ASTM E2197-17 Стандартный метод количественного испытания носителя диска для определения бактерицидной, вирулицидной, фунгицидной, микобактерицидной и спайцидной активности химических веществ

В стандарте ASTM E2197-17 «Стандартный метод количественного испытания носителя диска для определения бактерицидной, вирулицидной, фунгицидной, микобактерицидной и спиоцидной активности химических веществ», разработанном Американским обществом испытаний и материалов (ASTM), матовая нержавеющая сталь представляет собой твердую, не -пористые поверхности окружающей среды и медицинские изделия. Оценить способность инактивировать вегетативные бактерии, вирусы, грибы, микобактерии и бактериальные споры на носителях дисков. Описан используемый метод испытаний.

Этот стандарт также предназначен для сравнения выживших со средним показателем по крайней мере трех контрольных носителей, чтобы определить, соблюден ли стандарт эффективности. Для правильной статистической оценки результатов количество жизнеспособных организмов в тестируемом инокуляте должно быть достаточно высоким, чтобы учитывать как стандартные характеристики, так и экспериментальные отклонения в результатах. Кроме того, этот метод тестирования не предполагает каких-либо протираний или трения. Поэтому он не предназначен для проверки удалений.

Для целей настоящего стандарта в дополнение к терминам и определениям из «Стандартной терминологии ASTM E2756-19 для противомикробных и противовирусных агентов» применяются следующие определения:

• Носителем называется неодушевленная поверхность или объект, инокулированный тест-организмом.
• Элюат относится к элюанту, содержащему выделенный организм или организмы.
• Элюант – это любой раствор, который безвреден для тестируемого организма или организмов и добавляется к носителю для выделения организма или организмов.
• Нейтрализация – это процесс подавления антимикробной активности тестируемого вещества. Этого можно добиться путем разбавления или добавления одного или нескольких химических нейтрализаторов к смеси организмов или тестируемых веществ.
• Загрузка почвы представляет собой раствор одного или нескольких органических или неорганических веществ или того и другого, добавляемый к суспензии тестируемого организма для имитации присутствия выделений организма, экскрементов или других посторонних веществ.
• Тестовый организм – это организм, имеющий характеристики, позволяющие его легко идентифицировать. Его также можно назвать суррогатным, симулирующим или маркерным организмом.
• Тестируемое вещество представляет собой препарат, содержащий противомикробные ингредиенты.

Каждый диск (диаметром 1 см) содержит 10 мкл тестируемого организма с грузом почвы. Инокулят высушивают, а затем диск помещают на внутреннюю нижнюю поверхность стерильного пластикового флакона перед контактом с 50 мкл используемого разведения тестируемого вещества. Время контакта и температуру можно варьировать по мере необходимости. Контрольные носители получают 50 мкл жидкости, которая безвредна для тестируемых организмов и клеток-хозяев, если они присутствуют, но в остальном с ними обращаются так же, как с тест-носителями.

Для испытаний на вегетативные бактерии, грибы, микобактерии и бактериальные споры испытуемое вещество затем нейтрализуют и инокулят элюируют. Элюат и последующие промывки носителя и флакона пропускают через мембранный фильтр. Планшеты с фильтрующими культурами инкубируют, подсчитывают колонии и рассчитывают log10-уменьшение.

Для вирусных анализов соответствующие разведения элюата вносят в подходящие клеточные культуры, культуры исследуют на наличие цитопатологии/инфекционных очагов, которые оценивают как наиболее вероятное число или подсчитывают как очаги или бляшки, и вычисляют логарифм по основанию 10.

Конструкция этого теста исключает любую потерю жизнеспособных организмов в результате промывания и, таким образом, позволяет получать статистически достоверные данные с использованием гораздо меньшего количества тестовых носителей, чем потребовалось бы для методов, основанных на простых оценках наиболее вероятного числа.

Строгость испытаний достигается за счет использования нагрузки на почву, микрорельефа поверхности носителя из матовой нержавеющей стали и меньшего соотношения испытуемого вещества к площади поверхности, что типично для многих применений дезинфицирующих средств. Таким образом, оцениваемое тестируемое вещество сталкивается с разумной проблемой обеспечения эффективного выделения тест-организмов из инокулированных носителей. Металлические диски в базовом тесте также совместимы с широким спектром активных веществ.

Конструкция носителей позволяет поместить в каждый точно отмеренный объем тест-организма (10 мкл) и контрольной жидкости или тестируемого вещества (50 мкл).

Инокулят помещается в центр каждого диска, при этом объемы тестируемого вещества покрывают почти всю поверхность диска, что практически исключает риск заражения какими-либо микроорганизмами.

Во всех тестах, кроме тестов на вирусы, добавление 10 мл элюента/разбавителя обеспечивает разведение испытуемого вещества в соотношении 1:200 сразу в конце периода контакта. Хотя этого шага самого по себе достаточно, чтобы остановить микробицидную активность большинства активных веществ, протокол анализа допускает добавление специального нейтрализатора к элюенту/разбавителю, если это необходимо. За исключением вирусов, этап мембранной фильтрации также позволяет обработать весь элюат с тест-носителей и, следовательно, захватить и последующее обнаружение даже небольшого количества жизнеспособных организмов, которые могут присутствовать. Последующая промывка мембранных фильтров физиологическим раствором также снижает риск попадания остатков ингибитора в восстановительную среду.

Среди многочисленных исследований по тестированию, измерениям, анализу и оценке, проводимых для предприятий в различных секторах, наша компания с ее обученным и опытным персоналом и современным технологическим оборудованием разработала «Стандартный количественный диск ASTM E2197-17 для определения бактерицидных, вирулицидных, фунгицидная, микобактерицидная и спаицидная активность химических веществ». Он также предоставляет услуги по тестированию, определенные в стандарте «метод испытания носителя».