Método de teste padrão ASTM E2180-18 para determinar a atividade de agentes antimicrobianos incorporados em materiais poliméricos ou hidrofóbicos

O padrão “ASTM E2180-18 Teste padrão para determinar a atividade de agentes antimicrobianos incorporados em materiais poliméricos ou hidrofóbicos” publicado pela Sociedade Americana de Testes e Materiais (ASTM) descreve um método de teste usado para avaliar (quantitativamente) a atividade antimicrobiana de agentes incorporados ou ligados a superfícies hidrofóbicas ou poliméricas principalmente planas (bidimensionais). Este método se concentra principalmente na avaliação da atividade antibacteriana, embora outros microrganismos, como leveduras e conídios fúngicos, também possam ser testados usando este método.

O veículo de inoculação é uma suspensão de ágar que reduz a tensão superficial do veículo de inoculação salina e permite a formação de um pseudobiofilme, o que permite um contato mais uniforme do inóculo com a superfície de teste. Este método de teste facilita o teste de superfícies hidrofóbicas usando células mantidas em uma matriz de suspensão de ágar. Entretanto, este método de teste não é adequado para determinar a atividade contra células de biofilme que são genética e metabolicamente diferentes das células planctônicas usadas neste teste.

O método de teste descrito pode confirmar a presença de atividade antimicrobiana em plásticos ou superfícies hidrofóbicas e permite a determinação de diferenças quantitativas na atividade antimicrobiana entre plásticos ou polímeros não tratados e aqueles contendo agentes antimicrobianos de baixa solubilidade em água ligados ou incorporados. Também é possível fazer comparações entre o número de sobreviventes em superfícies hidrofóbicas tratadas com conservantes e de controle.

Este método também permite a determinação da vida útil ou durabilidade a longo prazo de um tratamento antimicrobiano, o que pode ser obtido testando amostras lavadas e não lavadas durante um intervalo de tempo. Entretanto, é necessário conhecimento de técnicas microbiológicas para aplicar esses métodos de teste.

Resumidamente, este método de teste pode ser usado para avaliar a eficácia de antimicrobianos incorporados ou ligados em materiais hidrofóbicos, como plásticos, resinas epóxi e outras superfícies duras. O inóculo bacteriano à base de água permanece em contato próximo e uniforme com o material tratado como um pseudo-biofilme. A redução percentual nas populações de células bacterianas desafiadas sobreviventes em 24 h é determinada em comparação com aquelas de um controle não tratado. O substrato hidrofóbico pode ser testado repetidamente ao longo do tempo para avaliar a atividade antimicrobiana persistente.

Para os fins desta norma, aplicam-se os seguintes termos e definições:

• A suspensão de ágar é o líquido semigelatinoso formado quando 3 g/L de ágar-ágar é adicionado a uma solução salina a 0,85%.
• Em microbiologia, uma vacina é uma amostra composta de esporos vivos, bactérias, organismos unicelulares ou outro material vivo, leveduras ou fungos filamentosos multicelulares, ou uma combinação de duas ou mais espécies de microrganismos, que é colocada em um meio de teste ou em uma amostra a ser testada para dar suporte ao crescimento microbiano ou para investigar suas propriedades antimicrobianas.
• O transportador de inóculo é a solução transportadora usada para transportar o inóculo para uma amostra ou objeto específico.
• A água de recuperação neutralizante é o meio de crescimento líquido usado para neutralizar os efeitos do agente antimicrobiano de teste.

Este método envolve a inoculação de uma suspensão de ágar derretida (45 graus) com uma cultura de células bacterianas padronizada. Uma camada fina (0,5–1,0 mL) da suspensão de ágar inoculada é pipetada no material de teste e no material de controle não tratado (são usados ​​no mínimo três amostras). Após o tempo de contato especificado (normalmente, 24 h é o tempo utilizado), os microrganismos sobreviventes são recuperados pela eluição do inóculo da pasta de ágar do substrato de teste no caldo neutralizante e extraídos por métodos que garantem a remoção completa do inóculo da substância de teste (por exemplo, sonicação, agitação em vórtice ou extração manual, ou seja, stomacher).

Diluições em série são feitas e, em seguida, placas de vazamento ou espalhamento são feitas a partir de cada diluição. Placas de ágar e caldos de diluição são incubados por 48-62 horas a uma temperatura especificada, dependendo da temperatura ideal para o organismo de teste. Colônias bacterianas de cada série de diluição são contadas e registradas. É calculada a porcentagem de redução bacteriana em amostras tratadas e não tratadas.

Este método pode ser usado para avaliar a eficácia de antimicrobianos combinados/ligados em materiais hidrofóbicos, como plásticos, resinas epóxi e outras superfícies duras. O inóculo bacteriano à base de água permanece em contato próximo e uniforme com o material tratado como um pseudo-biofilme. A redução percentual nas populações sobreviventes de células bacterianas desafiadas em 24 h é determinada em comparação com aquelas de um controle não tratado. O substrato hidrofóbico pode ser testado repetidamente ao longo do tempo para avaliar a atividade antimicrobiana persistente.

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