OECD TG 439 Iritasi Kulit In Vitro: Metode Uji Epidermis Manusia yang Direkonstruksi

Standar “OECD TG 439 Iritasi kulit in vitro: Metode uji epidermis manusia yang direkonstitusi”, yang diterbitkan di bawah pedoman OECD tentang perilaku bisnis yang bertanggung jawab untuk perusahaan multinasional (pedoman OECD) , menjelaskan metode uji in vitro yang digunakan untuk identifikasi bahaya bahan kimia iritan (zat dan campuran) sesuai dengan Sistem Klasifikasi dan Pelabelan Terharmonisasi Global PBB (GHS) Kategori 2.

Metode ini didasarkan pada rekonstruksi epidermis manusia (RhE), yang secara keseluruhan desainnya sangat mirip dengan sifat biokimia dan fisiologis bagian atas kulit manusia. Viabilitas sel diukur dengan konversi enzimatik pewarna penting MTT menjadi garam formazan biru, yang diukur secara kuantitatif setelah ekstraksi dari jaringan. Zat uji yang mengiritasi ditentukan oleh kemampuannya mengurangi viabilitas sel di bawah tingkat ambang batas yang ditentukan (sama dengan 2 persen atau kurang untuk kategori 50). Bahan kimia berwarna juga dapat diuji menggunakan prosedur HPLC (kromatografi cair kinerja tinggi).

Ada tiga metode pengujian tervalidasi yang memenuhi standar OECD TG 439. Tergantung pada kerangka peraturan dan sistem klasifikasi yang digunakan, prosedur ini dapat digunakan untuk menentukan iritasi kulit pada bahan uji sebagai uji pengganti yang berdiri sendiri untuk pengujian iritasi kulit in vivo atau sebagai uji pengganti parsial dalam strategi pengujian berjenjang.

Pada prinsipnya, bahan kimia uji diterapkan secara topikal pada model RhE (rekonstruksi epidermis manusia) tiga dimensi yang terdiri dari keratinosit epidermal turunan manusia yang dikultur dan tidak ditransformasikan untuk menciptakan model epidermis manusia yang berlapis-lapis dan sangat terdiferensiasi. Ini terdiri dari lapisan basal, berduri, dan granular teratur dan stratum korneum berlapis-lapis yang mengandung lapisan lipid pipih antar sel yang mewakili kelas lipid utama serupa dengan yang ditemukan in vivo.

Iritasi kulit akibat bahan kimia dimanifestasikan terutama oleh eritema dan edema dan merupakan hasil dari serangkaian peristiwa yang dimulai ketika bahan kimia melewati stratum korneum dan merusak lapisan bawah keratinosit dan sel kulit lainnya.

Sel yang rusak dapat melepaskan mediator inflamasi atau memulai kaskade inflamasi yang juga bekerja pada sel-sel di dermis, terutama sel stroma dan sel endotel pembuluh darah. Ekspansi dan peningkatan permeabilitas sel endotel inilah yang menghasilkan eritema dan edema. Secara khusus, metode pengujian berbasis RhE mengukur kejadian awal dalam kaskade, seperti kerusakan sel atau jaringan, dengan menggunakan viabilitas sel sebagai pembacaan ketika tidak ada vaskularisasi dalam sistem pengujian in vitro.

Dalam model RhE, viabilitas sel diukur dengan konversi enzimatik pewarna vital MTT menjadi garam formazan biru, yang diukur secara kuantitatif setelah dikeluarkan dari jaringan (MTT digunakan untuk menilai viabilitas sel sebagai fungsi potensial redoks). Bahan kimia yang mengiritasi ditentukan oleh kemampuannya mengurangi kelangsungan hidup sel di bawah tingkat ambang batas yang ditentukan (yaitu, setidaknya 2 persen untuk kategori 50). Tergantung pada kerangka peraturan dan penerapan metode pengujian ini, bahan kimia uji yang menghasilkan viabilitas sel di atas tingkat ambang batas yang ditentukan dapat dianggap tidak menyebabkan iritasi (yaitu, tidak ada kategori, setidaknya 50 persen).

Keratinosit manusia yang tidak berubah harus digunakan untuk merekonstruksi epitel. Di bawah stratum korneum yang fungsional, pasti terdapat banyak lapisan sel epitel hidup (lapisan basal, stratum spinosum, stratum granulosum). Stratum korneum harus berlapis-lapis, mengandung profil lipid esensial untuk membentuk penghalang fungsional dengan ketangguhan untuk menahan penetrasi cepat bahan kimia referensi sitotoksik, misalnya natrium dodeasil sulfat.

Fungsi penghalang harus ditunjukkan dan dapat dievaluasi dengan menentukan konsentrasi di mana bahan kimia referensi mengurangi viabilitas jaringan sebesar 50 persen setelah waktu pemaparan yang tetap, atau dengan menentukan waktu pemaparan yang diperlukan untuk mengurangi viabilitas sel sebesar 50 persen setelah penerapan bahan kimia referensi. pada konsentrasi tertentu dan tetap. Sifat retensi model RhE (rekonstruksi epidermis manusia) seharusnya mencegah material di sekitar stratum korneum bermigrasi ke jaringan hidup, sehingga menghasilkan pemodelan paparan kulit yang buruk. Model RhE harus bebas dari kontaminasi bakteri, virus, mikoplasma, atau jamur.

Di antara berbagai studi pengujian, pengukuran, analisis, dan evaluasi yang disediakan organisasi kami untuk bisnis di berbagai sektor, dengan staf terlatih dan ahli serta peralatan teknologi canggih, kami juga menyediakan layanan pengujian yang didefinisikan dalam "OECD TG 439 Iritasi kulit in vitro: Manusia yang direkonstruksi metode uji epidermis" standar. memberi.