La norma “ASTM E2180-18 Prueba estándar para determinar la actividad de agentes antimicrobianos incorporados en materiales poliméricos o hidrófobos” publicada por la American Society for Testing and Materials (ASTM) describe un método de prueba utilizado para evaluar (cuantitativamente) la actividad antimicrobiana de agentes incorporados o unidos a superficies principalmente planas (bidimensionales) hidrófobas o poliméricas. Este método se centra principalmente en evaluar la actividad antibacteriana, aunque también se pueden analizar otros microorganismos como levaduras y conidios de hongos utilizando este método.
El vehículo de inoculación es una suspensión de agar que reduce la tensión superficial del portador de inoculación salino y permite la formación de una pseudobiopelícula, que permite un contacto más uniforme del inóculo con la superficie de prueba. Este método de prueba facilita la prueba de superficies hidrófobas utilizando células mantenidas en una matriz de suspensión de agar. Sin embargo, este método de prueba no es adecuado para determinar la actividad contra células de biopelícula que son genética y metabólicamente diferentes de las células planctónicas utilizadas en esta prueba.
El método de prueba descrito puede confirmar la presencia de actividad antimicrobiana en plásticos o superficies hidrófobas y permite la determinación de diferencias cuantitativas en la actividad antimicrobiana entre plásticos o polímeros no tratados y aquellos que contienen agentes antimicrobianos poco solubles en agua unidos o incorporados. También se pueden realizar comparaciones entre el número de sobrevivientes en superficies hidrofóbicas de control y tratadas con conservantes.
Este método también permite determinar la vida útil o la durabilidad a largo plazo de un tratamiento antimicrobiano, lo que se puede lograr probando muestras lavadas y sin lavar durante un intervalo de tiempo. Sin embargo, se requieren conocimientos de técnicas microbiológicas para aplicar estos métodos de prueba.
En resumen, este método de prueba se puede utilizar para evaluar la eficacia de los antimicrobianos incorporados o unidos en materiales hidrófobos como plásticos, resinas epóxicas y otras superficies duras. El inóculo bacteriano a base de agua permanece en contacto cercano y uniforme con el material tratado como una pseudobiopelícula. Se determina el porcentaje de reducción en las poblaciones de células bacterianas supervivientes desafiadas a las 24 h en comparación con las de un control no tratado. El sustrato hidrófobo se puede probar repetidamente a lo largo del tiempo para evaluar la actividad antimicrobiana persistente.
Para los efectos de esta norma, se aplican los siguientes términos y definiciones:
Este método implica inocular una suspensión de agar fundido (45 grados) con un cultivo de células bacterianas estandarizado. Se pipetea una capa fina (0,5–1,0 ml) de la suspensión de agar inoculada sobre el material de prueba y el material de control sin tratar (se utilizan un mínimo de tres muestras). Después del tiempo de contacto especificado (normalmente se utilizan 24 h), los microorganismos supervivientes se recuperan mediante la elución del inóculo de la suspensión de agar del sustrato de prueba en el caldo neutralizante y se extraen mediante métodos que garantizan la eliminación completa del inóculo de la sustancia de prueba (por ejemplo, sonicación, agitación con vórtex o extracción manual, es decir, Stomacher).
Se realizan diluciones seriadas, luego se hacen placas de vertido o esparcimiento de cada dilución. Las placas de agar y los caldos de dilución se incuban durante 48 a 62 horas a una temperatura específica dependiendo de la temperatura óptima para el organismo de prueba. Se cuentan y registran las colonias bacterianas de cada serie de dilución. Se calcula el porcentaje de reducción bacteriana en muestras tratadas y no tratadas.
Este método se puede utilizar para evaluar la eficacia de antimicrobianos combinados/ligados en materiales hidrófobos como plásticos, resinas epóxicas y otras superficies duras. El inóculo bacteriano a base de agua permanece en contacto cercano y uniforme con el material tratado como una pseudobiopelícula. Se determina la reducción porcentual de las poblaciones supervivientes de células bacterianas desafiadas a las 24 h en comparación con las de un control no tratado. El sustrato hidrófobo se puede probar repetidamente a lo largo del tiempo para evaluar la actividad antimicrobiana persistente.
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