Стандарт «OECD TG 439 Раздражение кожи in vitro: метод испытания с использованием восстановленного эпидермиса человека», опубликованный в рамках руководящих принципов ОЭСР по ответственному ведению бизнеса для многонациональных компаний (руководящие принципы ОЭСР) , описывает метод испытания in vitro, используемый для идентификации опасности раздражающих химических веществ (веществ и смесей) в соответствии с категорией 2 Глобальной гармонизированной системы классификации и маркировки ООН (GHS).
Этот метод основан на реконструированном эпидермисе человека (RhE), который по своей общей конструкции точно имитирует биохимические и физиологические свойства верхних отделов кожи человека. Жизнеспособность клеток измеряют путем ферментативного превращения жизненно важного красителя МТТ в синюю соль формазана, которую количественно измеряют после экстракции из тканей. Раздражающие тестируемые вещества определяются по их способности снижать жизнеспособность клеток ниже определенных пороговых уровней (равных 2 процентам или менее для категории 50). Цветные химические вещества также можно тестировать с помощью процедуры ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографии).
Существует три проверенных метода испытаний, соответствующих стандарту OECD TG 439. В зависимости от используемой нормативной базы и системы классификации эту процедуру можно использовать для определения раздражения кожи тестируемыми веществами в качестве автономного суррогатного теста для тестирования раздражения кожи in vivo или в качестве частичного суррогатного теста в рамках многоуровневой стратегии тестирования.
В принципе, тестируемое химическое вещество наносится местно на трехмерную модель RhE (реконструированный эпидермис человека), состоящую из культивируемых, нетрансформированных эпидермальных кератиноцитов человеческого происхождения, для создания многослойной, высокодифференцированной модели эпидермиса человека. Он состоит из регулярных базальных, шиповатых и зернистых слоев и многослойного рогового слоя, содержащего межклеточные ламеллярные липидные слои, представляющие основные классы липидов, аналогичные тем, которые обнаруживаются in vivo.
Химически-индуцированное раздражение кожи проявляется прежде всего эритемой и отеком и является результатом каскада событий, который начинается, когда химические вещества проходят через роговой слой и повреждают нижние слои кератиноцитов и других клеток кожи.
Поврежденные клетки могут выделять медиаторы воспаления или инициировать воспалительный каскад, который также действует на клетки дермы, особенно на стромальные и эндотелиальные клетки кровеносных сосудов. Именно расширение и повышенная проницаемость эндотелиальных клеток вызывают наблюдаемую эритему и отек. В частности, методы анализа на основе RhE измеряют инициирующие события в каскаде, такие как повреждение клеток или тканей, используя жизнеспособность клеток в качестве показателя при отсутствии какой-либо васкуляризации в системе анализа in vitro.
В модели RhE жизнеспособность клеток измеряется путем ферментативного превращения витального красителя МТТ в синюю соль формазана, которое измеряется количественно после удаления из тканей (МТТ используется для оценки жизнеспособности клеток как функции окислительно-восстановительного потенциала). Раздражающие химические вещества определяются по их способности снижать жизнеспособность клеток ниже определенного порогового уровня (т. е. не менее 2 процентов для категории 50). В зависимости от нормативной базы и применимости этого метода испытаний, тестовые химикаты, которые обеспечивают жизнеспособность клеток выше определенного порогового уровня, могут считаться нераздражающими (т. е. не имеют категории, по крайней мере 50 процентов).
Для реконструкции эпителия следует использовать нетрансформированные кератиноциты человека. Под функциональным роговым слоем должно находиться много слоев живых эпителиальных клеток (базальный слой, шиповатый слой, зернистый слой). Роговой слой должен быть многослойным и содержать необходимый липидный профиль для формирования функционального барьера, стойкого к быстрому проникновению цитотоксических эталонных химических веществ, например, додеацилсульфата натрия.
Барьерная функция должна быть продемонстрирована и может быть оценена путем определения концентрации, при которой эталонное химическое вещество снижает жизнеспособность тканей на 50 процентов после фиксированного времени воздействия, или путем определения времени воздействия, необходимого для снижения жизнеспособности клеток на 50 процентов при применении эталонного химического вещества. в определенной, фиксированной концентрации. Удерживающие свойства модели RhE (реконструированный эпидермис человека) должны предотвращать миграцию материала вокруг рогового слоя в живые ткани, что приводит к ухудшению моделирования воздействия на кожу. Модель RhE не должна содержать бактериальных, вирусных, микоплазменных или грибковых загрязнений.
Среди многочисленных исследований по тестированию, измерениям, анализу и оценке наша организация предоставляет предприятиям в различных секторах, с ее обученным и опытным персоналом и передовым технологическим оборудованием, мы также предоставляем услуги по тестированию, определенные в «OECD TG 439 Раздражение кожи in vitro: реконструированное человеческое Метод испытания эпидермиса» стандарт. дает.
Вы можете попросить нас заполнить нашу форму, чтобы записаться на прием, получить более подробную информацию или запросить оценку.
