Le « Test d'irritation cutanée EPI-200-SIT » est conçu pour estimer le potentiel d'irritation cutanée des substances d'essai pures dans le contexte de l'identification et de la classification du risque d'irritation cutanée selon le système de classification de l'Union européenne. Puisqu'elle est harmonisée avec l'Union européenne et le Système général harmonisé de classification et d'étiquetage des produits chimiques (SGH), la procédure décrite dans cette norme permet également l'identification des dangers des irritants conformément au SGH.
Cette norme permet de distinguer les irritants de catégorie 2 des non irritants. La méthode de test décrite ne fait pas de distinction entre les sous-catégories non essentielles du SGH, c'est-à-dire qu'elle ne fait pas de distinction entre les irritants de catégorie 2 et de catégorie 3 du SGH.
La méthode décrite dans la norme EPI-200-SIT consiste en une exposition topique du produit chimique d'essai pur à un modèle reconstruit d'épiderme humain, suivie d'un test de viabilité cellulaire. La viabilité cellulaire est mesurée par conversion déshydrogénase du MTT, qui est présent dans les mitochondries cellulaires et converti en un sel de formazan bleu, qui est mesuré quantitativement après retrait des tissus.
La viabilité réduite des tissus exposés aux produits chimiques par rapport aux témoins négatifs (traités à l'eau) est utilisée pour estimer le potentiel d'irritation cutanée. Des études comparatives récentes sur des modèles d'épiderme humain utilisant divers paramètres pour prédire l'irritation cutanée des formulations topiques ont montré que le paramètre MTT présente des avantages distincts par rapport aux paramètres mécaniques tels que la libération.
Le modèle épidermique humain reconstruit est constitué de kératinocytes épidermiques humains normaux cultivés pour former un modèle multicouche hautement différencié d'épiderme humain. Il se compose de couches basales, épineuses et granulaires régulières et d'une couche cornée multicouche contenant des couches lipidiques lamellaires intercellulaires disposées selon des motifs similaires à ceux trouvés dans les tissus vivants. Une description générale des conditions générales et fonctionnelles auxquelles doivent répondre les modèles de peau humaine reconstruits est incluse dans les nouvelles lignes directrices d'essai de l'OCDE (« 431 Corrosion cutanée in vitro : Modèle de peau humaine » et « 439 Irritation cutanée in vitro : Méthode d'essai de l'épiderme humain reconstruit »).
Tous les composants biologiques de l'épiderme et du milieu de culture sont testés par le fabricant pour détecter toute contamination virale, bactérienne, fongique et mycoplasmique. Les résultats devraient se situer dans une plage déterminée par la base de données historique.
En raison du long temps de post-incubation, le test doit être réalisé dans des conditions aseptiques dans une enceinte de sécurité microbiologique (hotte à flux laminaire).
Le test d'irritation cutanée EPI-200-SIT a été développé et validé pour les tests d'irritation cutanée in vitro de produits chimiques, notamment d'ingrédients cosmétiques et pharmaceutiques. Les tests sont effectués sur une période de 60 jours comprenant une pré-incubation, une exposition de 42 minutes, une post-incubation de 4 heures et des tests de viabilité au MTT. Après la récolte des tissus et une préincubation d'une nuit (jour 0), les tissus sont exposés localement à des produits chimiques testés (jour 1), qui peuvent être liquides, semi-solides, solides ou cireux. Trois tissus sont utilisés pour chaque produit chimique testé, un contrôle positif (solution aqueuse à 5 pour cent de dodécylsulfate de sodium) et un contrôle négatif. L'exposition chimique dure 60 minutes, dont 35 minutes les tissus sont conservés dans un incubateur à 37 degrés. Les substances testées sont ensuite éliminées de la surface des tissus par une procédure de lavage approfondie. Les inserts tissulaires sont colorés et transférés sur un milieu frais.
Après une période d'incubation de 24 heures (jour 2), le milieu est changé. Les médias peuvent être enregistrés pour une analyse plus approfondie des cytokines ou d’autres paramètres d’intérêt. Après changement de milieu, les tissus sont incubés pendant 18 heures supplémentaires. Après les 42 heures d'incubation (jour 3), les tissus sont transférés dans une solution jaune de MTT et incubés pendant 3 heures.
Le sel de formazan bleu-violet résultant, formé principalement par le métabolisme mitochondrial, est extrait à l’isopropanol pendant 2 h. La densité optique du formazan extrait est déterminée à l'aide d'un spectrophotomètre. Un produit chimique est classé comme irritant si la viabilité des tissus tombe en dessous de 50 pour cent par rapport aux tissus traités avec un contrôle négatif. Cette procédure peut être utilisée en remplacement complet du test d'irritation cutanée in vivo chez le lapin pour l'identification des dangers et l'étiquetage des produits chimiques conformément aux réglementations de l'Union européenne.
Parmi les nombreuses études de tests, mesures, analyses et évaluations qu'elle propose aux entreprises de divers secteurs, notre organisation fournit également des services de tests définis dans la norme « Test d'irritation cutanée EPI-200-SIT », avec son personnel formé et expert et ses équipements technologiques de pointe. .
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