Panduan Standar ASTM E2315 untuk Mengevaluasi Aktivitas Antimikroba Menggunakan Prosedur Pembunuhan Waktu

Standar "ASTM E2315 Standard Guide for Evaluation of Antimicrobial Activity Using Time-Killing Procedure" yang diterbitkan oleh American Society for Testing and Materials (ASTM) memberikan contoh metode yang mengukur perubahan populasi mikroorganisme aerobik selama periode pengambilan sampel tertentu ketika bahan uji antimikroba tersedia. Standar ini menyediakan berbagai pilihan untuk pemilihan dan pertumbuhan organisme, persiapan inokulum, waktu pengambilan sampel, dan suhu.

Ketika teknik ini diterapkan sebagai metode uji spesifik, variabel-variabel yang disebutkan di atas harus distandarisasi. Aktivitas antimikroba dari bahan-bahan spesifik yang diukur dengan teknik ini dapat bervariasi secara signifikan tergantung pada variabel yang dipilih. Penting untuk memahami keterbatasan pengujian in vitro, terutama ketika membandingkan hasil uji yang dilakukan dengan parameter yang berbeda. Misalnya, hasil uji dari mikroorganisme yang membutuhkan suplemen pertumbuhan atau kondisi inkubasi tertentu mungkin tidak dapat dibandingkan secara langsung dengan hasil uji organisme yang dievaluasi tanpa kondisi yang ditentukan. Pengetahuan tentang teknik mikrobiologi diperlukan untuk prosedur ini.

Prosedur ini dapat digunakan untuk mengevaluasi pengurangan populasi mikroba organisme uji secara in vitro setelah paparan bahan uji.

Uji waktu bunuh suspensi adalah uji laboratorium yang mengukur kinerja antimikroba sampel cair dalam jangka waktu singkat. Uji bunuh mengukur pengurangan jumlah mikroorganisme yang diketahui dalam vaksin selama waktu kontak tertentu. Metode ini menentukan tingkat pembunuhan efektif produk jadi dan biasanya dinyatakan sebagai persentase (misalnya, membunuh 99,9% bakteri dalam 30 detik).

Uji batas waktu standar dapat dilakukan pada semua produk jadi berbentuk cair, seperti pembersih tangan, produk pembersih disinfektan, sabun cair antibakteri, obat kumur, dan banyak lagi.

Waktu kontak yang dipilih untuk pengujian suspensi harus sesuai dengan jenis produk akhir yang diuji. Misalnya, pembersih tangan mungkin diuji dengan waktu kontak 30 detik, sementara pembersih permukaan keras mungkin diuji untuk waktu yang lebih lama, tergantung pada petunjuk penggunaan.

Uji bunuh membutuhkan sampel produk cair seberat 250 g. Sampel diinokulasi dengan kultur campuran empat kultur bakteri standar. Pada interval tertentu (misalnya, 30 detik, 1 menit, 2 menit, 3 menit, dan 5 menit), 1 g sampel yang telah diinokulasi diambil dan dimasukkan ke dalam pengencer biostatik untuk menonaktifkan biosida yang terdapat dalam sampel. Pengencer kemudian ditempatkan dalam media yang sesuai dan diinkubasi, sehingga jumlah mikroba yang bertahan hidup dapat dihitung menggunakan metode hitungan lempeng.

ASTM E2315 merupakan alat penting untuk mengevaluasi efektivitas agen antimikroba. Standar ini mencakup metode untuk menilai penurunan populasi mikroba setelah paparan bahan uji antimikroba in vitro dan perubahan populasi mikroorganisme aerobik selama periode tertentu. Standar ini dirancang untuk mengevaluasi efektivitas produk-produk seperti disinfektan, pembersih tangan, biosida, dan produk pembersih. Standar ini menekankan fleksibilitas dengan menyediakan beragam pilihan untuk pemilihan organisme, kondisi pertumbuhan, persiapan inokulum, waktu pengambilan sampel, dan suhu untuk memenuhi berbagai kebutuhan pengujian. Namun, standar ini juga menekankan pentingnya standarisasi variabel-variabel ini untuk memastikan hasil yang konsisten dan sebanding ketika metode ini digunakan sebagai uji spesifik.

Fitur utama dari standar ini adalah:

• Penerapan: Cocok untuk menguji zat antimikroba cair atau padat yang membentuk larutan homogen dalam air.
• Mikroorganisme: Berfokus pada mikroorganisme aerobik, dengan pilihan termasuk bakteri, jamur, dan ragi seperti Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans.
• Variabel: Memungkinkan penyesuaian kondisi pengujian (misalnya, suhu, interval waktu), tetapi memerlukan standarisasi untuk pengujian tertentu guna memastikan pengulangan.
• Keterbatasan: Hasil dapat bervariasi tergantung pada variabel yang dipilih, dan perbandingan antara pengujian dalam kondisi yang berbeda (misalnya, mikroorganisme yang memerlukan suplemen pertumbuhan khusus) mungkin tidak valid.

