In Vitro 3T3 NRU Phototoxizitätstest (OECD 432)

Phototoxizität ist definiert als eine toxische Reaktion auf eine dem Körper zugeführte Substanz, die nach anschließender Lichteinwirkung auftritt oder verstärkt wird oder die durch Hautbestrahlung nach systemischer Verabreichung einer Substanz hervorgerufen wird.

Der In-vitro-3T3-NRU-Phototoxizitätstest wird verwendet, um das phototoxische Potenzial einer Testsubstanz nachzuweisen, das durch die angeregte Chemikalie nach Lichteinwirkung induziert wird. Der Test bewertet die Photozytotoxizität anhand der relativen Abnahme der Lebensfähigkeit von Zellen, die der Chemikalie in Anwesenheit und Abwesenheit von Licht ausgesetzt sind. Durch diesen Test identifizierte Substanzen können nach systemischer Anwendung und Verteilung auf der Haut oder nach topischer Anwendung in vivo phototoxisch sein. Definitionen für diese Testmethode sind im Anhang des OECD-Verfahrens 432 enthalten.

Viele Arten von Chemikalien verursachen phototoxische Wirkungen. Ihr gemeinsames Merkmal ist ihre Fähigkeit, Lichtenergie im Bereich des Sonnenlichts zu absorbieren. Nach dem ersten Hauptsatz der Photochemie erfordert die Photoreaktion eine ausreichende Absorption des Lichtquants. Bevor biologische Tests in Erwägung gezogen werden, muss daher das Absorptionsspektrum der OECD-Testchemikalie bestimmt werden.

Diese Testmethode ist nicht darauf ausgelegt, andere nachteilige Wirkungen durch die kombinierte Wirkung einer Chemikalie und Licht vorherzusagen. Darüber hinaus ist dieser Test nicht darauf ausgelegt, indirekte Mechanismen der Phototoxizität, die Auswirkungen von Metaboliten der Testsubstanz oder die Auswirkungen von Gemischen zu untersuchen.

Der In-vitro-3T3-NRU-Phototoxizitätstest basiert auf dem Vergleich der Zytotoxizität einer Chemikalie, wenn sie in Anwesenheit und Abwesenheit einer nicht zytotoxischen Dosis simulierten Sonnenlichts getestet wird. Die Zytotoxizität in diesem Test wird als konzentrationsabhängige Abnahme der Aufnahme des Vitalfarbstoffs Neutralrot ausgedrückt, gemessen 24 Stunden nach Behandlung mit der Prüfchemikalie und Bestrahlung. NR ist ein schwacher kationischer Farbstoff, der leicht ohne Diffusion in Zellmembranen eindringt und sich in Lysosomen innerhalb der Zelle anreichert. Veränderungen in der Zelloberfläche der fragilen lysosomalen Membran führen zu lysosomaler Fragilität und anderen Veränderungen, die allmählich irreversibel werden. Solche Veränderungen führen zu einer verminderten Aufnahme und Bindung von NR. Somit ist es möglich, zwischen lebenden, beschädigten oder toten Zellen zu unterscheiden, was die Grundlage dieses Tests ist.

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