La norme « OECD TG 442E Sensibilisation cutanée in vitro – Test d’activation de lignées cellulaires humaines (h-CLAT) », publiée dans le cadre des lignes directrices de l’OCDE pour une conduite responsable des entreprises multinationales (lignes directrices de l’OCDE), est proposée pour traiter l’activation des cellules dendritiques, un événement clé dans la voie des effets indésirables de la sensibilisation cutanée.
Cette ligne directrice d'essai porte sur le critère d'évaluation du danger pour la santé humaine : la sensibilisation cutanée suite à une exposition à un produit chimique testé. La sensibilisation cutanée désigne une réaction allergique consécutive à un contact cutané avec le produit chimique testé, telle que définie par le Système général harmonisé de classification et d'étiquetage des produits chimiques des Nations Unies.
Cette norme fournit quatre méthodes d’essai in vitro qui abordent le même événement clé dans le parcours de résultat négatif :
Toutes ces méthodes permettent de distinguer les sensibilisants cutanés des non-sensibilisants, conformément au Système général harmonisé de classification et d'étiquetage des produits chimiques des Nations Unies. Les méthodes d'essai décrites dans ce guide quantifient les variations d'expression d'un ensemble de gènes associés au processus d'activation des monocytes et des cellules dendritiques (signature génomique des biomarqueurs) suite à une exposition à des marqueurs de surface cellulaire ou à des sensibilisants.
La norme OCDE TG 442E est un test in vitro robuste permettant d'identifier les sensibilisants cutanés chimiques potentiels, avec une large applicabilité et une précision prédictive supérieure à 90 %. Ce test fournit une prédiction binaire qui classe les échantillons testés comme sensibilisants cutanés ou non. L'objectif de cette ligne directrice est de déterminer si une substance chimique peut provoquer une sensibilisation cutanée, c'est-à-dire une dermatite allergique de contact, en activant des réponses immunitaires spécifiques sans recourir à des tests sur les animaux.
Le test d'activation de lignées cellulaires humaines (h-CLAT) est un test in vitro (non animal) permettant d'évaluer si une substance chimique peut provoquer une sensibilisation cutanée. La sensibilisation cutanée est une réaction allergique provoquée par une réaction excessive du système immunitaire à une substance après contact cutané. Le h-CLAT est conçu pour modéliser une étape biologique clé du développement de la sensibilisation cutanée : l'activation des cellules dendritiques (un type de cellules immunitaires) par une substance chimique sensibilisante.
Cette méthode d'essai est importante car elle remplace les anciens tests sur les animaux. De plus, la norme OCDE TG 442E est appréciée car elle fournit des méthodes normalisées, scientifiquement validées et internationalement reconnues pour évaluer si les produits chimiques provoquent une sensibilisation cutanée, un type de réaction allergique provoquée par une exposition cutanée répétée.
La méthode h-CLAT quantifie les variations d'expression des marqueurs de surface cellulaire associés au processus d'activation des monocytes et des cellules dendritiques dans la lignée cellulaire leucémique monocyte humaine THP-1 après exposition à des sensibilisants. Les niveaux d'expression mesurés des marqueurs de surface des cellules dendritiques permettent ensuite de distinguer les sensibilisants et les désensibilisants cutanés.
Cette méthode est un test in vitro qui mesure les variations d'expression des marqueurs de surface cellulaire dans les cellules THP-1 de la lignée cellulaire leucémique monocyte humaine après 24 heures d'exposition à un produit chimique d'essai. Ces molécules de surface sont des marqueurs typiques de l'activation de THP-1 des monocytes et peuvent imiter l'activation des cellules dendritiques, qui jouent un rôle essentiel dans l'amorçage des lymphocytes T. Les variations d'expression des marqueurs de surface sont mesurées par cytométrie de flux après coloration cellulaire par des anticorps marqués au fluorochrome. Une mesure de cytotoxicité est réalisée simultanément afin d'évaluer si une régulation positive de l'expression des marqueurs de surface se produit à des concentrations sous-cytotoxiques. L'intensité de fluorescence relative des marqueurs de surface par rapport au témoin solvant/véhicule est calculée et utilisée dans le modèle de prédiction pour étayer la distinction entre sensibilisants et non sensibilisants.
En bref, la ligne directrice 442 de l’OCDE est essentielle pour soutenir des tests de sécurité éthiques, fiables et cohérents à l’échelle mondiale pour les produits chimiques et les produits de consommation, en particulier à la lumière de l’évolution de la réglementation et de la demande du public pour une science sans cruauté.
Notre organisation, qui accompagne depuis des années des entreprises de tous secteurs grâce à un large éventail d'activités de tests, de mesures, d'analyses et d'évaluations, dispose d'une équipe performante qui suit de près les avancées scientifiques et technologiques mondiales et s'améliore constamment. Dans ce contexte, nous proposons également des services de tests aux entreprises conformément à la norme OCDE TG 442E Sensibilité cutanée in vitro - Test d'activation de lignées cellulaires humaines (h-CLAT).
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