သည်။ အထူးသဖြင့်၊ RhE-based assay နည်းလမ်းများသည် in vitro assay စနစ်တွင် သွေးကြောချဲ့ခြင်း မရှိသောအခါတွင် ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို အသုံးပြု၍ ကလာပ်စည်း သို့မဟုတ် တစ်ရှူးများ ပျက်စီးခြင်းကဲ့သို့သော cascade အတွင်းရှိ အဖြစ်အပျက်များကို စတင်တိုင်းတာသည်။
RhE မော်ဒယ်တွင်၊ ဆဲလ်များ၏ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို တစ်ရှူးများမှဖယ်ရှားပြီးနောက် အရေအတွက်အားဖြင့်တိုင်းတာသည့် အရေးကြီးသောဆိုးဆေး MTT ကို အပြာရောင်ဖော်မာဇန်ဆားသို့ အင်ဇိုင်းအဖြစ်ပြောင်းလဲခြင်းဖြင့် တိုင်းတာသည် (MTT ကို redox ဖြစ်နိုင်ချေရှိသောလုပ်ဆောင်ချက်အဖြစ် အကဲဖြတ်ရန်အသုံးပြုသည်)။ ညစ်ညမ်းစေသောဓာတုပစ္စည်းများကို သတ်မှတ်ထားသောအဆင့်များအောက်ရှိ ဆဲလ်များ၏ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို လျှော့ချနိုင်မှု (ဆိုလိုသည်မှာ အမျိုးအစား 2 အတွက် အနည်းဆုံး 50 ရာခိုင်နှုန်း) ဖြင့် သတ်မှတ်သည်။ စည်းမျဉ်းစည်းမျဥ်းဘောင်နှင့် ဤစမ်းသပ်မှုနည်းလမ်း၏ အသုံးချနိုင်မှုအပေါ် မူတည်၍ သတ်မှတ်ထားသော အတိုင်းအတာအဆင့်ထက် ဆဲလ်ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို ထုတ်ပေးသည့် စမ်းသပ်ဓာတုပစ္စည်းများကို ထိခိုက်စေခြင်းမရှိဘဲ (ဆိုလိုသည်မှာ အမျိုးအစားမရှိ၊ အနည်းဆုံး 50 ရာခိုင်နှုန်း)။
မပြောင်းလဲသောလူသား keratinocytes ကို epithelium ပြန်လည်တည်ဆောက်ရန်အသုံးပြုသင့်သည်။ လုပ်ဆောင်နိုင်သော stratum corneum အောက်တွင်၊ သက်ရှိ epithelial ဆဲလ်များ (basal အလွှာ၊ stratum spinosum၊ stratum granulosum) အလွှာများစွာရှိရမည်။ cytotoxic ရည်ညွှန်းဓာတုပစ္စည်းများ လျင်မြန်စွာ ထိုးဖောက်ဝင်ရောက်မှုကို ခံနိုင်ရည်ရှိသော ခိုင်ခံ့မှုနှင့်အတူ လုပ်ဆောင်ချက်ဆိုင်ရာ အတားအဆီးတစ်ခုအဖြစ် ဖွဲ့စည်းရန် မရှိမဖြစ် lipid ပရိုဖိုင်ပါရှိသော အလွှာများစွာ ပါဝင်ရမည်၊ ဥပမာ၊ ဆိုဒီယမ် dodeacyl sulfate။
အတားအဆီးလုပ်ဆောင်ချက်ကို သရုပ်ပြရမည်ဖြစ်ပြီး ရည်ညွှန်းဓာတုပစ္စည်းသည် သတ်မှတ်ထားသောထိတွေ့မှုပြီးနောက် တစ်သျှူးများ၏ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို 50 ရာခိုင်နှုန်းလျှော့ချပေးသည့် စူးစိုက်မှုအားဆုံးဖြတ်ခြင်းဖြင့် အကဲဖြတ်နိုင်သည်၊ သို့မဟုတ် ရည်ညွှန်းဓာတုဗေဒအသုံးပြုမှုတွင် ဆဲလ်ရှင်သန်နိုင်စွမ်းကို 50 ရာခိုင်နှုန်းလျှော့ချရန် လိုအပ်သည့်ထိတွေ့ချိန်ကို သတ်မှတ်ခြင်းဖြင့် အကဲဖြတ်နိုင်သည်။ သတ်မှတ်ထားသော၊ ပုံသေအာရုံစူးစိုက်မှုတွင်။ RhE (ပြန်လည်တည်ဆောက်ထားသော လူသား epidermis) မော်ဒယ်၏ ထိန်းသိမ်းမှုဂုဏ်သတ္တိများသည် stratum corneum ပတ်၀န်းကျင်ရှိ အရာများကို သက်ရှိတစ်ရှူးများအဖြစ်သို့ ရွှေ့ပြောင်းခြင်းမှ တားဆီးနိုင်ပြီး အရေပြားနှင့် ထိတွေ့မှုပုံစံကို ညံ့ဖျင်းစေပါသည်။ RhE မော်ဒယ်သည် ဘက်တီးရီးယား၊ ဗိုင်းရပ်စ်၊ mycoplasma သို့မဟုတ် မှိုဆိပ်များ ကင်းစင်ရပါမည်။
ကျွန်ုပ်တို့၏အဖွဲ့အစည်းသည် ကဏ္ဍအသီးသီးရှိ စီးပွားရေးလုပ်ငန်းများအတွက် စမ်းသပ်ခြင်း၊ တိုင်းတာခြင်း၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့် အကဲဖြတ်ခြင်းဆိုင်ရာ လေ့လာမှုများစွာတို့တွင် လေ့ကျင့်သင်ကြားထားသော ကျွမ်းကျင်ဝန်ထမ်းများနှင့် အဆင့်မြင့်နည်းပညာသုံးပစ္စည်းများဖြင့် ကျွန်ုပ်တို့သည် "OECD TG 439 In vitro အရေပြားယားယံခြင်း- ပြန်လည်တည်ဆောက်ထားသောလူသား" တွင် သတ်မှတ်ထားသည့် စမ်းသပ်ဝန်ဆောင်မှုများကိုလည်း ပေးပါသည်။ epidermis test method" စံနှုန်း ပေးသည်။
ရက်ချိန်းယူရန်၊ အသေးစိတ်အချက်အလက်ရယူရန်သို့မဟုတ်အကဲဖြတ်ရန်တောင်းဆိုရန်ကျွန်ုပ်တို့၏ပုံစံကိုဖြည့်ရန်ကျွန်ုပ်တို့အားသင်တောင်းဆိုနိုင်သည်။
