OECD TG 435 皮肤刺激体外膜屏障测试方法

根据《OECD 跨国公司负责任商业行为指南》（OECD 指南）发布的标准“OECD TG 435 皮肤刺激体外膜屏障测试方法”描述了用于识别腐蚀性化学品的体外膜屏障测试方法。该测试方法使用人造膜，旨在以与动物皮肤类似的方式与腐蚀性化学品发生反应。

体外膜屏障测试方法可用于测试固体、液体和乳液。但pH值在4,5至8,5范围内的含水物质一般不适合测试。

所述测试方法允许识别腐蚀性化学品和混合物，以及全球化学品统一分类和标签制度允许的腐蚀性物质的子分类。该分类基于物质穿过膜屏障的渗透时间。

该测试系统由两部分组成：

• 合成高分子生物屏障
• 化学检测系统（检测测试物质）

当应用该测试系统时，为每种测试物质及其相应的对照物准备适当数量的重复。记录并交错记录测试物质施加到膜屏障上的时间。将测试物质施加到膜屏障和屏障渗透之间的时间（以分钟为单位）用于确定测试物质的腐蚀性。

传统上，皮肤腐蚀性是通过将测试化学品应用于活体动物的皮肤并在指定时间段后评估组织损伤程度来确定的。除了 OECD TG 435 标准外，还采用了许多其他体外测试方法作为用于识别腐蚀性化学品的标准体内兔皮肤程序 (OECD TG 404) 的替代方法。经合组织指南建议使用经过验证和接受的体外测试方法。

在这种模块化方法中，体外测试方法的阳性结果用于将化学品分类为腐蚀性物质，而无需进行动物测试。通过这种方式，其目的是防止在测试中使用动物，并防止将动物用于此目的可能产生的疼痛和困扰。

该测试方法通过“化学检测系统”将测试化学品应用于合成大分子膜屏障的表面，检测由腐蚀性测试化学品引起的膜屏障损伤，可能与活体皮肤中的刺激机制相同。

膜屏障的渗透或破损可以通过多种程序或化学检测系统来测量，包括pH指示剂染料的颜色变化或屏障下方指示剂溶液的其他性质的变化。

必须确定膜屏障对其预期用途有效，即相关且可靠。这包括确保不同的制剂在阻隔性能方面保持一致，例如能够保持对非腐蚀性化学品的阻隔，能够将化学品的腐蚀性归类到全球统一分类系统的腐蚀性子类别中。化学品标签。分配的分类基于化学品穿过膜屏障并渗透到指示剂溶液中所需的时间。

在常规使用体外膜屏障测试方法之前，实验室必须遵守本标准，并通过对拟议的鉴定物质进行正确分类来证明其技术能力。如果列出的物质不可用或合理，则可以使用有足够的体内和体外参考数据的另一种物质。

测试必须在环境温度（范围17-25度）下进行，并且组件必须符合标准中规定的条件。

在进行膜屏障测试之前，进行化学相容性测试以确定测试化学品是否可以被化学检测系统检测到。如果化学品检测系统未检测到测试化学品，则膜屏障测试方法不适合评估该测试化学品的潜在腐蚀性，应使用不同的测试方法。用于兼容性测试的化学检测系统和暴露条件应反映后续膜屏障测试中的暴露情况。

如果适合该测试方法，则通过相容性测试合格的测试化学品应进行时间尺度类别测试，这是区分弱酸或强酸或强碱的筛选测试。例如，在经过验证的参考测试方法中，时间尺度分类测试用于指示根据是否检测到显着的酸或碱储备而应使用哪两个时间尺度。根据测试化学品的酸或碱储备，应使用两种不同的突破时间尺度来确定腐蚀性和化学品皮肤腐蚀性子类别的全球统一分类和标签系统。

膜屏障由两部分组成：蛋白质大分子水凝胶和渗透性支撑膜。蛋白质凝胶应该是液体和固体不可渗透的，但可以被侵蚀并变得可渗透。完全构建的膜屏障必须储存在预定条件下，这些条件已被证明可以防止凝胶降解，例如干燥、微生物生长、剪切或破裂，这会降低其性能。应确定可接受的储存期，在此期限后不应使用膜屏障制剂。可渗透支撑膜在凝胶化过程和暴露于测试化学品的过程中为蛋白质凝胶提供机械支撑。支撑膜应防止凝胶下垂或移动，并且应易于渗透所有测试化学品。

就化学检测系统而言，指示剂溶液与用于兼容性测试的溶液相同，必须对测试化学品的存在做出反应。应使用 pH 指示剂染料或染料组合，例如甲酚红和甲基橙，它们会根据测试化学品的存在而显示颜色变化。

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