La norme « OCDE TG 435 Méthode de test de barrière membranaire in vitro pour les irritations cutanées » publiée dans le cadre des lignes directrices de l'OCDE sur la conduite responsable des entreprises à l'intention des entreprises multinationales (lignes directrices de l'OCDE) décrit une méthode de test de barrière membranaire in vitro utilisée pour identifier les produits chimiques corrosifs. Cette méthode de test utilise une membrane artificielle conçue pour réagir aux produits chimiques corrosifs de la même manière que la peau des animaux.
La méthode de test de barrière membranaire in vitro peut être utilisée pour tester des solides, des liquides et des émulsions. Cependant, les substances aqueuses dont le pH est compris entre 4,5 et 8,5 ne conviennent généralement pas aux tests.
La méthode d'essai décrite permet l'identification de produits chimiques et de mélanges corrosifs et la sous-catégorisation des substances corrosives comme le permet le système mondial harmonisé de classification et d'étiquetage des produits chimiques. Cette classification est basée sur le temps de pénétration de la substance à travers la barrière membranaire.
Ce système de test se compose de deux éléments :
Lors de l'application de ce système de test, un nombre approprié de répétitions est préparé pour chaque substance de test et ses contrôles correspondants. Les temps d'application de la substance d'essai sur la barrière membranaire sont enregistrés et échelonnés. Le temps (en minutes) entre l'application de la substance d'essai sur la barrière membranaire et la pénétration de la barrière est utilisé pour déterminer le caractère corrosif de la substance d'essai.
La corrosivité cutanée est traditionnellement déterminée en appliquant le produit chimique testé sur la peau d'animaux vivants et en évaluant le degré de lésion des tissus après une période de temps spécifiée. Outre la norme OCDE TG 435, un certain nombre d'autres méthodes d'essai in vitro ont été adoptées comme alternatives à la procédure standard in vivo sur peau de lapin (OCDE TG 404) utilisée pour identifier les produits chimiques corrosifs. Les lignes directrices de l'OCDE recommandent l'utilisation de méthodes d'essai in vitro validées et acceptées.
Dans cette approche modulaire, les résultats positifs des méthodes d'essai in vitro sont utilisés pour classer un produit chimique comme corrosif sans qu'il soit nécessaire de procéder à des tests sur les animaux. L'objectif est ainsi d'empêcher l'utilisation d'animaux dans des tests et de prévenir la douleur et la détresse qui peuvent survenir si des animaux sont utilisés à cette fin.
Cette méthode de test détecte les dommages à la barrière membranaire causés par les produits chimiques d’essai corrosifs lors de l’application du produit chimique d’essai sur la surface de la barrière membranaire macromoléculaire synthétique via un « système de détection chimique », éventuellement par les mêmes mécanismes d’irritation qui opèrent dans la peau vivante.
La pénétration ou la rupture de la barrière membranaire peut être mesurée par un certain nombre de procédures ou de systèmes de détection chimique, y compris le changement de couleur du colorant indicateur de pH ou une autre propriété de la solution indicatrice sous la barrière.
Il faut déterminer que la barrière membranaire est valable pour l'usage auquel elle est destinée, c'est-à-dire pertinente et fiable. Cela implique de s'assurer que les différentes préparations sont cohérentes en termes de propriétés de barrière, par exemple être capables de maintenir une barrière contre les produits chimiques non corrosifs, être capables de classer les propriétés corrosives des produits chimiques parmi les sous-catégories de corrosivité du système mondial harmonisé de classification et étiquetage des produits chimiques. La classification attribuée est basée sur le temps nécessaire à un produit chimique pour traverser la barrière membranaire et pénétrer dans la solution indicatrice.
Avant l’utilisation en routine de la méthode de test de barrière membranaire in vitro, les laboratoires doivent se conformer à cette norme et démontrer leur compétence technique en classifiant correctement les substances de qualification proposées. Lorsqu'une substance répertoriée n'est pas disponible ou justifiée, une autre substance pour laquelle des données de référence in vivo et in vitro suffisantes sont disponibles peut être utilisée.
Les tests doivent être effectués à température ambiante (plage 17-25 degrés) et les composants doivent être conformes aux conditions spécifiées dans la norme.
Avant d'effectuer un test de barrière membranaire, un test de compatibilité chimique est effectué pour déterminer si le produit chimique testé est détectable par le système de détection chimique. Si le système de détection chimique ne détecte pas le produit chimique d’essai, la méthode d’essai avec barrière membranaire ne convient pas pour évaluer le caractère corrosif potentiel de ce produit chimique d’essai et une méthode d’essai différente doit être utilisée. Le système de détection chimique et les conditions d'exposition utilisées pour les tests de compatibilité doivent refléter l'exposition lors des tests ultérieurs de barrière membranaire.
S'il convient à la méthode d'essai, un produit chimique d'essai qualifié par des tests de compatibilité doit être soumis à un test de catégorie de temps, qui est un test de sélection permettant de distinguer les acides ou bases faibles et forts. Par exemple, dans la méthode d'essai de référence validée, un test de catégorisation d'échelle de temps est utilisé pour indiquer quelles deux échelles de temps doivent être utilisées selon que des réserves acides ou alcalines importantes sont détectées. En fonction de la réserve acide ou alcaline du produit chimique d'essai, deux échelles de temps de passage différentes doivent être utilisées pour déterminer la corrosivité et le système mondial harmonisé de classification et d'étiquetage des produits chimiques dans la sous-catégorie de corrosivité cutanée.
La barrière membranaire se compose de deux composants : un gel aqueux macromoléculaire protéique et une membrane de support perméable. Le gel protéique doit être imperméable aux liquides et aux solides mais peut être érodé et rendu perméable. La barrière membranaire entièrement construite doit être stockée dans des conditions prédéterminées qui se sont avérées efficaces pour empêcher la dégradation du gel, telle que la dessiccation, la croissance microbienne, le cisaillement ou la fissuration, qui dégraderaient ses performances. Une période de stockage acceptable doit être déterminée et les préparations de barrière membranaire ne doivent pas être utilisées après cette période. La membrane de support perméable fournit un support mécanique au gel protéique pendant le processus de gélification et l'exposition au produit chimique d'essai. La membrane de support doit empêcher le gel de s'affaisser ou de se déplacer et doit être facilement perméable à tous les produits chimiques testés.
En ce qui concerne le système de détection chimique, la solution indicatrice, qui est la même solution que celle utilisée pour les tests de compatibilité, doit répondre à la présence d'un produit chimique d'essai. Un colorant indicateur de pH ou une combinaison de colorants, tels que le rouge de crésol et l'orange de méthyle, doit être utilisé, qui montrera un changement de couleur en réponse à la présence du produit chimique d'essai.
Parmi les nombreuses études d'essais, de mesures, d'analyses et d'évaluation qu'elle propose aux entreprises de divers secteurs, notre organisation propose également des services d'essais définis dans la norme « OCDE TG 435 Méthode de test de barrière membranaire in vitro pour les irritations cutanées », avec un personnel formé et expert. et des équipements technologiques avancés.
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