Testovacia metóda OECD 492B pre rekonštruovaný ľudský epitel podobný rohovke (RhCE) na identifikáciu nebezpečenstva pre oči

Norma „OECD 492B Testovacia metóda pre rekonštituovaný ľudský epitel podobný rohovke (RhCE) na identifikáciu nebezpečnosti pre oči“, publikovaná v rámci usmernení OECD o zodpovednom obchodnom správaní pre nadnárodné spoločnosti (usmernenia OECD), opisuje postup in vitro, ktorý umožňuje samoidentifikáciu chemikálií (látok a zmesí), ktoré si nevyžadujú klasifikáciu podľa kategórií nebezpečnosti pre oči GHS OSN (kat. č. kat.), vyžadujú si klasifikáciu pre podráždenie očí (kat. 2) a vyžadujú si klasifikáciu pre vážne poškodenie očí (kat. 1).

Tento postup využíva rekonštruovaný ľudský epitel podobný rohovke (RhCE), ktorý veľmi dobre napodobňuje histologické, morfologické, biochemické a fyziologické vlastnosti ľudského epitelu rohovky. Test hodnotí schopnosť testovanej chemikálie indukovať cytotoxicitu v tkanivovej štruktúre ľudského epitelu podobného rohovke (RhCE), meranú MTT testom. MTT test je kolorimetrická testovacia metóda na hodnotenie bunkovej metabolickej aktivity.

Životaschopnosť tkaniva ľudského rohovkového epitelu (RhCE) po expozícii testovanej chemikálii sa meria enzymatickou premenou vitálneho farbiva MTT na modrú formazánovú soľ MTT živými bunkami tkanív, čo sa potom kvantitatívne meria po odstránení farbiva z tkanív. Cytotoxicita sa meria v rôznych časových bodoch expozície.

Životaschopnosť tkaniva ľudského rohovkového epitelu (RhCE) sa určuje porovnaním s tkanivami ošetrenými negatívnou kontrolnou látkou (percentuálna životaschopnosť) a následne sa použije na odhad potenciálneho očného rizika testovanej chemikálie. Chemikálie, ktoré nevyžadujú klasifikáciu a označovanie podľa BM GHS2, sú definované ako tie, ktoré neznižujú životaschopnosť tkaniva pod určitú prahovú hodnotu (t. j. životaschopnosť tkaniva najmenej 60 percent pre nekategorizované BM GHS).

Testovacia metóda opísaná v norme OECD 492B je prvou samostatnou metódou testovania podráždenia očí bez použitia zvierat, ktorá sa používa na rozlíšenie medzi látkami a zmesami kategórie 1, kategórie 2 a nekategorizovanými látkami GHS. Až donedávna sa riešenie dráždivých látok pre oči kategórie 2 GHS spoliehalo na prístup založený na váhe dôkazov, pretože jediný test in vitro nedokázal rozlíšiť medzi testovanými materiálmi kategórie 1, kategórie 2 a nekategorizovanými materiálmi. So schválením testovacej smernice OECD 492B je teraz možné určiť tieto klasifikácie.

Testované látky boli klasifikované podľa nasledujúcich kategórií nebezpečenstva podráždenia očí podľa Globálne harmonizovaného systému klasifikácie a označovania chemikálií Organizácie Spojených národov (GHS OSN):

• Kategória 1 GHS: Testované látky alebo zmesi, ktoré spôsobujú vážne poškodenie očí alebo stratu zraku, ktorá nie je úplne vratná po jednorazovej expozícii.
• Kategória 2 GHS: Podráždenie očí a zmeny v oku, ktoré sú úplne reverzibilné po jednorazovej expozícii testovanej látke.
• Číslo kategórie GHS: Testované látky, ktoré nie sú klasifikované ako látky s dráždivým účinkom na oči alebo s ohľadom na vážne poškodenie očí, sú definované ako látky, ktoré nespĺňajú klasifikačné požiadavky.

V súčasnosti sa ľudské epitelové tkanivá rohovky ošetrujú testovanými látkami podľa protokolu času do toxicity. Keďže poškodenie buniek rohovky a strata životaschopnosti sú vysoko korelované s nepriaznivými účinkami na funkciu rohovky a zrakovú ostrosť, životaschopnosť tkanív HCE sa meria po expozícii testovanej látke pomocou koncového bodu redukcie životaschopnosti MTT.

Predikčný model pre kategorizáciu podľa systému GHS OSN je nasledovný:

• Čas toxicity TTL pre kvapaliny.
  • Žiadna kategória: Priemerná životaschopnosť tkaniva je po všetkých troch expozíciách menšia ako 50 %.
  • Kategória 2: Akákoľvek iná kombinácia výsledkov použiteľnosti.
  • Kategória 1: Priemerná životaschopnosť tkaniva po všetkých troch expozíciách je maximálne 50 percent.
• Obdobie toxicity TTS pre pevné látky.
  • Nie je k dispozícii žiadna kategória: Priemerná životaschopnosť tkaniva je po 30 minútach expozície viac ako 40 % a po 120 minútach expozície viac ako 60 %.
  • Kategória 2: Akákoľvek iná kombinácia výsledkov použiteľnosti.
  • Kategória 1: Priemerná životaschopnosť tkaniva je maximálne 40 % po 30 minútach expozície a maximálne 60 % po 120 minútach expozície.

Mnoho výrobcov používa normu OECD TG 492B na účely identifikácie a označovania nebezpečenstiev, aby splnili požiadavky rôznych právnych predpisov.

Medzi početnými testami, meraniami, analýzami a hodnoteniami, ktoré naša organizácia poskytuje podnikom v rôznych sektoroch, ponúkame aj testovacie služby definované v norme „OECD 492B Testovacia metóda pre rekonštituovaný ľudský rohovkový epitel (RhCE) na identifikáciu nebezpečnosti pre oči“, pričom využívame vyškolený a odborný personál a moderné technologické vybavenie.