Стандартен метод за изпитване ASTM E2180-18 за определяне на активността на антимикробни агенти, включени в полимерни или хидрофобни материали

Стандартът „ASTM E2180-18 Стандартен тест за определяне на активността на антимикробни агенти, включени в полимерни или хидрофобни материали“, публикуван от Американското дружество за изпитване и материали (ASTM), описва метод за изпитване, използван за оценка (количествено) на антимикробната активност на агенти, включени или свързани с предимно плоски (двуизмерни) хидрофобни или полимерни повърхности. Този метод се фокусира предимно върху оценката на антибактериалната активност, въпреки че други микроорганизми, като дрожди и гъбични конидии, също могат да бъдат тествани с него.

Инокулационният носител е агарова суспензия, която намалява повърхностното напрежение на физиологичния разтвор инокулационен носител и позволява образуването на псевдобиофилм, което осигурява по-равномерен контакт на инокулума с тестовата повърхност. Този метод на изпитване улеснява тестването на хидрофобни повърхности, използвайки клетки, поддържани в матрица от агарова суспензия. Този метод на изпитване обаче не е подходящ за определяне на активността срещу биофилмни клетки, които са генетично и метаболитно различни от планктонните клетки, използвани в този тест.

Описаният метод за изпитване може да потвърди наличието на антимикробна активност в пластмаси или хидрофобни повърхности и позволява определянето на количествени разлики в антимикробната активност между необработени пластмаси или полимери и тези, съдържащи свързани или включени нискоразтворими във вода антимикробни агенти. Могат да се направят сравнения и между броя на оцелелите върху третирани с консерванти и контролни хидрофобни повърхности.

Този метод позволява също така определяне на срока на годност или дългосрочната трайност на антимикробното третиране, което може да се постигне чрез тестване както на неизмити, така и на измити проби за определен интервал от време. Въпреки това, за прилагането на тези методи за изпитване са необходими познания за микробиологични техники.

Накратко, този метод на изпитване може да се използва за оценка на ефективността на антимикробни средства, включени или свързани в хидрофобни материали като пластмаси, епоксидни смоли и други твърди повърхности. Бактериалният инокулум на водна основа остава в тесен, равномерен контакт с третирания материал като псевдобиофилм. Процентното намаление на популациите на оцелели заразени бактериални клетки на 24-ия час се определя в сравнение с тези от нетретирана контрола. Хидрофобният субстрат може да бъде тестван многократно с течение на времето, за да се оцени персистиращата антимикробна активност.

За целите на този стандарт се прилагат следните термини и определения:

• Агаровата суспензия е полужелатиноподобна течност, образувана, когато 3 g/L агар-агар се добавят към 0,85% физиологичен разтвор.
• В микробиологията ваксината е образец, състоящ се от живи спори, бактерии, едноклетъчни организми или друг жив материал, дрожди или многоклетъчни нишковидни гъби, или комбинация от два или повече вида микроорганизми, който се поставя в тестова среда или проба, която ще бъде тествана, за да се подпомогне микробният растеж или да се изследват нейните антимикробни свойства.
• Носителят на инокулум е разтворът-носител, използван за пренасяне на инокулума към определена проба или обект.
• Неутрализиращата вода за възстановяване е течната среда за растеж, използвана за неутрализиране на ефектите на тестовия антимикробен агент.

Този метод включва инокулиране на разтопена (45 градуса) агарова суспензия със стандартизирана бактериална клетъчна култура. Тънък слой (0,5–1,0 mL) от инокулираната агарова суспензия се пипетира върху тестовия и нетретирания контролен материал (използват се минимум три проби). След определеното време за контакт (обикновено се използва 24 часа), оцелелите микроорганизми се възстановяват чрез елуиране на инокулума от агарова суспензия от тестовия субстрат в неутрализиращия бульон и се екстрахират чрез методи, които осигуряват пълно отстраняване на инокулума от тестваното вещество (напр. ултразвукова обработка, вортексиране или ръчна екстракция, т.е. стомахер).

Правят се серийни разреждания, след което от всяко разреждане се правят плаки за изливане или разстилане. Агаровите плаки и разреждащите бульони се инкубират в продължение на 48-62 часа при определена температура в зависимост от оптималната температура за тествания организъм. Бактериалните колонии от всяка серия разреждания се преброяват и записват. Изчислява се процентът на намаляване на бактериите в третираните и нетретираните проби.

Този метод може да се използва за оценка на ефективността на комбинирани/свързани антимикробни средства върху хидрофобни материали като пластмаси, епоксидни смоли и други твърди повърхности. Бактериалният инокулум на водна основа остава в тесен, равномерен контакт с третирания материал като псевдобиофилм. Процентното намаление на оцелелите популации от заразени бактериални клетки на 24-ия час се определя в сравнение с тези от нетретирана контрола. Хидрофобният субстрат може да бъде тестван многократно с течение на времето, за да се оцени персистиращата антимикробна активност.

Нашата организация, която от години се стреми да подкрепя бизнеса от всеки сектор с широк спектър от тестове, измервания, анализи и оценки, разполага със силен екип, който следи отблизо развитието в света в областта на науката и технологиите и непрекъснато се усъвършенства. В този контекст, на предприятията се предоставят и услуги за тестване в съответствие със стандарта „ASTM E2180-18 Стандартен тест за определяне на активността на антимикробни вещества, включени в полимерни или хидрофобни материали“.