Norma ASTM E2315 dotycząca oceny aktywności przeciwdrobnoustrojowej z wykorzystaniem procedury zabijania czasu

Norma „ASTM E2315 Standard Guide for Evaluation of Antimicrobial Activity Using Time-Killing Procedure”, opublikowana przez Amerykańskie Towarzystwo Badań i Materiałów (ASTM), stanowi przykład metody pomiaru zmian w populacjach mikroorganizmów tlenowych w określonym okresie pobierania próbek, gdy dostępne są materiały do ​​badań przeciwdrobnoustrojowych. Norma ta określa różne opcje dotyczące selekcji i wzrostu organizmów, przygotowania inokulum, czasu pobierania próbek oraz temperatury.

W przypadku stosowania tej techniki jako specyficznej metody badawczej, kluczowe jest ujednolicenie wymienionych powyżej zmiennych. Aktywność przeciwdrobnoustrojowa określonych materiałów mierzona tą techniką może się znacznie różnić w zależności od wybranych zmiennych. Ważne jest zrozumienie ograniczeń badań in vitro, szczególnie przy porównywaniu wyników badań przeprowadzonych z różnymi parametrami. Na przykład, wyniki badań mikroorganizmów wymagających suplementów wzrostu lub specyficznych warunków inkubacji mogą nie być bezpośrednio porównywalne z wynikami badań organizmów badanych bez określonych warunków. Znajomość technik mikrobiologicznych jest niezbędna do przeprowadzenia tej procedury.

Tę procedurę można stosować do oceny in vitro stopnia zmniejszenia populacji drobnoustrojów organizmów testowych po narażeniu na działanie materiału testowego.

Czasowe zabijanie w zawiesinie to test laboratoryjny mierzący skuteczność przeciwdrobnoustrojową próbki płynu w krótkim okresie czasu. Test zabijania mierzy redukcję liczby znanych mikroorganizmów w szczepionce w określonym czasie kontaktu. Metoda ta określa efektywny wskaźnik zabijania w gotowym produkcie i jest zazwyczaj wyrażana w procentach (np. zabija 99,9% bakterii w ciągu 30 sekund).

Standardowy test zabijania można wykonać w przypadku dowolnego płynnego produktu końcowego, takiego jak środki do dezynfekcji rąk, dezynfekujące produkty czyszczące, antybakteryjne mydła w płynie, płyny do płukania ust i inne.

Czas kontaktu wybrany do pomiaru czasu zawieszenia powinien być odpowiedni do rodzaju testowanego produktu końcowego. Na przykład, środek do dezynfekcji rąk może być testowany z czasem kontaktu 30 sekund, podczas gdy środek do czyszczenia twardych powierzchni może być testowany z dłuższym czasem kontaktu, w zależności od instrukcji użytkowania.

Do testu zabijania potrzebna jest próbka produktu płynnego o masie 250 g. Próbkę zaszczepia się mieszanką czterech standardowych kultur bakteryjnych. W określonych odstępach czasu (np. 30 sekund, 1 minuta, 2 minuty, 3 minuty i 5 minut) pobiera się 1 g zaszczepionej próbki i umieszcza w rozcieńczalniku biostatycznym w celu inaktywacji biocydów obecnych w próbce. Następnie rozcieńczalnik umieszcza się w odpowiednim podłożu i poddaje inkubacji, co pozwala na ilościowe określenie liczby drobnoustrojów, które przeżyły, metodą płytkową.

Norma ASTM E2315 to kluczowe narzędzie oceny skuteczności środków przeciwdrobnoustrojowych. Norma ta obejmuje metodę oceny redukcji populacji drobnoustrojów po ekspozycji na materiały do ​​badań przeciwdrobnoustrojowych in vitro oraz zmian w populacjach drobnoustrojów tlenowych w określonym czasie. Norma ta została opracowana w celu oceny skuteczności produktów takich jak środki dezynfekujące, środki do dezynfekcji rąk, biocydy i środki czyszczące. Norma kładzie nacisk na elastyczność, oferując różnorodne opcje wyboru organizmów, warunków wzrostu, przygotowania inokulum, czasu pobierania próbek i temperatury, aby sprostać różnym potrzebom badawczym. Podkreśla jednak znaczenie standaryzacji tych zmiennych w celu zapewnienia spójnych i porównywalnych wyników, gdy metoda jest stosowana jako test specyficzny.

Główne cechy tej normy to:

• Zastosowanie: Nadaje się do testowania ciekłych lub stałych środków przeciwdrobnoustrojowych, które tworzą jednorodne roztwory w wodzie.
• Mikroorganizmy: Koncentruje się na mikroorganizmach tlenowych, a wśród opcji znajdują się bakterie, grzyby i drożdże, takie jak Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli i Candida albicans.
• Zmienne: umożliwiają dostosowanie warunków testowych (np. temperatury, odstępów czasu), ale wymagają standaryzacji konkretnych testów, aby zagwarantować powtarzalność.
• Ograniczenia: Wyniki mogą się różnić w zależności od wybranych zmiennych, a porównania między testami przeprowadzonymi w różnych warunkach (np. gdy mikroorganizmy wymagają specjalnych suplementów wzrostu) mogą być nieważne.

