Standarden ”OECD TG 439 In vitro skin irritation: Reconstituted human epidermis test method”, publicerad enligt OECD:s riktlinjer för ansvarsfullt affärsuppförande för multinationella företag (OECD:s riktlinjer) , beskriver en in vitro-testmetod som används för faroidentifiering av irriterande kemikalier (ämnen och blandningar) i enlighet med FN:s globala harmoniserade klassificerings- och märkningssystem (GHS) kategori 2.
Denna metod är baserad på rekonstruerad mänsklig epidermis (RhE), som i sin övergripande design nära efterliknar de biokemiska och fysiologiska egenskaperna hos de övre delarna av mänsklig hud. Cellviabilitet mäts genom den enzymatiska omvandlingen av det vitala färgämnet MTT till det blå formazansaltet, vilket mäts kvantitativt efter extraktion från vävnader. Irriterande testämnen definieras av deras förmåga att minska cellviabiliteten under definierade tröskelvärden (lika med 2 procent eller mindre för kategori 50). Färgade kemikalier kan också testas med en HPLC-procedur (high-performance liquid chromatography).
Det finns tre validerade testmetoder som överensstämmer med OECD TG 439-standarden. Beroende på regelverket och klassificeringssystemet som används, kan denna procedur användas för att bestämma hudirritation av testämnen som ett fristående surrogattest för hudirritationstestning in vivo eller som ett partiellt surrogattest inom en teststrategi i nivåer.
I princip appliceras testkemikalien topiskt på en tredimensionell RhE-modell (rekonstruerad human epidermis) som består av odlade, otransformerade mänskliga epidermala keratinocyter för att skapa en flerskiktad, mycket differentierad modell av den mänskliga epidermis. Den består av regelbundna basala, taggiga och granulära skikt och ett flerskiktat stratum corneum som innehåller intercellulära lamellära lipidskikt som representerar stora lipidklasser liknande de som finns in vivo.
Kemikalieinducerad hudirritation manifesteras främst av erytem och ödem och är resultatet av en kaskad av händelser som börjar när kemikalier passerar genom stratum corneum och skadar de nedre lagren av keratinocyter och andra hudceller.
Skadade celler kan frigöra inflammatoriska mediatorer eller initiera en inflammatorisk kaskad som också verkar på celler i dermis, särskilt stroma- och endotelcellerna i blodkärlen. Det är endotelcellers expansion och ökade permeabilitet som producerar det observerade erytem och ödem. I synnerhet mäter RhE-baserade analysmetoder initierande händelser i kaskaden, såsom cell- eller vävnadsskada, med användning av cellviabilitet som avläsning när det inte finns någon vaskularisering i in vitro-analyssystemet.
I RhE-modellen mäts cellviabilitet genom den enzymatiska omvandlingen av det vitala färgämnet MTT till det blå formazansaltet, vilket mäts kvantitativt efter avlägsnande från vävnader (MTT används för att bedöma cellviabilitet som en funktion av redoxpotential). Irriterande kemikalier definieras av deras förmåga att minska cellviabiliteten under definierade tröskelnivåer (dvs minst 2 procent för kategori 50). Beroende på regelverket och tillämpligheten av denna testmetod kan testkemikalier som producerar cellviabilitet över en definierad tröskelnivå anses vara icke-irriterande (dvs. ingen kategori, minst 50 procent).
Otransformerade humana keratinocyter bör användas för att rekonstruera epitelet. Under ett funktionellt stratum corneum måste det finnas många lager av levande epitelceller (basallager, stratum spinosum, stratum granulosum). Stratum corneum måste vara flerskiktigt, innehållande den väsentliga lipidprofilen för att bilda en funktionell barriär med segheten för att motstå snabb penetrering av cytotoxiska referenskemikalier, t.ex. natriumdodeacylsulfat.
Barriärfunktionen måste påvisas och kan utvärderas genom att bestämma den koncentration vid vilken en referenskemikalie minskar vävnadens livsduglighet med 50 procent efter en bestämd exponeringstid, eller genom att bestämma den exponeringstid som krävs för att minska cellviabiliteten med 50 procent vid applicering av referenskemikalien vid en specificerad, fast koncentration. Retentionsegenskaperna hos RhE-modellen (rekonstruerad mänsklig epidermis) bör förhindra material runt stratum corneum från att migrera in i levande vävnad, vilket resulterar i dålig modellering av hudexponering. RhE-modellen måste vara fri från bakterie-, virus-, mykoplasma- eller svampkontamination.
Bland de många testnings-, mätnings-, analys- och utvärderingsstudier som vår organisation tillhandahåller för företag inom olika sektorer, med sin utbildade och sakkunniga personal och avancerad teknisk utrustning, tillhandahåller vi även testtjänster som definieras i "OECD TG 439 In vitro hudirritation: Rekonstruerad människa epidermis testmetod" standard. ger.
Du kan be oss fylla i vårt formulär för att få en tid, för att få mer detaljerad information eller för att begära en utvärdering.
