"EPI-200-SIT Hudirritationstest" er designet til at estimere hudirritationspotentialet for rene teststoffer i forbindelse med identifikation og klassificering af hudirritationsfare i henhold til EU's klassifikationssystem. Da den er harmoniseret med Den Europæiske Union og det globalt harmoniserede system for klassificering og mærkning af kemikalier (GHS), tillader proceduren beskrevet i denne standard også fareidentifikation af irriterende stoffer i overensstemmelse med GHS.
Denne standard gør det muligt at skelne mellem irriterende stoffer i kategori 2 og ikke-irriterende stoffer. Den beskrevne testmetode skelner ikke mellem ikke-essentielle underkategorier af GHS, dvs. den skelner ikke mellem GHS kategori 2 og kategori 3 irriterende stoffer.
Metoden beskrevet i EPI-200-SIT standarden består af topisk eksponering af rent testkemikalie til en rekonstrueret model af human epidermis efterfulgt af cellelevedygtighedstestning. Cellelevedygtighed måles ved dehydrogenase-omdannelse af MTT, som er til stede i cellemitokondrier og omdannet til et blåt formazansalt, som måles kvantitativt efter fjernelse fra væv.
Den reducerede levedygtighed af væv udsat for kemikalier sammenlignet med negative kontroller (vandbehandlet) bruges til at vurdere potentialet for hudirritation. Nylige sammenlignende undersøgelser i humane epidermis-modeller, der anvender forskellige endepunkter til at forudsige hudirritation af topiske formuleringer, har vist, at MTT-endepunktet har klare fordele i forhold til selv mekanisk baserede endepunkter såsom frigivelse.
Den rekonstruerede humane epidermale model består af normale human-afledte epidermale keratinocytter dyrket til at danne en flerlags, meget differentieret model af human epidermis. Den består af regelmæssige basale, tornede og granulære lag og et flerlags stratum corneum indeholdende intercellulære lamellære lipidlag arrangeret i mønstre svarende til dem, der findes i levende væv. En generel beskrivelse af de generelle og funktionelle forhold, som rekonstruerede humane hudmodeller skal overholde, er inkluderet i de nye OECD-testretningslinjer (“431 In vitro skin corrosion: Human skin model” og “439 In vitro skin irritation: Reconstructed human epidermis test method ”).
Alle biologiske komponenter i epidermis og dyrkningsmediet er testet af producenten for viral, bakteriel, svampe- og mycoplasmakontamination. Resultaterne forventes at ligge inden for et interval, der er bestemt af den historiske database.
På grund af den lange post-inkubationstid skal testen udføres under aseptiske forhold i et mikrobiologisk sikkerhedsskab (laminar flow hood).
EPI-200-SIT Hudirritationstesten blev udviklet og valideret til in vitro hudirritationstest af kemikalier, herunder kosmetiske og farmaceutiske ingredienser. Testning udføres over en 60-dages periode bestående af præ-inkubation, 42-minutters eksponering, 4-timers post-inkubation og MTT-levedygtighedstestning. Efter vævshøst og præinkubation natten over (dag 0) eksponeres væv topisk for testkemikalier (dag 1), som kan være flydende, halvfast, fast eller voks. Der anvendes tre væv til hvert testkemikalie og en positiv kontrol (5 procent vandig natriumdodecylsulfatopløsning) og en negativ kontrol. Kemisk eksponering varer 60 minutter, hvoraf 35 minutter opbevares vævene i en inkubator ved 37 grader. Teststofferne fjernes derefter fra vævsoverfladen ved en omfattende vaskeprocedure. Vævsindlæg farves og overføres til frisk medium.
Efter en 24-timers inkubationsperiode (dag 2) skiftes mediet. Medier kan gemmes til yderligere analyse af cytokiner eller andre endepunkter af interesse. Efter medieskift inkuberes væv i yderligere 18 timer. Efter hele 42-timers inkubation (dag 3) overføres vævene til gul MTT-opløsning og inkuberes i 3 timer.
Det resulterende lilla-blå formazansalt, der hovedsageligt dannes af mitokondriel metabolisme, ekstraheres ved hjælp af isopropanol i 2 timer. Den optiske tæthed af det ekstraherede formazan bestemmes ved anvendelse af et spektrofotometer. Et kemikalie klassificeres som irriterende, hvis vævets levedygtighed falder til under 50 procent i forhold til væv behandlet med en negativ kontrol. Denne procedure kan bruges som en komplet erstatning for in vivo-testen for hudirritation af kanin til fareidentifikation og mærkning af kemikalier i overensstemmelse med EU-reglerne.
Blandt de talrige test-, måling-, analyse- og evalueringsundersøgelser, den leverer til virksomheder i forskellige sektorer, tilbyder vores organisation også testtjenester defineret i "EPI-200-SIT Hudirritationstest"-standarden med dets uddannede og eksperter og avanceret teknologisk udstyr .
Du kan bede os om at udfylde vores formular for at få en aftale, for at få mere detaljerede oplysninger eller for at anmode om en evaluering.
