มาตรฐาน “OECD TG 439 การทดสอบการระคายเคืองผิวหนังในหลอดทดลอง: วิธีทดสอบด้วยผิวหนังชั้นนอกของมนุษย์ที่สร้างขึ้นใหม่” ซึ่งเผยแพร่ภายใต้แนวทางปฏิบัติของ OECD เกี่ยวกับการดำเนินธุรกิจอย่างมีความรับผิดชอบสำหรับบริษัทข้ามชาติ (แนวทางปฏิบัติของ OECD) อธิบายถึงวิธีการทดสอบในหลอดทดลองที่ใช้สำหรับการระบุอันตรายของสารเคมีที่ก่อให้เกิดการระคายเคือง (สารและส่วนผสม) ตามระบบการจำแนกและการติดฉลากที่สอดคล้องกันทั่วโลกของสหประชาชาติ (GHS) หมวดที่ 2
วิธีการนี้ใช้พื้นฐานจากหนังกำพร้าของมนุษย์ (RhE) ที่สร้างขึ้นใหม่ ซึ่งในการออกแบบโดยรวมจะเลียนแบบคุณสมบัติทางชีวเคมีและสรีรวิทยาของส่วนบนของผิวหนังมนุษย์อย่างใกล้ชิด ความมีชีวิตของเซลล์วัดได้จากการเปลี่ยนเอนไซม์ของสีย้อมสำคัญ MTT ไปเป็นเกลือฟอร์มาซานสีน้ำเงิน ซึ่งวัดในเชิงปริมาณหลังจากการสกัดออกจากเนื้อเยื่อ สารทดสอบการระคายเคืองถูกกำหนดโดยความสามารถในการลดการมีชีวิตของเซลล์ให้ต่ำกว่าระดับเกณฑ์ที่กำหนด (เท่ากับ 2 เปอร์เซ็นต์หรือน้อยกว่าสำหรับประเภท 50) สารเคมีที่มีสีสามารถทดสอบได้โดยใช้ขั้นตอน HPLC (โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง)
มีวิธีทดสอบที่ผ่านการตรวจสอบแล้วสามวิธีซึ่งเป็นไปตามมาตรฐาน OECD TG 439 ขึ้นอยู่กับกรอบกฎระเบียบและระบบการจำแนกประเภทที่ใช้ ขั้นตอนนี้สามารถใช้เพื่อระบุการระคายเคืองผิวหนังของสารทดสอบ โดยเป็นการทดสอบตัวแทนแบบสแตนด์อโลนสำหรับการทดสอบการระคายเคืองผิวหนัง ในสิ่งมีชีวิต หรือเป็นการทดสอบตัวแทนบางส่วนภายในกลยุทธ์การทดสอบแบบลำดับขั้น
โดยหลักการแล้ว สารเคมีทดสอบจะถูกนำไปใช้เฉพาะที่กับแบบจำลอง RhE สามมิติ (หนังกำพร้ามนุษย์ที่สร้างขึ้นใหม่) ซึ่งประกอบด้วยเซลล์เคราติโนไซต์จากผิวหนังชั้นนอกของมนุษย์ที่ได้รับการเพาะเลี้ยงและยังไม่เปลี่ยนรูป เพื่อสร้างแบบจำลองหลายชั้นและมีความแตกต่างอย่างมากของหนังกำพร้าของมนุษย์ ประกอบด้วยชั้นฐาน หนาม และชั้นเม็ดปกติ และชั้น corneum หลายชั้นที่มีชั้นไขมัน lamellar ระหว่างเซลล์ ซึ่งเป็นชั้นไขมันหลักที่คล้ายกับชั้นไขมันที่พบในสิ่งมีชีวิต
การระคายเคืองต่อผิวหนังที่เกิดจากสารเคมีมักเกิดจากการเกิดผื่นแดงและอาการบวมน้ำ และเป็นผลจากเหตุการณ์ที่เกิดขึ้นเมื่อสารเคมีผ่านชั้น corneum และทำลายเซลล์เคราติโนไซต์และเซลล์ผิวหนังอื่นๆ ชั้นล่าง
เซลล์ที่เสียหายสามารถปล่อยตัวกลางการอักเสบหรือทำให้เกิดน้ำตกอักเสบซึ่งยังออกฤทธิ์ต่อเซลล์ในชั้นหนังแท้ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเซลล์สโตรมัลและเซลล์บุผนังหลอดเลือดของหลอดเลือด การขยายตัวและการซึมผ่านของเซลล์บุผนังหลอดเลือดที่เพิ่มขึ้นทำให้เกิดอาการแดงและอาการบวมน้ำที่สังเกตได้ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง วิธีการทดสอบที่ใช้ RhE จะวัดเหตุการณ์เริ่มต้นในลำดับชั้น เช่น ความเสียหายของเซลล์หรือเนื้อเยื่อ โดยใช้ความมีชีวิตของเซลล์เป็นตัวอ่านค่าเมื่อไม่มีการขยายตัวของหลอดเลือดในระบบการทดสอบ ในหลอดทดลอง
