برای آزمایش های سازگاری زیستی که به سمیت ژنی احتیاج دارند ، بسته به نوع محصول و نیاز به داده های شما ، انواع مختلفی از آزمون شامل جهش زایی Ames ، انحراف کروموزومی ، لنفوس ماوس و میکرو هسته را ارائه می دهیم. این آزمایشات با دستورالعمل های OECD و ISO به عنوان یکی از سه سطح آزمایش آزمایشگاهی برای سمیت ژنی مطابقت دارد.
از آزمون جهش زایی Ames برای تعیین فعالیت جهش زایی بالقوه عصاره یک وسیله / ماده پزشکی استفاده می شود. آزمایش جهش معکوس باکتریایی (آزمایش Ames) به عنوان بخشی از باتری آزمایش سمیت ژنی برای تعیین جهش زا بودن نشت از یک وسیله پزشکی / مواد انجام می شود.
از آزمون انحراف کروموزومی برای اسکن وسایل / تجهیزات پزشکی استفاده می شود تا مشخص شود که آیا باعث ایجاد ناهنجاری های کروموزومی ساختاری در سلول های تخمدان همستر چینی (CHO) شده اند. این آزمایش بر روی دستگاه ها / موادی با تماس دائمی بیمار ، تماس طولانی مدت بیمار یا تماس خون انجام می شود. آزمون انحراف کروموزومی مطابق با دستورالعمل های OECD و ISO به عنوان یکی از سه سطح آزمایش آزمایشگاهی برای سمیت ژنی است.
آزمایش لنفوم ماوس اغلب از فرهنگ سلول پستانداران برای شناسایی جهش های ژنی ، تغییر در ساختار و تعداد کروموزوم و سایر سمیت های ژنی ناشی از دستگاه های پزشکی ، مواد یا عصاره ها استفاده می کند. این آزمایشات برای اطمینان از اینکه دستگاههایی که تماس طولانی مدت با بدن دارند سمیت ژنی را که منجر به جهش ژنی با پتانسیل سرطان می شود ، نشان نمی دهند.
روش Mouse Micronucleus برای ارزیابی پتانسیل یک وسیله پزشکی برای القای تشکیل میکرو هسته در گلبول های قرمز چند رنگ نابالغ موجود در مغز استخوان موش های بزرگسال استفاده می شود.
جهش زایی امز
در آزمون جهش زایی Ames از چندین سویه سالمونلا تیفی موریوم برای حساسیت به جهش به دلیل موارد زیر استفاده شده است:
سویه های آزمایشگاهی نیز به دلیل جهش در ژنی که تولید هیستیدین را کنترل می کند ، برای رشد به هیستیدین نیاز دارند. آزمایش های ایمز با مخلوط کردن عصاره ماده آزمایشگاهی با ارگانیسم آزمایش در محلول نرم آگار حاوی فقط مقدار کمی هیستیدین انجام می شود. هیستیدین به ارگانیسم آزمایش تلقیح شده اجازه ورود به تعداد محدودی از محفظه ها را می دهد ، اما برای اجازه رشد طبیعی کافی نیست.
با این حال ، اگر سویه دچار جهش معکوس (خود به خودی یا ناشی از ماده آزمایش کننده یا یک ماده کنترل کننده مثبت) شود ، ارگانیسم دیگر نیازی به رشد هیستیدین ندارد و می تواند یک کلنی یا معکوس قابل مشاهده تولید کند. جهش ها در ارگانیسم آزمایش فقط در منطقه ژن هیستیدین باعث می شود که ارگانیسم آزمایش جهش معکوس موجودی را معکوس کند ، که دیگر نیازی به هیستیدین ندارد.
سویه های آزمایش برای تشخیص انواع مختلف جهش زایی انتخاب می شوند. سویه های آزمایشی مورد استفاده TA97A ، TA98 ، TA100 ، TA102 و TA1535 هستند. همچنین یک آزمایش لکه ای انجام می شود که در آن عصاره های محصول آزمایش روی صفحه ای حاوی مقدار کمی ارگانیسم آزمایش حاوی هیستیدین رنگ آمیزی می شوند. همانطور که ماده آزمایش از طریق آگار پخش می شود ، رقیق تر می شود. این اجازه می دهد تا جهش هایی را که باعث مهار برخی از سویه های تستر می شوند ، تشخیص دهد. آزمایش ها با فعال سازی S-9 یا بدون فعال شدن S-9 انجام می شود. سیستم فعال سازی S-9 برای شبیه سازی سیستم های آنزیمی کبدی پستانداران طراحی شده است و برای تشخیص موادی که از فرم های غیر جهش زا تحت فعال سازی متابولیکی قرار می گیرند استفاده می شود.
