OECD TG 439 In Vitro кожно дразнене: Метод за изпитване на реконструиран човешки епидермис

Стандартът „OECD TG 439 In vitro кожно дразнене: Метод за изпитване с реконституиран човешки епидермис“, публикуван съгласно насоките на OECD за отговорно бизнес поведение за мултинационални компании (насоки на OECD) , описва in vitro метод за изпитване, използван за идентифициране на опасността от дразнещи химикали (вещества и смеси) в съответствие с категория 2 на Глобалната хармонизирана система за класификация и етикетиране (GHS) на ООН.

Този метод се основава на реконструиран човешки епидермис (RhE), който в цялостния си дизайн имитира точно биохимичните и физиологичните свойства на горните части на човешката кожа. Клетъчната жизнеспособност се измерва чрез ензимно превръщане на жизненоважното багрило МТТ в синята формазанова сол, което се измерва количествено след екстракция от тъканите. Дразнещите изпитвани вещества се определят от тяхната способност да намаляват жизнеспособността на клетките под определените прагови нива (равни на 2 процента или по-малко за категория 50). Оцветените химикали могат също да бъдат тествани с помощта на HPLC (високоефективна течна хроматография).

Има три валидирани метода за изпитване, които отговарят на стандарта OECD TG 439. В зависимост от използваната регулаторна рамка и класификационна система, тази процедура може да се използва за определяне на кожното дразнене на изпитваните вещества като самостоятелен сурогатен тест за in vivo изпитване за кожно дразнене или като частичен сурогатен тест в рамките на многостепенна стратегия за изпитване.

По принцип изпитваният химикал се прилага локално върху триизмерен модел на RhE (реконструиран човешки епидермис), състоящ се от култивирани, нетрансформирани човешки епидермални кератиноцити, за да се създаде многослоен, силно диференциран модел на човешкия епидермис. Състои се от правилни базални, бодливи и гранулирани слоеве и многослоен рогов слой, съдържащ междуклетъчни ламеларни липидни слоеве, представляващи основни липидни класове, подобни на тези, открити in vivo.

Индуцираното от химикали кожно дразнене се проявява основно чрез еритема и оток и е резултат от каскада от събития, които започват, когато химикалите преминават през роговия слой и увреждат долните слоеве на кератиноцитите и други кожни клетки.

Увредените клетки могат да освободят възпалителни медиатори или да инициират възпалителна каскада, която също действа върху клетките в дермата, особено стромалните и ендотелните клетки на кръвоносните съдове. Това е разширяването и повишената пропускливост на ендотелните клетки, които произвеждат наблюдаваните еритема и оток. По-специално, методите за анализ, базирани на RhE, измерват иницииращите събития в каскадата, като клетъчно или тъканно увреждане, използвайки клетъчната жизнеспособност като показание, когато няма васкуларизация в системата за in vitro анализ.

В модела RhE жизнеспособността на клетките се измерва чрез ензимното превръщане на жизненоважното багрило МТТ в синята формазанова сол, което се измерва количествено след отстраняване от тъканите (МТТ се използва за оценка на жизнеспособността на клетките като функция на редокс потенциала). Дразнещите химикали се определят от способността им да намаляват жизнеспособността на клетките под определените прагови нива (т.е. най-малко 2 процента за категория 50). В зависимост от регулаторната рамка и приложимостта на този метод за изпитване, изпитваните химикали, които предизвикват клетъчна жизнеспособност над определено прагово ниво, могат да се считат за недразнещи (т.е. без категория, поне 50 процента).

Нетрансформирани човешки кератиноцити трябва да се използват за реконструкция на епитела. Под функционален стратум корнеум трябва да има много слоеве от живи епителни клетки (базален слой, стратум спинозум, стратум гранулозум). Роговият слой трябва да бъде многослоен, съдържащ основния липиден профил, за да образува функционална бариера с издръжливостта, за да устои на бързото проникване на цитотоксични референтни химикали, например натриев додеацил сулфат.

Бариерната функция трябва да бъде демонстрирана и може да бъде оценена чрез определяне на концентрацията, при която референтният химикал намалява жизнеспособността на тъканите с 50 процента след фиксирано време на експозиция, или чрез определяне на времето на експозиция, необходимо за намаляване на жизнеспособността на клетките с 50 процента при прилагане на референтния химикал при определена, фиксирана концентрация. Свойствата на задържане на модела RhE (реконструиран човешки епидермис) трябва да предотвратят мигрирането на материала около роговия слой в живата тъкан, което води до лошо моделиране на експозицията на кожата. Моделът RhE не трябва да съдържа бактериално, вирусно, микоплазмено или гъбично замърсяване.

Сред многобройните проучвания за тестване, измерване, анализ и оценка, които нашата организация предоставя за бизнеса в различни сектори, със своя обучен и експертен персонал и усъвършенствано технологично оборудване, ние също така предоставяме услуги за тестване, определени в „OECD TG 439 In vitro кожно дразнене: Реконструирано човешко метод за изследване на епидермиса" стандарт. дава.