ในแบบจำลอง RhE ความมีชีวิตของเซลล์วัดโดยการเปลี่ยนเอนไซม์ของสีย้อมสำคัญ MTT ไปเป็นเกลือฟอร์มาซานสีน้ำเงิน ซึ่งวัดในเชิงปริมาณหลังจากนำออกจากเนื้อเยื่อ (MTT ใช้เพื่อประเมินความมีชีวิตของเซลล์เป็นฟังก์ชันของศักยภาพรีดอกซ์) สารเคมีระคายเคืองถูกกำหนดโดยความสามารถในการลดการมีชีวิตของเซลล์ให้ต่ำกว่าระดับเกณฑ์ที่กำหนด (เช่น อย่างน้อย 2 เปอร์เซ็นต์สำหรับหมวด 50) ขึ้นอยู่กับกรอบการกำกับดูแลและการบังคับใช้วิธีทดสอบนี้ สารเคมีทดสอบที่ทำให้เซลล์มีชีวิตได้สูงกว่าระดับเกณฑ์ที่กำหนดอาจถือว่าไม่ระคายเคือง (กล่าวคือ ไม่มีหมวดหมู่ใดอย่างน้อย 50 เปอร์เซ็นต์)
ควรใช้ keratinocytes ของมนุษย์ที่ไม่ได้รับการเปลี่ยนแปลงเพื่อสร้างเยื่อบุผิวขึ้นใหม่ ภายใต้ชั้น corneum ที่ทำหน้าที่ได้นั้น จะต้องมีเซลล์เยื่อบุที่มีชีวิตหลายชั้น (ชั้นฐาน, ชั้นสตราตัมสปิโนซัม, ชั้นสตราตัมแกรนูโลซัม) ชั้น corneum จะต้องมีหลายชั้น โดยมีโปรไฟล์ของไขมันที่จำเป็นเพื่อสร้างเกราะกั้นการทำงานที่มีความเหนียวในการต้านทานการแทรกซึมอย่างรวดเร็วของสารเคมีอ้างอิงที่เป็นพิษต่อเซลล์ เช่น โซเดียมโดดีเอซิลซัลเฟต
จะต้องแสดงให้เห็นการทำงานของอุปสรรคและสามารถประเมินได้โดยการกำหนดความเข้มข้นที่สารเคมีอ้างอิงลดความมีชีวิตของเนื้อเยื่อลง 50 เปอร์เซ็นต์หลังจากเวลาสัมผัสคงที่ หรือโดยกำหนดเวลาในการสัมผัสที่จำเป็นในการลดความมีชีวิตของเซลล์ลง 50 เปอร์เซ็นต์ เมื่อใช้สารเคมีอ้างอิง ที่ความเข้มข้นที่กำหนดและคงที่ คุณสมบัติการกักเก็บของแบบจำลอง RhE (หนังกำพร้าของมนุษย์ที่สร้างขึ้นใหม่) ควรป้องกันไม่ให้วัสดุที่อยู่รอบชั้น corneum เคลื่อนเข้าสู่เนื้อเยื่อที่มีชีวิต ส่งผลให้การสร้างแบบจำลองการสัมผัสทางผิวหนังไม่ดี แบบจำลอง RhE ต้องไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย ไวรัส มัยโคพลาสมา หรือเชื้อรา
ในบรรดาการศึกษาการทดสอบ การวัด การวิเคราะห์ และการประเมินผลจำนวนมากที่องค์กรของเราจัดเตรียมไว้สำหรับธุรกิจในภาคส่วนต่างๆ ด้วยพนักงานที่ผ่านการฝึกอบรมและเชี่ยวชาญ และอุปกรณ์เทคโนโลยีขั้นสูง เรายังให้บริการการทดสอบที่กำหนดไว้ใน "OECD TG 439 การระคายเคืองผิวหนังในหลอดทดลอง: สร้างใหม่ ในมนุษย์ วิธีทดสอบผิวหนังชั้นนอก" มาตรฐาน ให้
คุณสามารถขอให้เรากรอกแบบฟอร์มของเราเพื่อรับการนัดหมายเพื่อรับข้อมูลรายละเอียดเพิ่มเติมหรือเพื่อขอการประเมินผล
