Phương pháp thử nghiệm rào cản màng trong ống nghiệm OECD TG 435 đối với kích ứng da

Tiêu chuẩn “Phương pháp kiểm tra hàng rào màng trong ống nghiệm OECD TG 435 đối với kích ứng da” được xuất bản theo hướng dẫn của OECD về ứng xử kinh doanh có trách nhiệm đối với các công ty đa quốc gia (hướng dẫn của OECD) mô tả phương pháp kiểm tra hàng rào màng trong ống nghiệm được sử dụng để xác định các hóa chất ăn mòn. Phương pháp thử nghiệm này sử dụng màng nhân tạo được thiết kế để phản ứng với các hóa chất ăn mòn theo cách tương tự như da động vật.

Phương pháp kiểm tra hàng rào màng in vitro có thể được sử dụng để kiểm tra chất rắn, chất lỏng và nhũ tương. Tuy nhiên, các chất chứa nước có giá trị pH nằm trong khoảng 4,5 đến 8,5 thường không thích hợp để thử nghiệm.

Phương pháp thử nghiệm được mô tả cho phép xác định các hóa chất và hỗn hợp ăn mòn cũng như phân loại các chất ăn mòn như được phép trong hệ thống phân loại và ghi nhãn hóa chất hài hòa toàn cầu. Sự phân loại này dựa trên thời gian thâm nhập của chất qua hàng rào màng.

Hệ thống thử nghiệm này bao gồm hai thành phần:

• Một rào cản sinh học cao phân tử tổng hợp
• Hệ thống phát hiện hóa chất (phát hiện chất thử)

Khi áp dụng hệ thống thử nghiệm này, số lượng lặp lại thích hợp được chuẩn bị cho từng chất thử nghiệm và các chất đối chứng tương ứng của nó. Thời gian áp dụng chất thử vào hàng rào màng được ghi lại và so le. Thời gian (tính bằng phút) giữa việc áp dụng chất thử vào hàng rào màng và sự xuyên qua hàng rào được sử dụng để xác định độ ăn mòn của chất thử.

Theo truyền thống, độ ăn mòn da được xác định bằng cách bôi hóa chất thử nghiệm lên da động vật sống và đánh giá mức độ tổn thương mô sau một khoảng thời gian xác định. Bên cạnh tiêu chuẩn OECD TG 435, một số phương pháp thử nghiệm in vitro khác đã được áp dụng thay thế cho quy trình tiêu chuẩn trên da thỏ in vivo (OECD TG 404) được sử dụng để xác định các hóa chất ăn mòn. Hướng dẫn của OECD khuyến nghị sử dụng các phương pháp thử nghiệm in vitro đã được xác nhận và chấp nhận.

Trong phương pháp mô-đun này, kết quả tích cực từ các phương pháp thử nghiệm trong ống nghiệm được sử dụng để phân loại hóa chất là chất ăn mòn mà không cần thử nghiệm trên động vật. Bằng cách này, nó nhằm mục đích ngăn chặn việc sử dụng động vật trong các cuộc thử nghiệm và ngăn ngừa sự đau đớn và khó chịu có thể phát sinh nếu động vật được sử dụng cho mục đích này.

Phương pháp thử nghiệm này phát hiện tổn thương hàng rào màng do các hóa chất thử nghiệm ăn mòn gây ra khi bôi hóa chất thử nghiệm lên bề mặt của hàng rào màng cao phân tử tổng hợp thông qua “hệ thống phát hiện hóa học”, có thể bằng các cơ chế kích ứng tương tự hoạt động trên da sống.

Sự xâm nhập hoặc phá vỡ hàng rào màng có thể được đo bằng một số quy trình hoặc hệ thống phát hiện hóa học, bao gồm sự thay đổi màu của thuốc nhuộm chỉ thị pH hoặc tính chất khác của dung dịch chỉ thị bên dưới rào cản.

Phải xác định rằng hàng rào màng có hiệu lực cho mục đích sử dụng của nó, nghĩa là có liên quan và đáng tin cậy. Điều này bao gồm việc đảm bảo rằng các chế phẩm khác nhau nhất quán về đặc tính rào cản của chúng, chẳng hạn như có thể duy trì rào cản chống lại các hóa chất không ăn mòn, có thể phân loại các đặc tính ăn mòn của hóa chất trong số các danh mục phụ ăn mòn của hệ thống hài hòa toàn cầu để phân loại và ghi nhãn hóa chất. Việc phân loại được chỉ định dựa trên thời gian cần thiết để một hóa chất vượt qua hàng rào màng và thấm vào dung dịch chỉ thị.

