ASTM E2197-17 Metode Uji Pembawa Cakram Kuantitatif Standar untuk Menentukan Aktivitas Bakterisidal, Virucidal, Fungisida, Mikobakterisida, dan Spoisidal Bahan Kimia

Dalam standar “ASTM E2197-17 Standar metode uji pembawa cakram kuantitatif untuk menentukan aktivitas bakterisida, virus, fungisida, mikobakterisida, dan spoisidal bahan kimia” yang dikembangkan oleh American Society for Testing and Materials (ASTM), baja tahan karat yang disikat mewakili bahan keras, tidak -permukaan lingkungan berpori dan peralatan medis. Untuk mengevaluasi kemampuan menonaktifkan bakteri vegetatif, virus, jamur, mikobakteri dan spora bakteri pada pembawa cakram. Metode pengujian yang digunakan dijelaskan.

Standar ini juga dirancang untuk memiliki survivor dibandingkan dengan rata-rata dari setidaknya tiga pembawa kendali untuk menentukan apakah standar kinerja telah terpenuhi. Untuk evaluasi hasil statistik yang tepat, jumlah organisme yang hidup dalam inokulum uji harus cukup tinggi untuk memperhitungkan standar kinerja dan variasi hasil percobaan. Selain itu, metode pengujian ini tidak melibatkan tindakan menyeka atau menggosok. Oleh karena itu, ini tidak dirancang untuk menguji penghapusan.

Untuk tujuan standar ini, definisi berikut berlaku, selain istilah dan definisi dalam “Terminologi standar ASTM E2756-19 untuk agen antimikroba dan antivirus”:

• Pembawa mengacu pada permukaan atau benda mati yang diinokulasi dengan organisme uji.
• Eluat mengacu pada eluen yang mengandung organisme atau organisme yang diperoleh kembali.
• Eluant adalah larutan apa pun yang tidak berbahaya bagi organisme atau organisme uji dan ditambahkan ke pembawa untuk memulihkan organisme atau organisme tersebut.
• Netralisasi mengacu pada proses pendinginan aktivitas antimikroba suatu zat uji. Hal ini dapat dicapai dengan mengencerkan atau menambahkan satu atau lebih penetral kimia ke dalam campuran organisme atau zat uji.
• Suatu beban tanah adalah suatu larutan dari satu atau lebih zat organik atau anorganik, atau keduanya, yang ditambahkan ke dalam suspensi organisme uji untuk mensimulasikan keberadaan sekresi tubuh, ekskresi, atau zat asing lainnya.
• Organisme uji adalah organisme yang mempunyai ciri-ciri yang memungkinkannya mudah diidentifikasi. Ia juga dapat disebut organisme pengganti, simulan, atau penanda.
• Zat uji merupakan formulasi yang mengandung bahan antimikroba.

Setiap cakram (diameter 1 cm) menampung 10 µL organisme uji dengan beban tanah. Inokulum dikeringkan dan cakram kemudian ditempatkan pada permukaan bawah bagian dalam botol plastik steril sebelum dikontakkan dengan 50 µL pengenceran bahan uji. Waktu kontak dan suhu dapat divariasikan sesuai kebutuhan. Pembawa kontrol menerima 50 µL cairan yang tidak berbahaya bagi organisme uji dan sel inang jika ada, namun ditangani dengan cara yang sama seperti pembawa uji.

Untuk pengujian terhadap bakteri vegetatif, jamur, mikobakteri, dan spora bakteri, zat uji kemudian dinetralkan dan inokulum dielusi. Eluat dan pembilasan selanjutnya dari pembawa dan vial dilewatkan melalui filter membran. Pelat kultur filter diinkubasi, koloni dihitung, dan pengurangan log10 dihitung.

Untuk pengujian virus, pengenceran eluat yang sesuai diinokulasikan ke dalam kultur sel yang cocok, kultur diperiksa untuk sitopatologi/fokus infeksi, yang diperkirakan sebagai jumlah yang paling mungkin atau dihitung sebagai fokus atau plak, dan log10 dihitung.

Rancangan pengujian ini menghilangkan hilangnya organisme hidup akibat pencucian dan dengan demikian memungkinkan untuk menghasilkan data yang valid secara statistik dengan menggunakan pembawa pengujian yang jauh lebih sedikit daripada yang diperlukan untuk metode yang didasarkan pada perkiraan jumlah kemungkinan terbaik yang sederhana.

Ketelitian dalam pengujian dicapai dengan penggunaan beban tanah, topografi mikro permukaan pembawa baja tahan karat yang disikat, dan rasio bahan uji terhadap luas permukaan yang lebih kecil yang umum untuk banyak aplikasi disinfektan. Dengan demikian, zat uji yang sedang dievaluasi menghadapi tantangan yang masuk akal dalam memungkinkan pemulihan organisme uji secara efisien dari pembawa yang diinokulasi. Cakram logam pada pengujian dasar juga kompatibel dengan berbagai macam zat aktif.

Desain pembawa memungkinkan untuk menempatkan volume organisme uji yang diukur secara tepat (10 µL) dan cairan kontrol atau zat uji (50 µL) ke dalam masing-masing wadah.

Inokulum ditempatkan di tengah setiap cakram sementara volume bahan uji menutupi hampir seluruh permukaan cakram, sehingga menghilangkan risiko paparan organisme apa pun.

Dalam semua pengujian kecuali pengujian terhadap virus, penambahan 10 mL eluen/pengencer menghasilkan pengenceran 1:200 zat uji segera pada akhir periode kontak. Meskipun langkah ini saja sudah cukup untuk menghentikan aktivitas mikrobisida dari sebagian besar bahan aktif, protokol pengujian memungkinkan penambahan penetral spesifik ke eluen/pengencer jika diperlukan. Dengan pengecualian virus, langkah filtrasi membran juga memungkinkan seluruh eluat dari pembawa uji untuk diproses dan oleh karena itu menangkap dan selanjutnya mendeteksi organisme hidup dalam jumlah kecil yang mungkin ada. Pembilasan filter membran selanjutnya dengan larutan garam juga mengurangi risiko residu inhibitor terbawa ke dalam media pemulihan.

Di antara banyak studi pengujian, pengukuran, analisis dan evaluasi yang dilakukan untuk bisnis di berbagai sektor, perusahaan kami, dengan staf terlatih dan ahli serta peralatan teknologi canggih, telah mengembangkan "cakram kuantitatif Standar ASTM E2197-17 untuk menentukan bakterisida, virus, aktivitas bahan kimia fungisida, mikobakterisida, dan sposidal". Ini juga menyediakan layanan pengujian yang ditentukan dalam standar "metode uji pembawa".