OECD TG 439 Ин витро иритација на кожата: Реконструиран метод за тестирање на човечки епидермис

Стандардот „OECD TG 439 In vitro иритација на кожа: Метод за тестирање на реконституиран човечки епидермис“, објавен според упатствата на OECD за одговорно деловно однесување за мултинационални компании (OECD упатства) , опишува метод за тестирање in vitro што се користи за идентификација на опасности од иритирачки хемикалии (супстанции и смеси) во согласност со категоријата 2 на Глобалниот хармонизиран систем за класификација и означување (GHS) на ООН.

Овој метод се заснова на реконструиран човечки епидермис (RhE), кој во својот целокупен дизајн тесно ги имитира биохемиските и физиолошките својства на горните делови на човечката кожа. Одржливоста на клетките се мери со ензимска конверзија на виталната боја МТТ во сина формазанска сол, која се мери квантитативно по екстракција од ткивата. Иритирачките супстанци за испитување се дефинирани со нивната способност да ја намалат одржливоста на клетките под дефинираните нивоа на праг (еднакво на 2 проценти или помалку за категорија 50). Обоените хемикалии, исто така, може да се тестираат со помош на HPLC (течна хроматографија со високи перформанси).

Постојат три потврдени методи за тестирање кои се во согласност со стандардот OECD TG 439. Во зависност од употребената регулаторна рамка и системот за класификација, оваа постапка може да се користи за да се одреди иритацијата на кожата на испитуваните супстанци како самостоен сурогат тест за in vivo тестирање на иритација на кожата или како делумен сурогат тест во рамките на стратегија за тестирање на нивоа.

Во принцип, хемикалијата за тестирање се применува локално на тродимензионален RhE (реконструиран човечки епидермис) модел кој се состои од култивирани, нетрансформирани епидермални кератиноцити добиени од човек за да се создаде повеќеслоен, високо диференциран модел на човечкиот епидермис. Се состои од правилни базални, шилести и зрнести слоеви и повеќеслоен роговиден слој кој содржи меѓуклеточни ламеларни липидни слоеви кои ги претставуваат главните липидни класи слични на оние што се наоѓаат in vivo.

Хемиска иритација на кожата се манифестира првенствено со еритем и едем и е резултат на каскада настани што започнуваат кога хемикалиите минуваат низ роговиден слој и ги оштетуваат долните слоеви на кератиноцитите и другите клетки на кожата.

Оштетените клетки можат да ослободат воспалителни медијатори или да иницираат воспалителна каскада која исто така делува на клетките во дермисот, особено на стромалните и ендотелните клетки на крвните садови. Тоа е проширувањето и зголемената пропустливост на ендотелијалните клетки што ги произведува забележаниот еритем и едем. Конкретно, методите на анализа базирани на RhE ги мерат иницијативните настани во каскадата, како што е оштетувањето на клетките или ткивата, користејќи ја одржливоста на клетките како отчитување во отсуство на каква било васкуларизација во системот за ин витро анализа.

Во моделот RhE, одржливоста на клетките се мери со ензимска конверзија на виталната боја МТТ во солта на сината формазан, која се мери квантитативно по отстранувањето од ткивата (МТТ се користи за да се процени одржливоста на клетките како функција на редокс потенцијалот). Хемикалии кои иритираат се дефинираат со нивната способност да ја намалат одржливоста на клетките под дефинираните нивоа на праг (т.е. најмалку 2 проценти за категорија 50). Во зависност од регулаторната рамка и применливоста на овој метод на тестирање, хемикалиите за тестирање кои произведуваат одржливост на клетките над дефинираното ниво на праг може да се сметаат за неиритирачки (т.е. нема категорија, најмалку 50 проценти).

Нетрансформираните човечки кератиноцити треба да се користат за реконструкција на епителот. Под функционален роговиден слој, мора да има многу слоеви на живи епителни клетки (базален слој, слој спинозум, стратум гранулозум). Роговиден слој мора да биде повеќеслоен, да го содржи суштинскиот липиден профил за да формира функционална бариера со цврстина да се спротивстави на брзата пенетрација на цитотоксични референтни хемикалии, на пр., натриум додеацил сулфат.

Функцијата на бариерата мора да се покаже и може да се евалуира со одредување на концентрацијата во која референтната хемикалија ја намалува одржливоста на ткивото за 50 проценти по фиксно време на експозиција или со одредување на времето на експозиција потребно за намалување на одржливоста на клетката за 50 проценти при примена на референтната хемикалија во одредена, фиксна концентрација. Својствата на задржување на моделот RhE (реконструиран човечки епидермис) треба да го спречат мигрирањето на материјалот околу роговиден слој во живо ткиво, што резултира со лошо моделирање на изложеноста на кожата. RhE моделот мора да биде без бактериска, вирусна, микоплазма или габична контаминација.

Меѓу бројните студии за тестирање, мерење, анализа и евалуација што нашата организација ги обезбедува за бизниси во различни сектори, со својот обучен и стручен кадар и напредна технолошка опрема, ние исто така обезбедуваме услуги за тестирање дефинирани во „ОЕЦД TG 439 Ин витро иритација на кожата: реконструирана човечка метод на испитување на епидермисот“ стандард. дава.