«Тест на раздражение кожи EPI-200-SIT» предназначен для оценки потенциала раздражения кожи чистых тестируемых веществ в контексте идентификации и классификации опасности раздражения кожи в соответствии с системой классификации Европейского Союза. Поскольку он гармонизирован с Европейским Союзом и Согласованной на глобальном уровне системой классификации и маркировки химических веществ (СГС), процедура, описанная в этом стандарте, также позволяет идентифицировать опасность раздражителей в соответствии с СГС.
Этот стандарт допускает различие между раздражающими и нераздражающими веществами категории 2. Описанный метод испытаний не делает различий между несущественными подкатегориями СГС, т. е. не различает раздражители категории 2 и категории 3 СГС.
Метод, описанный в стандарте EPI-200-SIT, заключается в местном воздействии чистого тестируемого химического вещества на реконструированную модель эпидермиса человека с последующим тестированием жизнеспособности клеток. Жизнеспособность клеток измеряют путем дегидрогеназной конверсии МТТ, который присутствует в клеточных митохондриях и превращается в синюю соль формазана, которую количественно измеряют после удаления из тканей.
Снижение жизнеспособности тканей, подвергшихся воздействию химических веществ, по сравнению с отрицательным контролем (обработанным водой), используется для оценки возможности раздражения кожи. Недавние сравнительные исследования на моделях эпидермиса человека с использованием различных конечных точек для прогнозирования раздражения кожи составами для местного применения показали, что конечная точка МТТ имеет явные преимущества по сравнению даже с механическими конечными точками, такими как высвобождение.
Реконструированная модель эпидермиса человека состоит из нормальных эпидермальных кератиноцитов человеческого происхождения, культивированных для формирования многослойной высокодифференцированной модели эпидермиса человека. Он состоит из регулярных базальных, шиповатых и зернистых слоев и многослойного рогового слоя, содержащего межклеточные ламеллярные липидные слои, расположенные по закономерностям, аналогичным тем, которые встречаются в живой ткани. Общее описание общих и функциональных условий, которым должны соответствовать реконструированные модели кожи человека, включено в новые руководящие принципы испытаний ОЭСР («431 Разъедание кожи in vitro: модель кожи человека» и «439 Раздражение кожи in vitro: метод испытания реконструированного эпидермиса человека). »).
Все биологические компоненты эпидермиса и питательной среды проверяются производителем на наличие вирусной, бактериальной, грибковой и микоплазменной контаминации. Ожидается, что результаты будут находиться в пределах диапазона, определенного исторической базой данных.
Из-за длительного времени после инкубации тест необходимо проводить в асептических условиях в боксе микробиологической безопасности (ламинарный шкаф).
Тест на раздражение кожи EPI-200-SIT был разработан и утвержден для тестирования раздражения кожи in vitro химическими веществами, включая косметические и фармацевтические ингредиенты. Тестирование проводится в течение 60-дневного периода, состоящего из предварительной инкубации, 42-минутной экспозиции, 4-часовой постинкубационной и тестирования жизнеспособности МТТ. После сбора ткани и предварительной инкубации в течение ночи (день 0) ткани подвергаются местному воздействию тестируемых химикатов (день 1), которые могут быть жидкими, полутвердыми, твердыми или восковыми. Для каждого тестируемого химического вещества используются три ткани, один положительный контроль (5-процентный водный раствор додецилсульфата натрия) и один отрицательный контроль. Химическое воздействие длится 60 минут, из них 35 минут ткани выдерживают в инкубаторе при температуре 37 градусов. Затем тестируемые вещества удаляются с поверхности ткани путем обширной процедуры промывания. Тканевые вкладыши окрашивают и переносят на свежую среду.
После 24-часового инкубационного периода (2-й день) среду меняют. Среду можно сохранить для дальнейшего анализа цитокинов или других интересующих конечных точек. После смены среды ткани инкубируют еще 18 часов. После всей 42-часовой инкубации (3-й день) ткани переносят в желтый раствор МТТ и инкубируют в течение 3 часов.
Полученную пурпурно-синюю соль формазана, образующуюся преимущественно в результате митохондриального метаболизма, экстрагируют изопропанолом в течение 2 ч. Оптическую плотность экстрагированного формазана определяют с помощью спектрофотометра. Химическое вещество классифицируется как раздражитель, если жизнеспособность ткани падает ниже 50 процентов по сравнению с тканями, обработанными отрицательным контролем. Эту процедуру можно использовать в качестве полной замены теста на раздражение кожи кролика in vivo для идентификации опасности и маркировки химических веществ в соответствии с правилами Европейского Союза.
Среди многочисленных исследований по тестированию, измерениям, анализу и оценке, которые она предоставляет предприятиям в различных секторах, наша организация также предоставляет услуги по тестированию, определенные в стандарте «EPI-200-SIT Тест на раздражение кожи», со своим обученным и опытным персоналом и передовым технологическим оборудованием. .
Вы можете попросить нас заполнить нашу форму, чтобы записаться на прием, получить более подробную информацию или запросить оценку.
