Štandardná príručka ASTM E2315 pre hodnotenie antimikrobiálnej aktivity pomocou postupu Time-Killing

Norma „ASTM E2315 Štandardná príručka pre hodnotenie antimikrobiálnej aktivity pomocou postupu zastavenia odberu vzoriek“, ktorú vydala Americká spoločnosť pre testovanie a materiály (ASTM), poskytuje príklad metódy, ktorá meria zmeny v populáciách aeróbnych mikroorganizmov počas stanoveného obdobia odberu vzoriek, keď sú k dispozícii antimikrobiálne testovacie materiály. Táto norma poskytuje rôzne možnosti výberu a rastu organizmov, prípravy inokula, časov odberu vzoriek a teplôt.

Keď sa táto technika používa ako špecifická testovacia metóda, je nevyhnutné, aby boli vyššie uvedené premenné štandardizované. Antimikrobiálna aktivita špecifických materiálov meraná touto technikou sa môže výrazne líšiť v závislosti od zvolených premenných. Je dôležité pochopiť obmedzenia testovania in vitro, najmä pri porovnávaní výsledkov testov vykonaných s rôznymi parametrami. Napríklad výsledky testov mikroorganizmov vyžadujúcich rastové doplnky alebo špecifické inkubačné podmienky nemusia byť priamo porovnateľné s výsledkami organizmov hodnotených bez špecifikovaných podmienok. Pre tento postup je nevyhnutná znalosť mikrobiologických techník.

Tento postup sa môže použiť na vyhodnotenie in vitro redukcie mikrobiálnej populácie testovaných organizmov po expozícii testovanému materiálu.

Test usmrcovania suspenziou je laboratórny test, ktorý meria antimikrobiálny účinok kvapalnej vzorky počas krátkeho časového obdobia. Test usmrcovania meria zníženie počtu známych mikroorganizmov vo vakcíne počas špecifických kontaktných časov. Táto metóda určuje efektívnu mieru usmrcovania hotového produktu a zvyčajne sa vyjadruje v percentách (napr. zabije 99,9 % baktérií za 30 sekúnd).

Štandardný test časového zabitia sa môže vykonať na akomkoľvek tekutom hotovom výrobku, ako sú dezinfekčné prostriedky na ruky, dezinfekčné čistiace prostriedky, antibakteriálne tekuté mydlá, ústne vody a ďalšie.

Kontaktný čas zvolený na skrátenie času suspenzie by mal byť vhodný pre typ testovaného hotového výrobku. Napríklad dezinfekčný prostriedok na ruky sa môže testovať s kontaktným časom 30 sekúnd, zatiaľ čo čistič tvrdých povrchov sa môže testovať dlhšie, v závislosti od návodu na použitie.

Test usmrtenia vyžaduje 250 g vzorku tekutého produktu. Vzorka sa inokuluje zmiešanou kultúrou štyroch štandardných bakteriálnych kultúr. V určitých intervaloch (napr. 30 sekúnd, 1 minúta, 2 minúty, 3 minúty a 5 minút) sa 1 g inokulovanej vzorky odoberie a umiestni do biostatického riedidla, aby sa inaktivovali biocídy prítomné vo vzorke. Riedidlo sa potom umiestni do vhodného média a inkubuje sa, čo umožňuje kvantifikáciu počtu prežívajúcich mikróbov pomocou metódy počítania na platniach.

Norma ASTM E2315 je kľúčovým nástrojom na hodnotenie účinnosti antimikrobiálnych látok. Táto norma obsahuje metódu na hodnotenie zníženia mikrobiálnych populácií po expozícii antimikrobiálnym testovacím materiálom in vitro a zmien v populáciách aeróbnych mikroorganizmov počas stanoveného obdobia. Táto norma je navrhnutá na hodnotenie účinnosti produktov, ako sú dezinfekčné prostriedky, dezinfekčné prostriedky na ruky, biocídy a čistiace prostriedky. Táto norma kladie dôraz na flexibilitu tým, že poskytuje rôzne možnosti výberu organizmov, rastových podmienok, prípravy inokula, časov odberu vzoriek a teplôt, aby vyhovovala rôznym potrebám testovania. Zdôrazňuje však dôležitosť štandardizácie týchto premenných, aby sa zabezpečili konzistentné a porovnateľné výsledky, keď sa metóda používa ako špecifický test.

Hlavné vlastnosti tejto normy sú:

• Použiteľnosť: Vhodné na testovanie kvapalných alebo pevných antimikrobiálnych látok, ktoré tvoria homogénny roztok vo vode.
• Mikroorganizmy: Zameriava sa na aeróbne mikroorganizmy s možnosťami vyšetrenia baktérií, húb a kvasiniek, ako sú Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli a Candida albicans.
• Premenné: Umožňujú prispôsobenie testovacích podmienok (napr. teplota, časové intervaly), ale vyžadujú štandardizáciu pre konkrétne testy, aby sa zabezpečila opakovateľnosť.
• Obmedzenia: Výsledky sa môžu líšiť v závislosti od zvolených premenných a porovnania medzi testami za rôznych podmienok (napr. mikroorganizmy vyžadujúce špeciálne rastové doplnky) nemusia byť platné.

