Стандартное руководство ASTM E2315 по оценке антимикробной активности с использованием процедуры Time-Killing

Стандарт «ASTM E2315 Standard Guide for Evaluation of Antimicrobial Activity Using Time-Killing Procedure», опубликованный Американским обществом по испытаниям и материалам (ASTM), представляет собой пример метода, измеряющего изменения в популяциях аэробных микроорганизмов в течение заданного периода отбора проб при наличии материалов для испытаний на антимикробную активность. Этот стандарт предусматривает различные варианты выбора и роста микроорганизмов, подготовки инокулята, времени отбора проб и температуры.

При применении данной методики в качестве метода специфического тестирования крайне важно стандартизировать упомянутые выше переменные. Антимикробная активность конкретных материалов, измеряемая с помощью этой методики, может значительно варьироваться в зависимости от выбранных переменных. Важно понимать ограничения испытаний in vitro, особенно при сравнении результатов испытаний, проведенных с различными параметрами. Например, результаты испытаний микроорганизмов, требующих добавок для роста или определенных условий инкубации, могут быть несопоставимы с результатами испытаний организмов, оцениваемых без указанных условий. Для этой процедуры необходимо знание микробиологических методов.

Эту процедуру можно использовать для оценки in vitro снижения микробной популяции тестовых организмов после воздействия тестового материала.

Тест на бактерицидное действие в суспензии — это лабораторный тест, измеряющий антимикробную активность жидкого образца в течение короткого периода времени. Тест измеряет снижение количества известных микроорганизмов за определенное время контакта. Этот метод определяет эффективную скорость уничтожения бактерий готовым продуктом и обычно выражается в процентах (например, уничтожает 99,9% бактерий за 30 секунд).

Стандартный тест на уничтожение микроорганизмов можно проводить на любом готовом жидком продукте, например, на дезинфицирующих средствах для рук, дезинфицирующих чистящих средствах, антибактериальном жидком мыле, ополаскивателях для полости рта и многом другом.

Время воздействия, выбранное для проверки времени воздействия суспензии, должно соответствовать типу тестируемого готового продукта. Например, дезинфицирующее средство для рук можно тестировать в течение 30 секунд, а чистящее средство для твёрдых поверхностей — в течение более длительного времени, в зависимости от инструкции по применению.

Для проведения теста на уничтожение микроорганизмов требуется образец жидкого продукта массой 250 г. Образец инокулируется смесью четырёх стандартных бактериальных культур. Через определённые интервалы времени (например, 30 секунд, 1 минуту, 2 минуты, 3 минуты и 5 минут) 1 г инокулированного образца отбирается и помещается в биостатический разбавитель для инактивации биоцидов, присутствующих в образце. Затем разбавитель помещается в подходящую среду и инкубируется, что позволяет количественно определить количество выживших микробов методом чашечного подсчёта.

Стандарт ASTM E2315 является важнейшим инструментом оценки эффективности антимикробных препаратов. Этот стандарт включает метод оценки сокращения численности микробных популяций при воздействии материалов для испытаний на антимикробность in vitro и изменения численности аэробных микроорганизмов в течение определенного периода времени. Этот стандарт разработан для оценки эффективности таких продуктов, как дезинфицирующие средства, средства для рук, биоциды и чистящие средства. Этот стандарт подчёркивает гибкость, предоставляя различные варианты выбора микроорганизмов, условий роста, подготовки инокулята, времени отбора проб и температур для удовлетворения различных потребностей в испытаниях. Однако он подчёркивает важность стандартизации этих переменных для обеспечения единообразных и сопоставимых результатов при использовании метода в качестве специфического теста.

Основными особенностями настоящего стандарта являются:

• Применимость: Подходит для тестирования жидких или твердых антимикробных средств, образующих однородный раствор в воде.
• Микроорганизмы: основное внимание уделяется аэробным микроорганизмам, включая бактерии, грибки и дрожжи, такие как Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans.
• Переменные: позволяют настраивать условия испытаний (например, температуру, временные интервалы), но требуют стандартизации для конкретных испытаний, чтобы гарантировать повторяемость.
• Ограничения: Результаты могут различаться в зависимости от выбранных переменных, а сравнения между тестами в разных условиях (например, микроорганизмы, требующие специальных добавок для роста) могут быть недействительными.

