يصف معيار "OECD TG 439 In vitro skin harmitis: Reconformed human epidermis test method"، المنشور بموجب إرشادات منظمة التعاون الاقتصادي والتنمية بشأن السلوك التجاري المسؤول للشركات متعددة الجنسيات (إرشادات منظمة التعاون الاقتصادي والتنمية) ، طريقة اختبار في المختبر تستخدم لتحديد مخاطر المواد الكيميائية المهيجة (المواد والخلائط) وفقًا للفئة 2 من نظام التصنيف والوسم العالمي المنسق للأمم المتحدة (GHS).
تعتمد هذه الطريقة على البشرة البشرية المعاد بناؤها (RhE)، والتي تحاكي في تصميمها العام الخصائص الكيميائية الحيوية والفسيولوجية للأجزاء العلوية من جلد الإنسان. يتم قياس بقاء الخلية عن طريق التحويل الأنزيمي للصبغة الحيوية MTT إلى ملح الفورمازان الأزرق، والذي يتم قياسه كميًا بعد استخلاصه من الأنسجة. يتم تعريف المواد الاختبارية المهيجة من خلال قدرتها على تقليل قابلية الخلية للخلايا إلى ما دون مستويات العتبة المحددة (ما يعادل 2 بالمائة أو أقل للفئة 50). يمكن أيضًا اختبار المواد الكيميائية الملونة باستخدام إجراء HPLC (التحليل اللوني السائل عالي الأداء).
هناك ثلاث طرق اختبار تم التحقق من صحتها وتتوافق مع معيار OECD TG 439. اعتمادًا على الإطار التنظيمي ونظام التصنيف المستخدم، يمكن استخدام هذا الإجراء لتحديد تهيج الجلد الناتج عن مواد الاختبار كاختبار بديل مستقل لاختبار تهيج الجلد في الجسم الحي أو كاختبار بديل جزئي ضمن استراتيجية اختبار متدرجة.
من حيث المبدأ، يتم تطبيق مادة الاختبار الكيميائية موضعيًا على نموذج RhE ثلاثي الأبعاد (البشرة البشرية المعاد بناؤها) يتكون من خلايا كيراتينية جلدية مستنبتة وغير متحولة ومشتقة من الإنسان لإنشاء نموذج متعدد الطبقات ومتباين للغاية للبشرة البشرية. وهو يتألف من طبقات قاعدية وشوكية وحبيبية منتظمة وطبقة قرنية متعددة الطبقات تحتوي على طبقات دهنية صفائحية بين الخلايا تمثل فئات الدهون الرئيسية المشابهة لتلك الموجودة في الجسم الحي.
يتجلى تهيج الجلد الناتج عن المواد الكيميائية في المقام الأول من خلال الحمامي والوذمة وهو نتيجة لسلسلة من الأحداث التي تبدأ عندما تمر المواد الكيميائية عبر الطبقة القرنية وتلحق الضرر بالطبقات السفلية من الخلايا الكيراتينية وخلايا الجلد الأخرى.
يمكن للخلايا التالفة أن تطلق وسائط التهابية أو تبدأ سلسلة التهابية تعمل أيضًا على الخلايا الموجودة في الأدمة، وخاصة الخلايا اللحمية والبطانية للأوعية الدموية. إن توسع الخلايا البطانية وزيادة نفاذيتها هو الذي ينتج الحمامي والوذمة الملحوظة. على وجه الخصوص، تقيس طرق الفحص المستندة إلى RhE بدء الأحداث في السلسلة، مثل تلف الخلايا أو الأنسجة، وذلك باستخدام بقاء الخلية كقراءة عندما لا يكون هناك أوعية دموية في نظام الفحص في المختبر.
في نموذج RhE، يتم قياس بقاء الخلية عن طريق التحويل الأنزيمي للصبغة الحيوية MTT إلى ملح الفورمازان الأزرق، والذي يتم قياسه كميًا بعد إزالته من الأنسجة (يتم استخدام MTT لتقييم قابلية الخلية للخلايا كدالة لإمكانات الأكسدة والاختزال). يتم تعريف المواد الكيميائية المهيجة من خلال قدرتها على تقليل بقاء الخلية تحت مستويات العتبة المحددة (أي 2 بالمائة على الأقل للفئة 50). اعتمادًا على الإطار التنظيمي وقابلية تطبيق طريقة الاختبار هذه، يمكن اعتبار مواد الاختبار الكيميائية التي تنتج حيوية الخلية فوق مستوى عتبة محدد غير مهيجة (أي بدون فئة، على الأقل 50 بالمائة).
وينبغي استخدام الخلايا الكيراتينية البشرية غير المتحولة لإعادة بناء الظهارة. تحت الطبقة القرنية الوظيفية، يجب أن يكون هناك العديد من طبقات الخلايا الظهارية الحية (الطبقة القاعدية، الطبقة الشائكة، الطبقة الحبيبية). يجب أن تكون الطبقة القرنية متعددة الطبقات، وتحتوي على ملف الدهون الأساسي لتشكيل حاجز وظيفي ذو صلابة لمقاومة الاختراق السريع للمواد الكيميائية المرجعية السامة للخلايا، على سبيل المثال، كبريتات دودياسيل الصوديوم.
يجب إثبات وظيفة الحاجز ويمكن تقييمها من خلال تحديد التركيز الذي تقلل فيه المادة الكيميائية المرجعية من صلاحية الأنسجة بنسبة 50 بالمائة بعد وقت تعرض محدد، أو من خلال تحديد وقت التعرض المطلوب لتقليل قابلية الخلية للخلايا بنسبة 50 بالمائة عند تطبيق المادة الكيميائية المرجعية. بتركيز محدد وثابت. يجب أن تمنع خصائص الاحتفاظ بنموذج RhE (البشرة البشرية المُعاد بناؤها) المواد الموجودة حول الطبقة القرنية من الانتقال إلى الأنسجة الحية، مما يؤدي إلى ضعف نمذجة تعرض الجلد. يجب أن يكون نموذج RhE خاليًا من التلوث البكتيري أو الفيروسي أو الميكوبلازما أو الفطريات.
من بين العديد من دراسات الاختبار والقياس والتحليل والتقييم التي تقدمها منظمتنا للشركات في مختلف القطاعات، من خلال موظفيها المدربين والخبراء والمعدات التكنولوجية المتقدمة، فإننا نقدم أيضًا خدمات الاختبار المحددة في "OECD TG 439 تهيج الجلد في المختبر: الإنسان المعاد تشكيله" طريقة اختبار البشرة" القياسية. يعطي.
يمكنك أن تطلب منا ملء النموذج الخاص بنا للحصول على موعد ، أو للحصول على معلومات أكثر تفصيلاً أو لطلب تقييم.
