OECD TG 439 Kích ứng da trong ống nghiệm: Phương pháp thử nghiệm biểu bì tái tạo ở người

Tiêu chuẩn “OECD TG 439 Kích ứng da trong ống nghiệm: Phương pháp thử nghiệm trên biểu bì người được tái tạo”, được công bố theo hướng dẫn của OECD về hành vi kinh doanh có trách nhiệm đối với các công ty đa quốc gia (hướng dẫn của OECD) , mô tả một phương pháp thử nghiệm trong ống nghiệm được sử dụng để xác định mối nguy hại của các hóa chất (chất và hỗn hợp) gây kích ứng theo Hệ thống Phân loại và Ghi nhãn Toàn cầu Hài hòa của Liên Hợp Quốc (GHS) Loại 2.

Phương pháp này dựa trên lớp biểu bì tái tạo của con người (RhE), trong thiết kế tổng thể của nó mô phỏng chặt chẽ các đặc tính sinh hóa và sinh lý của các phần trên của da người. Khả năng sống của tế bào được đo bằng sự chuyển đổi enzyme của thuốc nhuộm quan trọng MTT thành muối formazan màu xanh, được đo định lượng sau khi chiết xuất từ ​​​​mô. Các chất thử nghiệm gây kích ứng được xác định bằng khả năng làm giảm khả năng sống sót của tế bào dưới mức ngưỡng xác định (bằng 2% hoặc ít hơn đối với loại 50). Hóa chất màu cũng có thể được kiểm tra bằng quy trình HPLC (sắc ký lỏng hiệu năng cao).

Có ba phương pháp thử nghiệm đã được xác nhận tuân thủ tiêu chuẩn OECD TG 439. Tùy thuộc vào khung pháp lý và hệ thống phân loại được sử dụng, quy trình này có thể được sử dụng để xác định độ kích ứng da của các chất thử dưới dạng thử nghiệm thay thế độc lập cho thử nghiệm kích ứng da in vivo hoặc dưới dạng thử nghiệm thay thế một phần trong chiến lược thử nghiệm theo bậc.

Về nguyên tắc, hóa chất thử nghiệm được bôi tại chỗ lên mô hình RhE (biểu bì tái tạo của con người) ba chiều bao gồm các tế bào sừng biểu bì có nguồn gốc từ con người được nuôi cấy, chưa được chuyển hóa để tạo ra một mô hình đa lớp, có độ phân biệt cao của biểu bì con người. Nó bao gồm các lớp cơ bản, gai và hạt đều đặn và một lớp sừng nhiều lớp chứa các lớp lipid lamellar nội bào đại diện cho các lớp lipid chính tương tự như các lớp được tìm thấy trong cơ thể.

Kích ứng da do hóa chất được biểu hiện chủ yếu bằng ban đỏ và phù nề và là kết quả của một loạt các sự kiện bắt đầu khi hóa chất đi qua lớp sừng và làm tổn thương các lớp tế bào sừng bên dưới và các tế bào da khác.

Các tế bào bị tổn thương có thể giải phóng các chất trung gian gây viêm hoặc bắt đầu một đợt viêm cũng tác động lên các tế bào ở lớp hạ bì, đặc biệt là các tế bào mô đệm và nội mô của mạch máu. Chính sự giãn nở và tăng tính thấm của các tế bào nội mô tạo ra ban đỏ và phù nề quan sát được. Đặc biệt, các phương pháp xét nghiệm dựa trên RhE đo lường các sự kiện ban đầu trong chuỗi, chẳng hạn như tổn thương tế bào hoặc mô, sử dụng khả năng sống của tế bào làm chỉ số đọc khi không có sự tạo mạch trong hệ thống xét nghiệm in vitro.

Trong mô hình RhE, khả năng sống của tế bào được đo bằng quá trình chuyển đổi enzyme của thuốc nhuộm quan trọng MTT thành muối formazan màu xanh, được đo định lượng sau khi loại bỏ khỏi mô (MTT được sử dụng để đánh giá khả năng sống của tế bào như một hàm của tiềm năng oxy hóa khử). Các hóa chất gây kích ứng được xác định bằng khả năng làm giảm khả năng sống sót của tế bào dưới mức ngưỡng xác định (tức là ít nhất 2% đối với loại 50). Tùy thuộc vào khung pháp lý và khả năng áp dụng của phương pháp thử nghiệm này, các hóa chất thử nghiệm tạo ra khả năng sống sót của tế bào trên mức ngưỡng xác định có thể được coi là không gây kích ứng (tức là không có loại nào, ít nhất là 50%).

Các tế bào keratinocytes chưa được chuyển hóa của con người nên được sử dụng để tái tạo lại biểu mô. Dưới một lớp sừng chức năng phải có nhiều lớp tế bào biểu mô sống (lớp đáy, lớp gai, lớp hạt). Lớp sừng phải có nhiều lớp, chứa thành phần lipid thiết yếu để tạo thành một hàng rào chức năng có độ bền cao để chống lại sự xâm nhập nhanh chóng của các hóa chất tham chiếu gây độc tế bào, ví dụ: natri dodeacyl sulfate.

Chức năng rào cản phải được chứng minh và có thể được đánh giá bằng cách xác định nồng độ tại đó hóa chất tham chiếu làm giảm 50% khả năng sống của mô sau thời gian phơi nhiễm cố định hoặc bằng cách xác định thời gian tiếp xúc cần thiết để giảm 50% khả năng sống của tế bào khi sử dụng hóa chất tham chiếu. ở một nồng độ xác định, cố định. Đặc tính lưu giữ của mô hình RhE (lớp biểu bì tái tạo của con người) sẽ ngăn không cho vật liệu xung quanh lớp sừng di chuyển vào mô sống, dẫn đến mô hình tiếp xúc với da kém. Mô hình RhE phải không bị nhiễm vi khuẩn, vi rút, mycoplasma hoặc nấm.

Trong số rất nhiều nghiên cứu thử nghiệm, đo lường, phân tích và đánh giá mà tổ chức của chúng tôi cung cấp cho các doanh nghiệp trong nhiều lĩnh vực khác nhau, với đội ngũ chuyên gia được đào tạo và thiết bị công nghệ tiên tiến, chúng tôi cũng cung cấp các dịch vụ thử nghiệm được xác định trong "OECD TG 439 Kích ứng da trong ống nghiệm: Tái tạo da ở người tiêu chuẩn của phương pháp kiểm tra biểu bì".