Norma ASTM E2315 opisuje procedurę time-kill, która ilościowo mierzy redukcję populacji drobnoustrojów w czasie. Proces obejmuje następujące kroki:

• Przygotowanie zawiesiny drobnoustrojów: Standardową zawiesinę drobnoustrojów przygotowuje się, wykorzystując szczepy reprezentatywne lub standardowe, odpowiednie do zamierzonego zastosowania produktu.
• Ekspozycja na materiał testowy: Materiał testowy o działaniu przeciwdrobnoustrojowym (lub jego rozcieńczenie) miesza się z zawiesiną drobnoustrojów w kontrolowanych warunkach, na przykład w określonej temperaturze (np. 25 stopni, alternatywnie 22 stopnie, 30 stopni lub 38 stopni, w zależności od zastosowania).
• Pobieranie próbek i neutralizacja: Próbki pobiera się w ustalonych odstępach czasu (np. co 15 sekund, 30 sekund, 60 sekund lub dłużej) i neutralizuje w celu zahamowania działania przeciwdrobnoustrojowego. Neutralizacja zapewnia dokładną enumerację żywych mikroorganizmów.
• Ilościowe oznaczenie: Liczbę przeżywających mikroorganizmów liczy się metodą płytkową, a redukcję oblicza się jako log10-krotność lub procentową redukcję w porównaniu do początkowej populacji mikroorganizmów.

Ponieważ norma ta nie określa kryteriów zaliczenia/niezaliczenia testu, pozwala użytkownikom na zdefiniowanie skuteczności w oparciu o ich indywidualne potrzeby. Każde stężenie testu jest zazwyczaj wykonywane w dwóch powtórzeniach, aby zapewnić wiarygodność.

Norma ASTM E2315 jest szeroko stosowana do oceny skuteczności przeciwdrobnoustrojowej produktów i dostarcza kluczowych danych do rozwoju produktów, ich walidacji i zapewnienia zgodności z przepisami. Jej znaczenie polega na tym, że:

• Pomiar skuteczności przeciwdrobnoustrojowej: Badania skuteczności przeciwdrobnoustrojowej oparte na czasie mierzą, jak skutecznie środek przeciwdrobnoustrojowy redukuje populacje drobnoustrojów i dostarczają informacji na temat wskaźników zabijania bakterii, grzybów i innych patogenów.
• Wspieranie rozwoju produktu: Producenci wykorzystują te testy w celu optymalizacji formuł i zapewnienia, że ​​produkty spełniają oczekiwania dotyczące wydajności, zanim zostaną wprowadzone na rynek.
• Zapewnienie zgodności z przepisami: Standaryzowany protokół pomaga producentom wykazać zgodność ze standardami branżowymi, zwiększając niezawodność produktów na rynkach globalnych.
• Szerokie zastosowanie: Metodę tę można stosować we wszystkich sektorach, w tym w ochronie zdrowia (np. środki dezynfekujące), produktach konsumenckich (np. środki do dezynfekcji rąk) i zastosowaniach przemysłowych (np. produkty biobójcze).

Norma ta uwzględnia również ograniczenia badań in vitro, stwierdzając, że wyniki mogą nie odzwierciedlać bezpośrednio warunków rzeczywistych i że porównania pomiędzy badaniami o różnych parametrach należy przeprowadzać ostrożnie.

Norma ASTM E2315 podkreśla, że ​​użytkownicy powinni określić odpowiednie praktyki bezpieczeństwa i higieny pracy, ponieważ procedura może obejmować niebezpieczne substancje, procesy lub urządzenia. Użytkownicy powinni również ustalić stosowalność wymogów prawnych przed przeprowadzeniem testów.

W rezultacie norma ASTM E2315 stanowi fundamentalny element oceny skuteczności produktów przeciwdrobnoustrojowych. Jej elastyczna, a zarazem rygorystyczna metodologia wspiera rozwój produktów i zgodność z przepisami, umożliwiając producentom ocenę redukcji mikroorganizmów w kontrolowanych warunkach. Zapewniając znormalizowane podejście i gwarantując wiarygodne i powtarzalne wyniki, norma ta stała się niezbędnym narzędziem dla branż dążących do skutecznej walki z zanieczyszczeniem mikrobiologicznym.

Nasza organizacja, działająca od wielu lat i skrupulatnie śledząca globalny rozwój nauki i technologii, zatrudnia wykwalifikowany zespół i rozbudowaną infrastrukturę do przeprowadzania testów, pomiarów i analiz w szerokim zakresie dziedzin dla firm ze wszystkich sektorów. W tym kontekście świadczymy również usługi testowe zgodnie z normą ASTM E2315 dotyczącą oceny aktywności przeciwdrobnoustrojowej z wykorzystaniem procedury Time Killing.