ASTM E2315 menjelaskan prosedur time-kill yang mengukur secara kuantitatif penurunan populasi mikroba seiring waktu. Proses ini mencakup langkah-langkah berikut:

• Penyiapan suspensi mikroba: Suspensi mikroba standar disiapkan menggunakan strain representatif atau standar yang sesuai untuk penggunaan produk yang dimaksud.
• Pemaparan terhadap bahan uji: Bahan uji antimikroba (atau pengencerannya) dicampur dengan suspensi mikroba dalam kondisi terkendali seperti suhu tertentu (misalnya 25 derajat, alternatif seperti 22 derajat, 30 derajat atau 38 derajat tergantung pada aplikasinya).
• Pengambilan sampel dan netralisasi: Sampel diambil pada interval waktu yang telah ditentukan (misalnya, 15 detik, 30 detik, 60 detik, atau lebih lama) dan dinetralkan untuk menghambat aktivitas antimikroba. Netralisasi memastikan penghitungan mikroorganisme yang bertahan hidup secara akurat.
• Kuantifikasi: Mikroorganisme yang bertahan hidup dihitung menggunakan teknik penghitungan lempeng dan pengurangannya dihitung sebagai pengurangan log10 atau persentase pengurangan dibandingkan dengan populasi mikroba awal.

Karena standar ini tidak menetapkan kriteria lulus/gagal, pengguna dapat menentukan efikasi berdasarkan kebutuhan spesifik mereka. Setiap konsentrasi uji biasanya dilakukan dua kali untuk memastikan keandalan.

Standar ASTM E2315 digunakan secara luas untuk mengevaluasi efektivitas antimikroba suatu produk dan menyediakan data penting untuk pengembangan produk, validasi, dan kepatuhan regulasi. Pentingnya standar ini terletak pada kemampuannya untuk:

• Mengukur efektivitas antimikroba: Pengujian pemusnahan berbasis waktu mengukur seberapa efektif agen antimikroba mengurangi populasi mikroba dan memberikan wawasan tentang tingkat pemusnahan terhadap bakteri, jamur, dan patogen lainnya.
• Mendukung pengembangan produk: Produsen menggunakan pengujian ini untuk mengoptimalkan formulasi dan memastikan produk memenuhi harapan kinerja sebelum dirilis ke pasar.
• Memastikan kepatuhan peraturan: Protokol standar membantu produsen menunjukkan kepatuhan terhadap standar industri, meningkatkan keandalan produk di pasar global.
• Penerapan yang luas: Metode ini dapat diterapkan di semua sektor, termasuk perawatan kesehatan (misalnya disinfektan), produk konsumen (misalnya pembersih tangan), dan aplikasi industri (misalnya biosida).

Standar ini juga mengakui keterbatasan pengujian in vitro, yang menyatakan bahwa hasilnya mungkin tidak secara langsung mencerminkan kondisi dunia nyata dan bahwa perbandingan antara pengujian dengan parameter yang berbeda harus dilakukan dengan hati-hati.

ASTM E2315 menekankan bahwa pengguna harus menentukan praktik keselamatan dan kesehatan kerja yang tepat karena prosedur tersebut mungkin melibatkan zat, proses, atau peralatan berbahaya. Pengguna juga harus menentukan penerapan persyaratan peraturan sebelum melakukan pengujian.

Oleh karena itu, standar ASTM E2315 merupakan elemen fundamental dalam mengevaluasi efektivitas produk antimikroba. Metodologinya yang fleksibel namun ketat mendukung pengembangan produk dan kepatuhan regulasi dengan memungkinkan produsen mengevaluasi pengurangan mikroba dalam kondisi terkendali. Dengan menyediakan pendekatan standar dan memastikan hasil yang andal dan dapat direproduksi, standar ini telah menjadi alat yang sangat diperlukan bagi industri yang berupaya memerangi kontaminasi mikroba secara efektif.

Organisasi kami, yang telah melayani selama bertahun-tahun dan dengan cermat mengikuti perkembangan global dalam sains dan teknologi, mempekerjakan tim yang terampil dan infrastruktur yang luas untuk melakukan pengujian, pengukuran, dan analisis di berbagai bidang untuk bisnis di semua sektor. Dalam konteks ini, kami juga menyediakan layanan pengujian sesuai dengan Panduan Standar ASTM E2315 untuk Penilaian Aktivitas Antimikroba Menggunakan Prosedur Time Killing.