آزمایش انحراف کروموزومی با قرار گرفتن سلولهای CHO در معرض عصاره ماده آزمایش انجام می شود. یک محیط خونریزی به عنوان شاهد منفی در این روش گنجانده شده است.
سلول های CHO در گلدان های کشت سلولی 75 سانتی متر مربع کاشته می شوند و با محیط کشت سلول + 2٪ سرم تا محل تلاقی 10-40٪ انکوبه می شوند.
سلول های CHO در حضور و عدم وجود یک سیستم فعال سازی متابولیکی در معرض عصاره محصول آزمایش قرار می گیرند. سیستم فعال سازی متابولیکی مخلوطی از هموژن S9 ، ایزوسیترات و NADP است. کنترل های مثبت مورد استفاده سیکلوفسفامید با فعال سازی متابولیکی و میتومایسین C بدون فعال سازی متابولیکی است.
قبل از برداشت سلول ، سلول ها از نظر سمیت سلولی مورد بررسی قرار می گیرند. ویال ها با توجه به میزان سمیت سلولی مورفولوژیکی قابل تشخیص در مقیاس نسبی 10993 - 5 با توجه به AAMI / ANSI / ISO 87-0 و USP <4 نمره گذاری می شوند. میانگین نتایج حاصل از سه بطری به طور متوسط برای دادن نمره سمیت سلولی نهایی است.
در پایان دوره های مواجهه و بیان ، سلول ها با کلتازید در متافاز دستگیر می شوند. سپس سلول ها از ویال ها برداشته می شوند و با محلول هیپوتونیک و فیکساتور درمان می شوند. سلولها بر روی اسلایدهای میکروسکوپ رسوب می کنند. کروموزوم ها با رنگ Giemsa رنگ آمیزی شده و با Permount® پوشانده می شوند. سپس سلول ها از نظر میکروسکوپی از نظر ناهنجاری های کروموزومی بررسی می شوند.
سازگاری زیستی در آزمایش سمیت ژنی ، سلولهای لنفوم موش برای تعیین اینکه آیا یک ماده آزمایش قادر به ایجاد جهش های نقطه ای یا کلاستوژنیک (شکستگی کروموزومی) در یک رده سلول سلول پستانداران است ، استفاده می شود. در این حالت ، ژن هدف ، تیمیدین کیناز (TK) ، یک ژن قابل توزیع است. از دست دادن فعالیت TK نشان می دهد که جهش رخ داده است. از آنجا که TK در یک مسیر نجات حاصل از متابولیسم DNA نقش دارد ، سلول ها می توانند تیمیدین نو را سنتز کنند. بنابراین ، از دست دادن TK سلول را بی روح نمی کند.
می توان با قرار دادن آنالوگ تیمیدین (تری فلوئوروتیمیدین یا TFT) در محیط کشت سلولها ، جهش ها را انتخاب و فرکانسهای جهش یافته را بدست آورد. سلولهای منظم با TK دست نخورده شامل آنالوگ و الگو هستند. سلولهای جهش یافته (فاقد فعالیت TK) زنده می مانند ، کلنی تشکیل می دهند و کمی می شوند.
در آزمایش موش میکرو هسته ، یک دستگاه پزشکی در یک محیط قطبی و غیر قطبی برداشته می شود. عصاره محصول آزمایشی شاهدهای مثبت و کنترلهای منفی در موشهای ماده و ماده با میزان 20 میلی لیتر بر کیلوگرم تجویز می شوند. مغز استخوان سپس 24 و 48 ساعت پس از دوز برداشت و از نظر وجود گلبول های قرمز چند هسته ای (PCE) بررسی می شود. وجود PCE ها نشانه نشت مواد جهش زا از دستگاه است.
EUROLABبا تیم بسیار متخصص و آزمایشگاه های معتبر بین المللی، آزمون ژنتیک سمیت این کلیه خدمات آزمون ، تجزیه و تحلیل ، اندازه گیری ، ارزیابی و گزارش تولید نسل را بطور کامل و قابل اطمینان انجام می دهد.
برای دریافت قرار ملاقات، برای دریافت اطلاعات دقیق تر و یا درخواست ارزیابی، می توانید از ما بخواهید فرم ما را پر کند و به شما برسد.
