W przypadku testów zgodności biologicznej, które wymagają genotoksyczności, oferujemy wiele typów testów w zależności od typu produktu i wymagań dotyczących danych, w tym mutagenność Amesa, aberrację chromosomową, mysiego chłoniaka i mysiego mikrojądra. Testy te są zgodne z wytycznymi OECD i ISO jako jeden z trzech poziomów badań genotoksyczności in vitro.
Test mutagenności Amesa służy do określenia potencjalnej mutagennej aktywności ekstraktu z wyrobu / materiału medycznego. Bacterial Reverse Mutation Test (test Amesa) jest wykonywany jako część zestawu testów genotoksyczności w celu określenia, czy wycieki z urządzenia medycznego / materiału są mutagenne.
Test aberracji chromosomowych służy do badania urządzeń/materiałów medycznych w celu określenia, czy powodują one strukturalne nieprawidłowości chromosomalne w komórkach jajnika chomika chińskiego (CHO). Badanie przeprowadza się na urządzeniach/materiałach mających stały kontakt z pacjentem, długotrwały kontakt z pacjentem lub kontakt z krwią. Test aberracji chromosomowych jest zgodny z wytycznymi OECD i ISO jako jeden z trzech poziomów badań genotoksyczności in vitro.
Testy na chłoniaka myszy często wykorzystują hodowle komórek ssaków do identyfikacji mutacji genów, zmian w strukturze i liczbie chromosomów oraz innych toksyczności genów spowodowanych przez urządzenia medyczne, materiał lub ekstrakty. Testy te służą do zapewnienia, że urządzenia, które mają długotrwały kontakt z ciałem, nie ujawniają genotoksyczności, która mogłaby prowadzić do mutacji genów o potencjale rakowym.
Test mikrojądrowy myszy służy do oceny potencjału urządzenia medycznego do indukowania tworzenia się mikrojąder w niedojrzałych erytrocytach polichromatycznych występujących w szpiku kostnym dorosłych myszy.
Mutagenność Amesa
W teście mutagenności Amesa wykorzystuje się kilka szczepów Salmonella typhimurium wybranych ze względu na ich podatność na mutacje z powodu:
Szczepy testowe wymagają również histydyny do wzrostu z powodu mutacji w genie kontrolującym produkcję histydyny. Testy Amesa przeprowadza się przez zmieszanie ekstraktu substancji badanej z organizmem testowym w roztworze miękkiego agaru zawierającego tylko niewielką ilość histydyny. Histydyna pozwala inokulowanemu organizmowi testowemu wejść do ograniczonej liczby kompartmentów, ale niewystarczającej, aby umożliwić normalny wzrost.
Jeśli jednak szczep przechodzi mutację odwrotną (spontaniczną lub indukowaną przez substancję badaną lub materiał kontroli dodatniej), organizm nie potrzebuje już histydyny do wzrostu i może wytworzyć widoczną kolonię lub odwrócenie. Mutacje w organizmie testowym tylko w regionie genu histydyny powodują, że organizm testowy odwraca mutację do organizmu, który nie wymaga już histydyny.
Szczepy testowe są wybierane w celu wykrycia różnych typów mutagenów. Stosowanymi szczepami testowymi były TA97A, TA98, TA100, TA102 i TA1535. Wykonuje się również test punktowy, w którym ekstrakty badanego produktu barwi się na płytce zawierającej badany organizm zawierający niewielką ilość histydyny. Gdy substancja badana dyfunduje przez agar, staje się bardziej rozcieńczona. Pozwala to na wykrycie mutagenów, które powodują pewne zahamowanie szczepów testowych. Testy przeprowadza się z aktywacją S-9 lub bez niej. System aktywacji S-9 jest przeznaczony do symulacji układów enzymów wątrobowych ssaków i służy do wykrywania substancji, które ulegają aktywacji metabolicznej z form niemutagennych.
Test aberracji chromosomowej przeprowadza się wystawiając komórki CHO na działanie ekstraktu substancji testowej. Pożywka do wykrwawiania jest zawarta w teście jako kontrola negatywna.
Komórki CHO wysiewa się do 75 cm2 kolb do hodowli komórek i inkubuje z pożywką do hodowli komórkowej + 10% surowicy do 40-60% konfluencji.
Komórki CHO są wystawiane na działanie ekstraktu produktu testowego w obecności i przy braku systemu aktywacji metabolicznej. System aktywacji metabolicznej to mieszanina homogenatu S9, izocytrynianu i NADP. Stosowane kontrole pozytywne to cyklofosfamid z aktywacją metaboliczną i mitomycyna C bez aktywacji metabolicznej.
Przed pobraniem komórek komórki są badane pod kątem cytotoksyczności. Fiolki ocenia się zgodnie z rozróżnialnym stopniem morfologicznej cytotoksyczności we względnej skali 10993-5 zgodnie z AAMI/ANSI/ISO 87-0 i USP <4>. Średnia wyników z trzech fiolek jest uśredniana w celu uzyskania ostatecznej oceny cytotoksyczności.
Pod koniec okresu ekspozycji i ekspresji komórki są zatrzymywane w metafazie za pomocą koltazydu. Następnie komórki usuwa się z fiolek i traktuje roztworem hipotonicznym i utrwalaczem. Komórki osadza się na szkiełkach mikroskopowych. Chromosomy są barwione barwnikiem Giemsa i powlekane Permount®. Komórki są następnie badane mikroskopowo pod kątem nieprawidłowości chromosomalnych.
Biozgodność Badanie genotoksyczności wykorzystuje komórki chłoniaka myszy w celu określenia, czy badany materiał jest zdolny do indukowania mutacji punktowych lub klastogennych (pęknięcie chromosomu) w hodowanej linii komórkowej ssaków. W tym przypadku gen docelowy, kinaza tymidynowa (TK), jest genem zdolnym do dystrybucji. Utrata aktywności TK wskazuje, że wystąpiła mutacja. Ponieważ TK bierze udział w ścieżce ratunkowej tymidyny pochodzącej z metabolizmu DNA, komórki mogą syntetyzować tymidynę de novo. Dlatego utrata TK nie czyni komórki żywotną.
Mutanty można wyselekcjonować, a częstości występowania mutacji można wyprowadzić przez wprowadzenie analogu tymidyny (trifluorotymidyny lub TFT) do pożywki hodowlanej komórek po ekspozycji na badany materiał. Normalne komórki z nienaruszoną TK obejmują analog i matrycę; Zmutowane komórki (pozbawione aktywności TK) przeżywają, tworzą kolonie i określają ilościowo.
W teście mikrojądrowym myszy urządzenie medyczne jest usuwane w środowisku polarnym i niepolarnym. Kontrole pozytywne i negatywne ekstraktu badanego produktu podaje się w ilości 20 ml / kg zarówno samcom, jak i samicom myszy. Następnie szpik kostny pobiera się 24 i 48 godzin po podaniu i bada na obecność mikrojądrowych erytrocytów polichromatycznych (PCE). Obecność PCE wskazuje na wyciek mutagennej substancji z urządzenia.
EUROLAB, dzięki wysoko wykwalifikowanemu zespołowi i laboratoriom posiadającym międzynarodową akredytację, Test genotoksyczności Wszystkie usługi związane z testami, analizami, pomiarami, ocenami i generowaniem raportów są wykonywane całkowicie i niezawodnie.
Możesz poprosić nas o wypełnienie formularza, aby umówić się na spotkanie, uzyskać bardziej szczegółowe informacje lub poprosić o ocenę.
