Štandardná testovacia metóda ASTM E2180-18 na stanovenie aktivity antimikrobiálnych látok zabudovaných do polymérnych alebo hydrofóbnych materiálov

Norma „ASTM E2180-18 Štandardný test na stanovenie aktivity antimikrobiálnych látok zabudovaných do polymérnych alebo hydrofóbnych materiálov“ publikovaná Americkou spoločnosťou pre testovanie a materiály (ASTM) opisuje testovaciu metódu používanú na (kvantitatívne) hodnotenie antimikrobiálnej aktivity látok zabudovaných alebo viazaných na primárne ploché (dvojrozmerné) hydrofóbne alebo polymérne povrchy. Táto metóda sa zameriava predovšetkým na hodnotenie antibakteriálnej aktivity, hoci pomocou tejto metódy je možné testovať aj iné mikroorganizmy, ako sú kvasinky a plesňové konídie.

Inokulačné vehikulum je agarová suspenzia, ktorá znižuje povrchové napätie fyziologického roztoku a umožňuje tvorbu pseudo-biofilmu, ktorý zabezpečuje rovnomernejší kontakt inokula s testovaným povrchom. Táto testovacia metóda uľahčuje testovanie hydrofóbnych povrchov s použitím buniek udržiavaných v agarovej suspenznej matrici. Táto testovacia metóda však nie je vhodná na stanovenie aktivity proti bunkám biofilmu, ktoré sa geneticky aj metabolicky líšia od planktónových buniek použitých v tomto teste.

Opísaná testovacia metóda dokáže potvrdiť prítomnosť antimikrobiálnej aktivity v plastoch alebo hydrofóbnych povrchoch a umožňuje stanovenie kvantitatívnych rozdielov v antimikrobiálnej aktivite medzi neošetrenými plastmi alebo polymérmi a tými, ktoré obsahujú viazané alebo zabudované nízko vo vode rozpustné antimikrobiálne látky. Porovnania je možné vykonať aj medzi počtom preživších na povrchoch ošetrených konzervačnými látkami a kontrolných hydrofóbnych povrchoch.

Táto metóda tiež umožňuje stanovenie trvanlivosti alebo dlhodobej trvanlivosti antimikrobiálnej liečby, čo sa dá dosiahnuť testovaním neumytých aj umytých vzoriek počas určitého časového intervalu. Na aplikáciu týchto testovacích metód je však potrebná znalosť mikrobiologických techník.

Stručne povedané, táto testovacia metóda sa môže použiť na vyhodnotenie účinnosti antimikrobiálnych látok zabudovaných alebo viazaných v hydrofóbnych materiáloch, ako sú plasty, epoxidové živice a iné tvrdé povrchy. Bakteriálny inokulum na vodnej báze zostáva v úzkom a rovnomernom kontakte s ošetreným materiálom ako pseudo-biofilm. Percentuálne zníženie populácií prežívajúcich infikovaných bakteriálnych buniek po 24 hodinách sa stanoví v porovnaní s populáciami z neošetrenej kontroly. Hydrofóbny substrát sa môže opakovane testovať v priebehu času, aby sa posúdila pretrvávajúca antimikrobiálna aktivita.

Na účely tohto štandardu platia nasledujúce pojmy a definície:

• Agarová suspenzia je položelatínová tekutina, ktorá vznikne pridaním 3 g/l agar-agaru do 0,85-percentného fyziologického roztoku.
• V mikrobiológii je vakcína vzorka pozostávajúca zo živých spór, baktérií, jednobunkových organizmov alebo iného živého materiálu, kvasiniek alebo mnohobunkových vláknitých húb, alebo kombinácie dvoch alebo viacerých druhov mikroorganizmov, ktorá sa umiestni do testovacieho média alebo vzorky, ktorá sa má testovať na podporu mikrobiálneho rastu alebo na preskúmanie jej antimikrobiálnych vlastností.
• Nosič inokula je nosný roztok používaný na prenos inokula do konkrétnej vzorky alebo objektu.
• Neutralizačná regeneračná voda je tekuté rastové médium používané na neutralizáciu účinkov testovaného antimikrobiálneho činidla.

Táto metóda zahŕňa inokuláciu roztavenej (45 stupňov) agarovej suspenzie štandardizovanou bakteriálnou bunkovou kultúrou. Tenká vrstva (0,5 – 1,0 ml) naočkovanej agarovej suspenzie sa pipetou nanesie na testovaný a neošetrený kontrolný materiál (používajú sa minimálne tri vzorky). Po uplynutí stanoveného kontaktného času (zvyčajne sa používa 24 hodín) sa preživšie mikroorganizmy získajú elúciou inokula z agarovej suspenzie z testovaného substrátu do neutralizačného bujónu a extrahujú sa metódami, ktoré zabezpečujú úplné odstránenie inokula z testovanej látky (napr. sonikácia, vortexovanie alebo manuálna extrakcia, t. j. stomacher).

Vykonajú sa sériové riedenia a potom sa z každého riedenia pripravia nalievanie alebo roztieranie na platne. Agarové platne a riediace bujóny sa inkubujú 48 – 62 hodín pri stanovenej teplote v závislosti od optimálnej teploty pre testovaný organizmus. Bakteriálne kolónie z každej série riedení sa spočítajú a zaznamenajú. Vypočíta sa percento bakteriálnej redukcie v ošetrených a neošetrených vzorkách.

Táto metóda sa môže použiť na vyhodnotenie účinnosti kombinovaných/viazaných antimikrobiálnych látok na hydrofóbnych materiáloch, ako sú plasty, epoxidové živice a iné tvrdé povrchy. Bakteriálny inokulum na vodnej báze zostáva v úzkom a rovnomernom kontakte s ošetreným materiálom ako pseudo-biofilm. Percentuálne zníženie prežívajúcich populácií infikovaných bakteriálnych buniek po 24 hodinách sa stanoví v porovnaní s neošetrenou kontrolnou skupinou. Hydrofóbny substrát sa môže opakovane testovať v priebehu času, aby sa posúdila pretrvávajúca antimikrobiálna aktivita.

Naša organizácia, ktorá sa už roky snaží podporovať podniky zo všetkých sektorov širokou škálou testovacích, meracích, analytických a hodnotiacich štúdií, má silný personál, ktorý pozorne sleduje svetový vývoj v oblasti vedy a techniky a neustále sa zlepšuje. V tejto súvislosti sa podnikom poskytujú aj testovacie služby v súlade s normou „ASTM E2180-18 Štandardný test na stanovenie aktivity antimikrobiálnych látok zabudovaných do polymérnych alebo hydrofóbnych materiálov“.