Trước khi sử dụng thường xuyên phương pháp thử nghiệm rào cản màng in vitro, các phòng thí nghiệm phải tuân thủ tiêu chuẩn này và chứng minh năng lực kỹ thuật của mình bằng cách phân loại chính xác các chất đủ tiêu chuẩn được đề xuất. Trong trường hợp một chất được liệt kê không có sẵn hoặc không được chứng minh, chất khác có đủ dữ liệu tham chiếu in vivo và in vitro có thể được sử dụng.

Các thử nghiệm phải được thực hiện ở nhiệt độ môi trường (trong khoảng 17-25 độ) và các thành phần phải tuân thủ các điều kiện quy định trong tiêu chuẩn.

Trước khi thực hiện kiểm tra hàng rào màng, kiểm tra khả năng tương thích hóa học được thực hiện để xác định xem hệ thống phát hiện hóa chất có thể phát hiện được hóa chất thử nghiệm hay không. Nếu hệ thống phát hiện hóa chất không phát hiện được hóa chất thử nghiệm thì phương pháp thử nghiệm rào cản màng không phù hợp để đánh giá khả năng ăn mòn tiềm tàng của hóa chất thử nghiệm đó và nên sử dụng phương pháp thử nghiệm khác. Hệ thống phát hiện hóa chất và các điều kiện tiếp xúc được sử dụng để thử nghiệm khả năng tương thích phải phản ánh mức độ tiếp xúc trong thử nghiệm rào cản màng tiếp theo.

Nếu phù hợp với phương pháp thử nghiệm, hóa chất thử nghiệm đủ điều kiện bằng thử nghiệm tương thích phải được thử nghiệm theo loại thời gian, đây là thử nghiệm sàng lọc để phân biệt giữa axit hoặc bazơ yếu và mạnh. Ví dụ, trong phương pháp thử nghiệm tham chiếu đã được xác nhận, thử nghiệm phân loại thang thời gian được sử dụng để chỉ ra hai thang thời gian nào nên được sử dụng tùy thuộc vào việc phát hiện trữ lượng axit hoặc kiềm đáng kể. Tùy thuộc vào trữ lượng axit hoặc kiềm của hóa chất thử nghiệm, nên sử dụng hai thang thời gian đột phá khác nhau để xác định độ ăn mòn và hệ thống hài hòa toàn cầu để phân loại và dán nhãn cho danh mục phụ ăn mòn da của hóa chất.

Hàng rào màng bao gồm hai thành phần: gel nước đa phân tử có chứa protein và màng hỗ trợ có tính thấm. Gel protein phải không thấm chất lỏng và chất rắn nhưng có thể bị xói mòn và có tính thấm. Hàng rào màng được xây dựng hoàn chỉnh phải được bảo quản trong các điều kiện xác định trước đã được chứng minh là có thể ngăn chặn sự xuống cấp của gel, chẳng hạn như hút ẩm, phát triển của vi sinh vật, cắt hoặc nứt, những điều sẽ làm giảm hiệu suất của nó. Cần xác định thời gian bảo quản chấp nhận được và không nên sử dụng các chế phẩm rào cản màng sau thời gian này. Màng hỗ trợ có tính thấm cung cấp hỗ trợ cơ học cho gel protein trong quá trình tạo gel và tiếp xúc với hóa chất thử nghiệm. Màng đỡ phải ngăn ngừa gel bị chảy xệ hoặc dịch chuyển và phải dễ dàng thấm vào tất cả các hóa chất thử nghiệm.

Về hệ thống phát hiện hóa chất, dung dịch chỉ thị, cũng là dung dịch được sử dụng để kiểm tra khả năng tương thích, phải phản ứng với sự hiện diện của hóa chất thử nghiệm. Nên sử dụng thuốc nhuộm chỉ thị pH hoặc sự kết hợp của các thuốc nhuộm, chẳng hạn như đỏ cresol và cam methyl, chúng sẽ cho thấy sự thay đổi màu sắc khi phản ứng với sự có mặt của hóa chất thử nghiệm.

Trong số rất nhiều nghiên cứu thử nghiệm, đo lường, phân tích và đánh giá mà tổ chức này cung cấp cho các doanh nghiệp thuộc nhiều lĩnh vực khác nhau, tổ chức của chúng tôi cũng cung cấp các dịch vụ thử nghiệm được xác định theo tiêu chuẩn "Phương pháp thử nghiệm rào cản màng trong ống nghiệm OECD TG 435 đối với kích ứng da", với đội ngũ nhân viên được đào tạo và chuyên môn và thiết bị công nghệ tiên tiến.