OECD TG 488 Анализи на мутации на гени кај трансгени глодари соматски и герминативни клетки

Упатствата на OECD за одговорно деловно однесување за мултинационални корпорации (OECD TG 488 „Тестови за мутација на гени кај соматски и герминативни клетки кај трансгени глодари“) опишуваат метод на тестирање in vivo што се користи за откривање на хемикалии кои предизвикуваат генски мутации во соматските и герминативните клетки на трансгени глодари. Овој стандард е дел од „Упатствата на OECD за тестирање хемикалии, Дел 4 Ефекти врз здравјето“ и се справува со значителен јаз во тестирањето на генотоксичност: директно мерење на генски мутации in vivo во различни ткива.

За разлика од многу in vivo тестови кои се фокусираат на хромозомски оштетувања или прекини на ДНК нишки, стандардот TG 488 специфично ги мери генските мутации (точкести мутации, мали вметнувања/бришења, поместувања на рамката). Овој стандард е особено вреден за следење на позитивните резултати од мутагеност in vitro, истражување на механизмите на канцерогеност или проценка на наследните ризици што произлегуваат од мутации на герминативните клетки.

Овој метод генерално ги следи следниве чекори:

• Животните се третираат со испитуваната хемикалија (преку кој било пат, вклучувајќи орален, дермален, инхалациски или имплантационен пат) во текот на дефиниран период на апликација (обично 28 дена).
• Потоа следува период на симптоми/фиксација (времето потребно за лезиите на ДНК да станат фиксни мутации варира во зависност од типот на ткиво и клетка).
• Животните се еутанизираат, ткивата се собираат и замрзнуваат.
• Геномската ДНК се екстрахира од целните ткива.
• Трансгените се пакуваат во фаг вектори и се пренесуваат на бактерии.
• Мутациите се откриваат преку фенотипски промени (на пр., системи за позитивна селекција за селекција на боја или бришења).
• Фреквенцијата на мутации се пресметува со делење на бројот на мутантни плаки/колонии со вкупниот добиен број (обично таргетирајќи 10^5–10^6 плаки по ткиво по животно).

Овој метод на тестирање детектира широк спектар на мутации и ги зема предвид in vivo фактори како што се метаболизмот, фармакокинетиката и поправката на ДНК.

Елементите на дизајнот на студијата се како што следува:

• Дозирање: За да се обезбеди конзистентност со студиите за токсичност на повторени дози, интеграција и за да се намали бројот на животни, генерално се користи 28 последователни дена.
• Времиња на земање примероци: Зависат од ткивото и намената (пократко за клетки што брзо се делат, подолго за герминативни клетки или фиксација).
• Проверки: Истовремени негативни/проверки на носители, позитивни проверки и разгледување на историски податоци за проверки.
• Евалуација: Позитивните/негативните одлуки ја земаат предвид статистичката значајност, односот доза-одговор и биолошката значајност (споредба со историски контролни податоци). Молекуларната анализа на мутанти може да обезбеди спектри на мутации.
• Потенцијал за интеграција: Може да се комбинира со други крајни точки како што се микронуклеус (TG 474) или тест за мутација на свињи-α кај истите животни.

Предностите на овој стандард се следниве:

• Ги мери генските мутации (не само маркерите) во речиси секое ткиво.
• Вклучува целиот процес на метаболизам и поправка на животното.
• Поддржува и идентификација на опасности и анализа на механизмот на дејствување.
• Флексибилен е за проценка и на соматски и на герминативни клетки.

Ограничувањата на овој стандард се следниве:

• Потребни се специјализирани трансгени животни и техничка експертиза (како што е пакување на фаги).
• Базата на податоци за герминативните клетки е сè уште релативно ограничена во споредба со базите на податоци за соматските ткива.
• Супстанцата за тестирање или нејзините метаболити се несоодветни ако не стигнат до целното ткиво.

Стандардот OECD TG 488 се користи во проценките на хемиската безбедност (на пр., REACH и EPA во Европа) за супстанции кои покажуваат мутаген потенцијал in vitro или кои покренуваат загриженост за наследни ризици. Ова помага во пристапите за класификација и етикетирање врз основа на докази базирани на тежина (на пр., мутагени на герминативни клетки).

Тековната работа вклучува оптимизирање на времето за земање примероци за герминативни клетки, подобрување на статистичките пристапи со историски контроли и поголема интеграција со други тестови за минимизирање на употребата на животни.

Ова упатство е робусна, меѓународно конзистентна алатка за унапредување на генетската токсикологија и заштита на здравјето на луѓето од мутагени опасности.

Накратко, стандардот OECD TG 488 вклучува меѓународно прифатен метод на тестирање што се користи за да се процени дали хемиската супстанца предизвикува генски мутации кај жив организам (in vivo). Овој тест е широко користен во генетската токсикологија, проценката на регулаторниот ризик и, каде што е применливо, проценката на хемиската безбедност за фармацевтски производи, индустриски хемикалии, пестициди, прехранбени адитиви и козметички состојки.

Примарната цел на овој стандард е да утврди дали изложеноста на супстанција предизвикува следново:

• Мутации на соматските клетки (мутации во клетките на телото кои потенцијално се поврзани со развој на рак)
• Мутации на герминативните клетки (мутации во сперматозоидите или прекурсорните клетки на јајце-клетката, потенцијално наследни)
• Овој стандард ги проценува мутациите во целиот животински систем и опфаќа: метаболизам, апсорпција и дистрибуција, поправка на ДНК и ткивно-специфични одговори.

Ова го прави исклучително вредно, особено кога резултатите in vitro се позитивни или неубедливи, а регулаторите треба да ја потврдат во биолошки релевантен in vivo модел.

Трансгените глодари што се користат во тестовите содржат реверзибилни репортерски гени. Овие гени се интегрирани во животинскиот геном. Овој метод првенствено ги мери следниве:

• Мутантска фреквенција
• Спектар на мутации (анализа на секвенционирање по потреба)
• Ткивно-специфичен мутаген одговор

Статистички значајно зголемување на фреквенцијата на мутации во споредба со контролните групи укажува на мутагена активност.

ОЕЦД ТГ 488 пополнува важен регулаторен јаз бидејќи многу мутагени се однесуваат поинаку во живите системи отколку во клеточните култури. Главните причини за неговата неопходност се следниве:

• Ова потврдува дали наодите за мутагеност in vitro се биолошки значајни in vivo.
• Детектира мутагеност специфична за ткивото.
• Ги оценува метаболички активираните соединенија.
• Ја поддржува проценката на канцерогеноста.
• Тоа помага да се процени ризикот од наследни мутации.

Регулаторните тела обично го користат стандардот TG 488 во следниве ситуации:

• Кога тестот за генска мутација in vitro е позитивен
• Кога постои загриженост за реактивните механизми на ДНК
• Кога се потребни дополнителни тестови за следење во интегрирана стратегија за генотоксичност

Како заклучок, стандардот OECD TG 488 е многу важен тест за мутагеност in vivo кој овозможува директно откривање на генски мутации кај трансгени глодари. Тој обезбедува посилна биокомпатибилност од многу in vitro методи и е особено корисен во процесите на донесување регулаторни одлуки при евалуација на генотоксичниот и канцерогениот потенцијал на хемикалиите.

Со години, нашата организација, со својот компетентен и искусен персонал, ги разбира потребите на своите клиенти, обезбедувајќи им напредни услуги за тестирање што им се потребни и помагајќи им во воспоставувањето, имплементацијата и подобрувањето на системите за управување. Во оваа рамка, ние исто така нудиме услуги за тестирање во согласност со стандардот OECD TG 488.