"EPI-200-SIT تست تحریک پوست" برای تخمین پتانسیل تحریک پوست مواد آزمایشی خالص در زمینه شناسایی و طبقه بندی خطر تحریک پوست بر اساس سیستم طبقه بندی اتحادیه اروپا طراحی شده است. از آنجایی که با اتحادیه اروپا و سیستم جهانی هماهنگ طبقه‌بندی و برچسب‌گذاری مواد شیمیایی (GHS) هماهنگ است، رویه توصیف‌شده در این استاندارد همچنین امکان شناسایی خطرات محرک‌ها را مطابق با GHS فراهم می‌کند.
این استاندارد اجازه می دهد تا بین محرک های دسته 2 و غیر محرک تمایز قائل شود. روش آزمایشی که شرح داده شد، بین زیرمجموعه‌های غیرضروری GHS تمایز قائل نمی‌شود، یعنی بین محرک‌های دسته ۲ و دسته ۳ GHS تمایز قائل نمی‌شود.
روش تشریح شده در استاندارد EPI-200-SIT شامل قرار گرفتن موضعی ماده شیمیایی آزمایشی خالص با مدل بازسازی شده اپیدرم انسانی و به دنبال آن تست زنده ماندن سلولی است. بقای سلول با تبدیل دهیدروژناز MTT اندازه گیری می شود که در میتوکندری سلولی وجود دارد و به نمک آبی فرمازان تبدیل می شود که پس از حذف از بافت ها به صورت کمی اندازه گیری می شود.
کاهش زنده ماندن بافت های در معرض مواد شیمیایی در مقایسه با کنترل های منفی (درمان با آب) برای تخمین پتانسیل تحریک پوست استفاده می شود. مطالعات مقایسه‌ای اخیر در مدل‌های اپیدرم انسانی با استفاده از نقاط پایانی مختلف برای پیش‌بینی تحریک پوست فرمول‌های موضعی نشان داده‌اند که نقطه پایانی MTT دارای مزایای مشخصی نسبت به نقاط پایانی مبتنی بر مکانیکی مانند رهاسازی است.
مدل اپیدرم انسانی بازسازی‌شده شامل کراتینوسیت‌های اپیدرمی طبیعی مشتق شده از انسان است که برای تشکیل یک مدل چندلایه و بسیار متمایز از اپیدرم انسانی کشت داده شده‌اند. از لایه‌های پایه، خاردار و دانه‌ای منظم و یک لایه شاخی چند لایه حاوی لایه‌های لیپیدی لایه‌ای بین سلولی تشکیل شده است که در الگوهایی شبیه به آنچه در بافت زنده وجود دارد، مرتب شده‌اند. شرح کلی شرایط عمومی و عملکردی که مدل‌های پوست بازسازی‌شده انسان باید با آن‌ها مطابقت داشته باشند، در دستورالعمل‌های آزمایشی جدید OECD گنجانده شده است ("خوردگی پوست در شرایط آزمایشگاهی 431: مدل پوست انسان" و "439 تحریک پوستی در شرایط آزمایشگاهی: روش تست اپیدرم بازسازی‌شده انسانی". ”).
تمام اجزای بیولوژیکی اپیدرم و محیط کشت توسط سازنده برای آلودگی ویروسی، باکتریایی، قارچی و مایکوپلاسما آزمایش شده است. انتظار می رود که نتایج در محدوده تعیین شده توسط پایگاه داده تاریخی باشد.
با توجه به طولانی بودن زمان پس از انکوباسیون، آزمایش باید در شرایط آسپتیک در کابینت ایمنی میکروبیولوژیکی (هود با جریان آرام) انجام شود.
تست تحریک پوست EPI-200-SIT برای آزمایش تحریک پوستی در شرایط آزمایشگاهی مواد شیمیایی، از جمله مواد آرایشی و دارویی و ترکیبات دارویی، توسعه یافته و تایید شده است. آزمایش در یک دوره 60 روزه شامل قبل از جوجه کشی، قرار گرفتن در معرض 42 دقیقه، 4 ساعت پس از جوجه کشی و تست زنده ماندن MTT انجام می شود. پس از برداشت بافت و انکوباسیون یک شبه (روز 0)، بافت ها به صورت موضعی در معرض مواد شیمیایی آزمایشی قرار می گیرند (روز 1)، که می تواند مایع، نیمه جامد، جامد یا موم باشد. سه بافت برای هر ماده شیمیایی آزمایشی و یک کنترل مثبت (محلول آبی سدیم دودسیل سولفات 5 درصد) و یک کنترل منفی استفاده می شود. قرار گرفتن در معرض مواد شیمیایی 60 دقیقه طول می کشد که 35 دقیقه از آن بافت ها در انکوباتور با دمای 37 درجه نگهداری می شوند. سپس مواد مورد آزمایش با یک روش شستشوی گسترده از سطح بافت جدا می شوند. درج های بافتی رنگ آمیزی شده و به محیط تازه منتقل می شوند.
پس از یک دوره جوجه کشی 24 ساعته (روز 2)، محیط کشت عوض می شود. رسانه ها را می توان برای تجزیه و تحلیل بیشتر سیتوکین ها یا سایر نقاط پایانی مورد علاقه ذخیره کرد. پس از تغییر محیط، بافت ها به مدت 18 ساعت دیگر انکوبه می شوند. پس از کل انکوباسیون 42 ساعته (روز 3)، بافت ها به محلول MTT زرد منتقل شده و به مدت 3 ساعت انکوبه می شوند.
نمک فورمازان ارغوانی-آبی حاصل که عمدتاً توسط متابولیسم میتوکندری ایجاد می شود، با استفاده از ایزوپروپانول به مدت 2 ساعت استخراج می شود. چگالی نوری فورمازان استخراج شده با استفاده از اسپکتروفتومتر تعیین می شود. یک ماده شیمیایی به عنوان محرک طبقه بندی می شود اگر زنده ماندن بافت به کمتر از 50 درصد نسبت به بافت هایی که با کنترل منفی درمان می شوند، کاهش یابد. این روش می تواند به عنوان جایگزینی کامل برای آزمایش تحریک پوست خرگوش در داخل بدن برای شناسایی خطر و برچسب زدن مواد شیمیایی مطابق با مقررات اتحادیه اروپا استفاده شود.
در میان آزمایش‌ها، اندازه‌گیری‌ها، تحلیل‌ها و ارزیابی‌های متعددی که برای کسب‌وکارها در بخش‌های مختلف ارائه می‌کند، سازمان ما همچنین خدمات تست تعریف شده در استاندارد "EPI-200-SIT Skin Iritation Test" را با کارکنان آموزش دیده و متخصص و تجهیزات تکنولوژیکی پیشرفته ارائه می‌کند. .
برای دریافت قرار ملاقات، برای دریافت اطلاعات دقیق تر و یا درخواست ارزیابی، می توانید از ما بخواهید فرم ما را پر کند و به شما برسد.
