La norme « OCDE TG 439 Irritation cutanée in vitro : méthode d’essai sur épiderme humain reconstitué », publiée dans le cadre des lignes directrices de l’OCDE sur la conduite responsable des entreprises multinationales (lignes directrices de l’OCDE) , décrit une méthode d’essai in vitro utilisée pour l’identification des dangers des produits chimiques irritants (substances et mélanges) conformément à la catégorie 2 du Système général harmonisé de classification et d’étiquetage (SGH) des Nations Unies.
Cette méthode est basée sur l’épiderme humain reconstruit (RhE), qui dans sa conception globale imite fidèlement les propriétés biochimiques et physiologiques des parties supérieures de la peau humaine. La viabilité cellulaire est mesurée par la conversion enzymatique du colorant vital MTT en sel bleu de formazan, qui est mesurée quantitativement après extraction des tissus. Les substances d'essai irritantes sont définies par leur capacité à réduire la viabilité cellulaire en dessous de niveaux seuils définis (égaux à 2 pour cent ou moins pour la catégorie 50). Les produits chimiques colorés peuvent également être testés à l’aide d’une procédure HPLC (chromatographie liquide haute performance).
Il existe trois méthodes de test validées qui sont conformes à la norme OCDE TG 439. Selon le cadre réglementaire et le système de classification utilisés, cette procédure peut être utilisée pour déterminer l'irritation cutanée des substances d'essai en tant qu'essai de substitution autonome pour les essais d'irritation cutanée in vivo ou en tant qu'essai de substitution partiel dans le cadre d'une stratégie d'essais à plusieurs niveaux.
En principe, le produit chimique d’essai est appliqué localement sur un modèle tridimensionnel RhE (épiderme humain reconstruit) constitué de kératinocytes épidermiques d’origine humaine cultivés et non transformés afin de créer un modèle multicouche hautement différencié de l’épiderme humain. Il se compose de couches basales, épineuses et granulaires régulières et d'une couche cornée multicouche contenant des couches lipidiques lamellaires intercellulaires représentant les principales classes lipidiques similaires à celles trouvées in vivo.
L'irritation cutanée d'origine chimique se manifeste principalement par un érythème et un œdème et est le résultat d'une cascade d'événements qui commence lorsque les produits chimiques traversent la couche cornée et endommagent les couches inférieures des kératinocytes et d'autres cellules cutanées.
Les cellules endommagées peuvent libérer des médiateurs inflammatoires ou initier une cascade inflammatoire qui agit également sur les cellules du derme, notamment les cellules stromales et endothéliales des vaisseaux sanguins. C’est l’expansion et l’augmentation de la perméabilité des cellules endothéliales qui produisent l’érythème et l’œdème observés. En particulier, les méthodes de test basées sur RhE mesurent les événements initiateurs de la cascade, tels que les lésions cellulaires ou tissulaires, en utilisant la viabilité cellulaire comme lecture en l'absence de toute vascularisation dans le système de test in vitro.
Dans le modèle RhE, la viabilité cellulaire est mesurée par la conversion enzymatique du colorant vital MTT en sel bleu de formazan, qui est mesurée quantitativement après retrait des tissus (le MTT est utilisé pour évaluer la viabilité cellulaire en fonction du potentiel rédox). Les produits chimiques irritants sont définis par leur capacité à réduire la viabilité cellulaire en dessous de niveaux seuils définis (c'est-à-dire au moins 2 pour cent pour la catégorie 50). En fonction du cadre réglementaire et de l'applicabilité de cette méthode d'essai, les produits chimiques d'essai qui produisent une viabilité cellulaire au-dessus d'un seuil défini peuvent être considérés comme non irritants (c'est-à-dire aucune catégorie, au moins 50 pour cent).
Des kératinocytes humains non transformés doivent être utilisés pour reconstruire l’épithélium. Sous une couche cornée fonctionnelle, il doit y avoir de nombreuses couches de cellules épithéliales vivantes (couche basale, couche épineuse, couche granulosum). La couche cornée doit être multicouche, contenant le profil lipidique essentiel pour former une barrière fonctionnelle avec la ténacité nécessaire pour résister à la pénétration rapide de produits chimiques de référence cytotoxiques, par exemple le dodéacylsulfate de sodium.
La fonction de barrière doit être démontrée et peut être évaluée en déterminant la concentration à laquelle un produit chimique de référence réduit la viabilité des tissus de 50 pour cent après un temps d'exposition fixe, ou en déterminant le temps d'exposition requis pour réduire la viabilité cellulaire de 50 pour cent lors de l'application du produit chimique de référence. à une concentration spécifiée et fixe. Les propriétés de rétention du modèle RhE (épiderme humain reconstruit) devraient empêcher le matériau autour de la couche cornée de migrer vers les tissus vivants, ce qui entraînerait une mauvaise modélisation de l'exposition cutanée. Le modèle RhE doit être exempt de contamination bactérienne, virale, mycoplasmique ou fongique.
Parmi les nombreuses études de tests, de mesures, d'analyses et d'évaluation que notre organisation propose aux entreprises de divers secteurs, avec son personnel formé et expert et ses équipements technologiques de pointe, nous fournissons également des services de tests définis dans le « OCDE TG 439 Irritation cutanée in vitro : peau humaine reconstituée ». méthode de test de l'épiderme" standard. donne.
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