Til biokompatibilitetstests, der kræver genotoksicitet, tilbyder vi flere testtyper baseret på din produkttype og datakrav, herunder Ames-mutagenicitet, kromosomafvigelse, muselymfom og musemikrokerne. Disse tests overholder OECD og ISO retningslinjer som et af tre in vitro testniveauer for genotoksicitet.
Ames-mutagenicitetstesten bruges til at bestemme den potentielle mutagene aktivitet af et ekstrakt fra et medicinsk udstyr / materiale. Bakteriel revers mutationstest (Ames-test) udføres som en del af genotoksicitetsbatteriet af test for at bestemme, om lækager fra et medicinsk udstyr / materiale er mutagene.
Kromosomafvigelsestesten bruges til at screene medicinsk udstyr/materialer for at bestemme, om de forårsager strukturelle kromosomale abnormiteter i ovarieceller fra kinesisk hamster (CHO). Testning udføres på apparater/materialer med permanent patientkontakt, længerevarende patientkontakt eller blodkontakt. Kromosomafvigelsestesten overholder OECD- og ISO-retningslinjerne som et af tre in vitro-testniveauer for genotoksicitet.
Mus-lymfom-test bruger ofte pattedyrcellekulturer til at identificere genmutationer, ændring i kromosomstruktur og antal og andre gentoksiciteter forårsaget af medicinsk udstyr, materiale eller ekstrakter. Disse tests bruges til at sikre, at apparater, der har langvarig kontakt med kroppen, ikke afslører genotoksicitet, der kan føre til genmutationer med kræftpotentiale.
Mouse Micronucleus assay bruges til at evaluere potentialet for et medicinsk udstyr til at inducere micronucleus-dannelse i umodne polykromatiske erythrocytter, der findes i knoglemarven hos voksne mus.
Ames mutagenicitet
Ames-mutagenicitetstesten anvender flere Salmonella typhimurium-stammer, der er valgt for deres modtagelighed for mutation på grund af:
Teststammerne kræver også histidin til vækst på grund af en mutation i genet, der styrer histidinproduktionen. Ames-test udføres ved at blande et ekstrakt af teststoffet med testorganismen i en blød agaropløsning, der kun indeholder en lille mængde histidin. Histidin tillader den inokulerede testorganisme at komme ind i et begrænset antal rum, men utilstrækkelig til at tillade normal vækst.
Men hvis stammen gennemgår en omvendt mutation (spontan eller induceret af teststoffet eller et positivt kontrolmateriale), behøver organismen ikke længere histidin at vokse og kan producere en synlig koloni eller reverser. Mutationer i testorganismen kun i histidingenegionen får testorganismen til at vende mutation til en organisme, som ikke længere kræver histidin.
Teststammer er udvalgt til at påvise forskellige mutagentyper. De anvendte teststammer var TA97A, TA98, TA100, TA102 og TA1535. Der udføres også en plettest, hvor ekstrakter af testproduktet farves på en plade, der indeholder testorganismen indeholdende en lille mængde histidin. Efterhånden som teststoffet diffunderer gennem agaren, bliver det mere fortyndet. Dette muliggør påvisning af mutagener, der forårsager en vis hæmning af teststammerne. Tests udføres med eller uden S-9 aktivering. S-9-aktiveringssystemet er designet til at simulere leverenzymsystemer fra pattedyr og bruges til at påvise stoffer, der undergår metabolisk aktivering fra ikke-mutagene former.
Kromosomafvigelsestesten udføres ved at udsætte CHO-cellerne for teststofekstraktet. Et blødningsmedium er inkluderet i analysen som negativ kontrol.
CHO-celler podes i 75 cm2 cellekulturkolber og inkuberes med celledyrkningsmedium + 10 % serum indtil 40-60 % konfluens.
CHO-celler udsættes for testproduktekstrakten i nærvær og fravær af et metabolisk aktiveringssystem. Det metaboliske aktiveringssystem er en blanding af S9-homogenat, isocitrat og NADP. Positive anvendte kontroller er cyclofosfamid med metabolisk aktivering og Mitomycin C uden metabolisk aktivering.
Før celleopsamling undersøges celler for cytotoksicitet. Hætteglas bedømmes i henhold til den karakteristiske grad af morfologisk cytotoksicitet på en relativ skala fra 10993 - 5 i henhold til AAMI / ANSI / ISO 87-0 og USP <4>. Gennemsnittet af resultaterne fra de tre hætteglas beregnes som gennemsnit for at give en endelig cytotoksicitetsscore.
Ved afslutningen af eksponerings- og ekspressionsperioderne standses cellerne ved metafase med coltazid. Celler fjernes derefter fra hætteglas og behandles med en hypotonisk opløsning og fikseringsmiddel. Celler deponeres på objektglas. Kromosomer er farvet med Giemsa-farve og belagt med Permount®. Cellerne undersøges derefter mikroskopisk for kromosomale abnormiteter.
Biokompatibilitet Genotoksicitetstestning anvender muselymfomceller til at bestemme, om et testmateriale er i stand til at inducere punktmutationer eller klastogene (kromosomale brud) i en dyrket pattedyrscellelinje. I dette tilfælde er målgenet, thymidinkinase (TK), et distribuerbart gen. Tab af TK-aktivitet indikerer, at en mutation er opstået. Fordi TK er involveret i en redningsvej for thymidin afledt af DNA-metabolisme, kan celler syntetisere thymidin de novo. Derfor gør tab af TK ikke cellen levedygtig.
Mutanter kan vælges, og mutante frekvenser kan afledes ved at inkorporere thymidinanalogen (trifluorthymidin eller TFT) i dyrkningsmediet i cellerne efter eksponering for testmaterialet. Regelmæssige celler med intakt TK inkluderer analog og skabelon; Mutantceller (mangler TK-aktivitet) overlever, danner kolonier og kvantificerer.
I Mouse Micronucleus-testen fjernes et medicinsk udstyr i et polært og ikke-polært miljø. Testkontrolekstrakt positive kontroller og negative kontroller administreres ved 20 ml / kg i både han- og hunmus. Knoglemarv høstes derefter 24 og 48 timer efter dosering og undersøges for tilstedeværelsen af mikronukleære polychromatiske erytrocytter (PCE'er). Tilstedeværelsen af PCE'er er en indikation af, at det mutagene stof lækker fra enheden.
EUROLAB, med sit yderst eksperthold og internationalt akkrediterede laboratorier, Genotoksicitetstest Den udfører alle test-, analyse-, måle-, evaluerings- og rapportgenereringstjenester fuldstændigt og pålideligt.
Du kan bede os om at udfylde vores formular for at få en aftale, for at få mere detaljerede oplysninger eller for at anmode om en evaluering.