В стандарте ASTM E2315 описана процедура «time-kill», которая позволяет количественно измерить сокращение популяции микроорганизмов с течением времени. Процесс включает следующие этапы:

• Приготовление микробной суспензии: Стандартную микробную суспензию готовят с использованием репрезентативных или стандартных штаммов, подходящих для предполагаемого использования продукта.
• Воздействие тестового материала: Тестовый антимикробный материал (или его разбавленный раствор) смешивают с микробной суспензией в контролируемых условиях, таких как определенная температура (например, 25 градусов, альтернативные варианты, такие как 22 градуса, 30 градусов или 38 градусов, в зависимости от применения).
• Отбор проб и нейтрализация: пробы отбираются через заданные интервалы времени (например, 15 секунд, 30 секунд, 60 секунд или дольше) и нейтрализуются для подавления антимикробной активности. Нейтрализация обеспечивает точный подсчёт выживших микроорганизмов.
• Количественная оценка: выжившие микроорганизмы подсчитываются с помощью метода чашечного подсчета, а уменьшение рассчитывается как логарифмическое уменьшение или процентное уменьшение по сравнению с исходной популяцией микроорганизмов.

Поскольку в этом стандарте не указаны критерии соответствия/несоответствия, он позволяет пользователям определять эффективность в соответствии со своими конкретными потребностями. Для обеспечения достоверности каждая тестовая концентрация обычно проводится дважды.

Стандарт ASTM E2315 широко используется для оценки антимикробной эффективности продуктов и предоставляет критически важные данные для разработки, валидации и соответствия продукта нормативным требованиям. Его важность заключается в следующем:

• Измерение эффективности противомикробных препаратов: Тестирование уничтожения микроорганизмов на основе временных рамок позволяет определить, насколько эффективно противомикробный препарат снижает популяции микроорганизмов, а также дает представление о показателях уничтожения бактерий, грибков и других патогенов.
• Поддержка разработки продукции: производители используют это тестирование для оптимизации рецептур и обеспечения соответствия продукции ожидаемым характеристикам до ее выпуска на рынок.
• Обеспечение соответствия нормативным требованиям: стандартизированный протокол помогает производителям демонстрировать соответствие отраслевым стандартам, повышая надежность продукции на мировых рынках.
• Широкая применимость: этот метод может применяться во всех секторах, включая здравоохранение (например, дезинфицирующие средства), потребительские товары (например, дезинфицирующие средства для рук) и промышленные применения (например, биоциды).

В этом стандарте также признаются ограничения тестирования in vitro и указывается, что результаты могут не отражать напрямую реальные условия, а сравнения между тестами с разными параметрами следует проводить с осторожностью.

В стандарте ASTM E2315 подчёркивается, что пользователи должны определить соответствующие меры безопасности и охраны труда, поскольку процедура может включать опасные вещества, процессы или оборудование. Перед проведением испытаний пользователи также должны определить применимость нормативных требований.

В результате стандарт ASTM E2315 стал основополагающим элементом оценки эффективности антимикробных препаратов. Его гибкая, но строгая методология способствует разработке продукции и соблюдению нормативных требований, позволяя производителям оценивать степень снижения микробной контаминации в контролируемых условиях. Предлагая стандартизированный подход и гарантируя надежные и воспроизводимые результаты, этот стандарт стал незаменимым инструментом для отраслей, стремящихся эффективно бороться с микробным загрязнением.

Наша организация, работающая на протяжении многих лет и внимательно следящая за мировыми достижениями в области науки и технологий, располагает квалифицированной командой и обширной инфраструктурой для проведения испытаний, измерений и анализа в широком спектре областей для предприятий всех секторов. В связи с этим мы также предоставляем услуги по испытаниям в соответствии со стандартом ASTM E2315 «Руководство по оценке антимикробной активности с использованием метода временного уничтожения микроорганизмов».