Norma ASTM E2315 opisuje postup usmrcovania s časom, ktorý kvantitatívne meria zníženie mikrobiálnych populácií v priebehu času. Proces zahŕňa nasledujúce kroky:

• Príprava mikrobiálnej suspenzie: Štandardná mikrobiálna suspenzia sa pripravuje s použitím reprezentatívnych alebo štandardných kmeňov vhodných pre zamýšľané použitie produktu.
• Expozícia testovanému materiálu: Antimikrobiálny testovaný materiál (alebo jeho zriedenie) sa zmieša s mikrobiálnou suspenziou za kontrolovaných podmienok, ako je špecifická teplota (napr. 25 stupňov, alternatívy ako 22 stupňov, 30 stupňov alebo 38 stupňov v závislosti od aplikácie).
• Odber vzoriek a neutralizácia: Vzorky sa odoberajú vo vopred stanovených časových intervaloch (napr. 15 sekúnd, 30 sekúnd, 60 sekúnd alebo dlhšie) a neutralizujú sa, aby sa inhibovala antimikrobiálna aktivita. Neutralizácia zabezpečuje presné stanovenie počtu prežívajúcich mikroorganizmov.
• Kvantifikácia: Prežívajúce mikroorganizmy sa počítajú pomocou techník počítania na platniach a zníženie sa vypočíta ako log10 zníženie alebo percentuálne zníženie v porovnaní s východiskovou mikrobiálnou populáciou.

Keďže táto norma nešpecifikuje kritériá pre úspešné/neúspešné použitie, umožňuje používateľom definovať účinnosť na základe ich špecifických potrieb. Každá testovacia koncentrácia sa zvyčajne vykonáva duplicitne, aby sa zabezpečila spoľahlivosť.

Norma ASTM E2315 sa široko používa na hodnotenie antimikrobiálnej účinnosti produktov a poskytuje kritické údaje pre vývoj produktov, validáciu a dodržiavanie predpisov. Jej význam spočíva v jej schopnosti:

• Meranie antimikrobiálnej účinnosti: Časovo založený test usmrtenia meria, ako účinne antimikrobiálne činidlo znižuje mikrobiálne populácie a poskytuje prehľad o miere usmrtenia baktérií, húb a iných patogénov.
• Podpora vývoja produktov: Výrobcovia používajú toto testovanie na optimalizáciu zloženia a zabezpečenie toho, aby produkty spĺňali očakávania týkajúce sa výkonu pred ich uvedením na trh.
• Zabezpečenie súladu s predpismi: Štandardizovaný protokol pomáha výrobcom preukázať súlad s priemyselnými normami, čím sa zvyšuje spoľahlivosť produktov na globálnych trhoch.
• Široká použiteľnosť: Túto metódu možno uplatniť vo všetkých sektoroch vrátane zdravotníctva (napr. dezinfekčné prostriedky), spotrebného tovaru (napr. dezinfekčné prostriedky na ruky) a priemyselných aplikácií (napr. biocídy).

Táto norma tiež uznáva obmedzenia testovania in vitro a uvádza, že výsledky nemusia priamo odrážať reálne podmienky a že porovnávanie testov s rôznymi parametrami sa musí robiť opatrne.

Norma ASTM E2315 zdôrazňuje, že používatelia by si mali určiť vhodné bezpečnostné a zdravotné postupy, pretože postup môže zahŕňať nebezpečné látky, procesy alebo zariadenia. Používatelia by si mali pred vykonaním testov tiež určiť uplatniteľnosť regulačných požiadaviek.

V dôsledku toho je norma ASTM E2315 základným prvkom pri hodnotení účinnosti antimikrobiálnych produktov. Jej flexibilná, ale zároveň prísna metodika podporuje vývoj produktov a dodržiavanie predpisov tým, že umožňuje výrobcom hodnotiť mikrobiálnu redukciu za kontrolovaných podmienok. Poskytovaním štandardizovaného prístupu a zabezpečením spoľahlivých a reprodukovateľných výsledkov sa táto norma stala nepostrádateľným nástrojom pre priemyselné odvetvia, ktoré sa snažia účinne bojovať proti mikrobiálnej kontaminácii.

Naša organizácia, ktorá pôsobí na trhu už mnoho rokov a dôkladne sleduje globálny vývoj vo vede a technike, zamestnáva kvalifikovaný tím a rozsiahlu infraštruktúru na vykonávanie testovania, merania a analýz v širokej škále oblastí pre podniky vo všetkých sektoroch. V tejto súvislosti poskytujeme aj testovacie služby v súlade so štandardnou príručkou ASTM E2315 pre hodnotenie antimikrobiálnej aktivity pomocou postupu Time Killing.