Standarden "OECD TG 435 In vitro membranbarriärtestmetod för hudirritation" publicerad under OECD:s riktlinjer för ansvarsfullt företagande för multinationella företag (OECD:s riktlinjer) beskriver en in vitro membranbarriärtestmetod som används för att identifiera frätande kemikalier. Denna testmetod använder ett konstgjort membran utformat för att reagera på frätande kemikalier på liknande sätt som djurhud.
In vitro membranbarriärtestmetoden kan användas för att testa fasta ämnen, vätskor och emulsioner. Vattenhaltiga ämnen med pH-värden i intervallet 4,5 till 8,5 är dock i allmänhet inte lämpliga för testning.
Den beskrivna testmetoden möjliggör identifiering av frätande kemikalier och blandningar och subkategorisering av frätande ämnen som tillåts i det globalt harmoniserade systemet för klassificering och märkning av kemikalier. Denna klassificering baseras på ämnets penetrationstid genom membranbarriären.
Detta testsystem består av två komponenter:
Vid tillämpning av detta testsystem förbereds ett lämpligt antal replikat för varje testämne och dess motsvarande kontroller. Appliceringstiderna för testämnet på membranbarriären registreras och förskjuts. Tiden (i minuter) mellan applicering av testämnet på membranbarriären och barriärpenetrering används för att bestämma testämnets korrosivitet.
Hudens frätande förmåga har traditionellt fastställts genom att testkemikalien appliceras på huden på levande djur och bedöma graden av vävnadsskada efter en viss tidsperiod. Förutom OECD TG 435-standarden har ett antal andra in vitro-testmetoder antagits som alternativ till standardin vivo kaninhudsprocedur (OECD TG 404) som används för att identifiera frätande kemikalier. OECD:s riktlinjer rekommenderar användning av validerade och accepterade in vitro-testmetoder.
I detta modulära tillvägagångssätt används positiva resultat från in vitro-testmetoder för att klassificera en kemikalie som frätande utan behov av djurförsök. På så sätt syftar man till att förhindra användning av djur i försök och att förebygga den smärta och ångest som kan uppstå om djur används för detta ändamål.
Denna testmetod upptäcker membranbarriärskador orsakade av frätande testkemikalier vid applicering av testkemikalien på ytan av den syntetiska makromolekylära membranbarriären via ett "kemiskt detektionssystem", möjligen genom samma irritationsmekanismer som verkar i levande hud.
Penetrering eller nedbrytning av membranbarriären kan mätas med ett antal procedurer eller kemiska detektionssystem, inklusive förändringen i färgen på pH-indikatorfärgämnet eller annan egenskap hos indikatorlösningen under barriären.
Det måste fastställas att membranbarriären är giltig för dess avsedda användning, det vill säga relevant och tillförlitlig. Detta inkluderar att säkerställa att olika preparat är konsekventa när det gäller deras barriäregenskaper, såsom att kunna upprätthålla en barriär mot icke-frätande kemikalier, att kunna kategorisera kemikaliers frätande egenskaper bland korrosivitetsunderkategorierna i det globalt harmoniserade systemet för klassificering och märkning av kemikalier. Den tilldelade klassificeringen baseras på den tid det tar för en kemikalie att passera membranbarriären och penetrera indikatorlösningen.
Innan den rutinmässiga användningen av in vitro membranbarriärtestmetoden, måste laboratorier följa denna standard och visa sin tekniska kompetens genom att korrekt klassificera de föreslagna kvalificeringsämnena. Om ett förtecknat ämne inte är tillgängligt eller motiverat kan ett annat ämne för vilket det finns tillräckliga referensdata in vivo och in vitro användas.
Tester ska utföras vid omgivningstemperatur (intervall 17-25 grader) och komponenterna ska uppfylla de villkor som anges i standarden.
Innan membranbarriärtestning utförs utförs ett kemisk kompatibilitetstest för att fastställa om testkemikalien kan detekteras av kemikaliedetektionssystemet. Om kemikaliedetektionssystemet inte detekterar testkemikalien är membranbarriärtestmetoden inte lämplig för att bedöma den potentiella korrosiviteten hos den testkemikalien och en annan testmetod bör användas. Det kemiska detektionssystemet och exponeringsförhållandena som används för kompatibilitetstestning bör återspegla exponering i efterföljande membranbarriärtestning.
Om det är lämpligt för testmetoden, bör en testkemikalie kvalificerad genom kompatibilitetstestning utsättas för ett tidsskalakategoritest, vilket är ett screeningtest för att skilja mellan svaga och starka syror eller baser. Till exempel, i den validerade referenstestmetoden, används ett tidsskalekategoriseringstest för att indikera vilka två tidsskalor som ska användas beroende på om betydande sura eller alkaliska reserver detekteras. Beroende på testkemikaliens syra- eller alkalireserv bör två olika genombrottstidskalor användas för att bestämma frätande egenskaper och det globalt harmoniserade systemet för klassificering och märkning av kemikalier i underkategorin hudfrätande egenskaper.
Membranbarriären består av två komponenter: en proteinhaltig makromolekylär vattenhaltig gel och ett permeabelt stödmembran. Proteinhaltig gel bör vara ogenomtränglig för vätskor och fasta ämnen men kan eroderas och göras permeabel. Den fullt konstruerade membranbarriären måste förvaras under förutbestämda förhållanden som har visat sig förhindra nedbrytning av gelén, såsom uttorkning, mikrobiell tillväxt, skjuvning eller sprickbildning, vilket skulle försämra dess prestanda. Acceptabel förvaringsperiod bör fastställas och membranbarriärpreparat bör inte användas efter denna period. Det permeabla stödmembranet ger mekaniskt stöd åt den proteinhaltiga gelén under gelningsprocessen och exponering för testkemikalien. Det stödjande membranet bör förhindra att gelén hänger eller förskjuts och bör vara lätt genomsläpplig för alla testkemikalier.
När det gäller kemikaliedetektionssystemet måste indikatorlösningen, som är samma lösning som används för kompatibilitetstestning, svara på närvaron av en testkemikalie. Ett pH-indikatorfärgämne eller en kombination av färgämnen, såsom kresolrött och metylorange, bör användas, som visar en färgförändring som svar på närvaron av testkemikalien.
Bland de många test-, mätnings-, analys- och utvärderingsstudier som den tillhandahåller för företag inom olika sektorer, tillhandahåller vår organisation även testtjänster definierade i standarden "OECD TG 435 In vitro membranbarriärtestmetod för hudirritation", med utbildad och expert personal och avancerad teknisk utrustning.
Du kan be oss fylla i vårt formulär för att få en tid, för att få mer detaljerad information eller för att begära en utvärdering.
