OECD TG 439 Kerengsaan Kulit In Vitro: Kaedah Ujian Epidermis Manusia Dibina Semula

Piawaian “OECD TG 439 Kerengsaan kulit in vitro: Kaedah ujian epidermis manusia yang dibentuk semula”, yang diterbitkan di bawah garis panduan OECD mengenai tatalaku perniagaan yang bertanggungjawab untuk syarikat multinasional (garis panduan OECD) , menerangkan kaedah ujian in vitro yang digunakan untuk pengenalpastian bahaya bahan kimia perengsa (bahan dan campuran) selaras dengan Sistem Pengelasan dan Pelabelan Harmonisasi Global (GHS) Kategori 2 PBB.

Kaedah ini adalah berdasarkan kepada epidermis manusia (RhE) yang dibina semula, yang dalam reka bentuk keseluruhannya hampir menyerupai sifat biokimia dan fisiologi bahagian atas kulit manusia. Daya maju sel diukur dengan penukaran enzimatik pewarna penting MTT kepada garam formazan biru, yang diukur secara kuantitatif selepas pengekstrakan daripada tisu. Bahan ujian merengsa ditakrifkan oleh keupayaannya untuk mengurangkan daya maju sel di bawah paras ambang yang ditetapkan (sama dengan 2 peratus atau kurang untuk kategori 50). Bahan kimia berwarna juga boleh diuji menggunakan prosedur HPLC (kromatografi cecair berprestasi tinggi).

Terdapat tiga kaedah ujian yang disahkan yang mematuhi piawaian OECD TG 439. Bergantung pada rangka kerja kawal selia dan sistem klasifikasi yang digunakan, prosedur ini boleh digunakan untuk menentukan kerengsaan kulit bahan ujian sebagai ujian pengganti yang berdiri sendiri untuk ujian kerengsaan kulit in vivo atau sebagai ujian pengganti separa dalam strategi ujian berperingkat.

Pada prinsipnya, bahan kimia ujian digunakan secara topikal pada model RhE (epidermis manusia yang dibina semula) tiga dimensi yang terdiri daripada keratinosit epidermis manusia yang berbudaya dan tidak diubah untuk mencipta model epidermis manusia berbilang lapisan dan sangat berbeza. Ia terdiri daripada lapisan basal, berduri, dan berbutir biasa dan stratum korneum berbilang lapis yang mengandungi lapisan lipid lamelar antara sel yang mewakili kelas lipid utama yang serupa dengan yang terdapat dalam vivo.

Kerengsaan kulit akibat bahan kimia dimanifestasikan terutamanya oleh eritema dan edema dan merupakan hasil daripada rangkaian kejadian yang bermula apabila bahan kimia melalui stratum korneum dan merosakkan lapisan bawah keratinosit dan sel kulit lain.

Sel-sel yang rosak boleh melepaskan mediator keradangan atau memulakan lata keradangan yang juga bertindak pada sel-sel dalam dermis, terutamanya sel-sel stromal dan endothelial saluran darah. Ia adalah pengembangan dan peningkatan kebolehtelapan sel endothelial yang menghasilkan eritema dan edema yang diperhatikan. Khususnya, kaedah ujian berasaskan RhE mengukur peristiwa permulaan dalam lata, seperti kerosakan sel atau tisu, menggunakan daya maju sel sebagai bacaan tanpa adanya sebarang vaskularisasi dalam sistem ujian in vitro.

Dalam model RhE, daya maju sel diukur dengan penukaran enzimatik pewarna penting MTT kepada garam formazan biru, yang diukur secara kuantitatif selepas penyingkiran daripada tisu (MTT digunakan untuk menilai daya maju sel sebagai fungsi potensi redoks). Bahan kimia merengsa ditakrifkan oleh keupayaannya untuk mengurangkan daya maju sel di bawah paras ambang yang ditetapkan (iaitu, sekurang-kurangnya 2 peratus untuk kategori 50). Bergantung pada rangka kerja kawal selia dan kebolehgunaan kaedah ujian ini, bahan kimia ujian yang menghasilkan daya maju sel melebihi tahap ambang yang ditentukan boleh dianggap tidak merengsa (iaitu, tiada kategori, sekurang-kurangnya 50 peratus).

Keratinosit manusia yang tidak berubah harus digunakan untuk membina semula epitelium. Di bawah stratum korneum yang berfungsi, mesti terdapat banyak lapisan sel epitelium hidup (lapisan basal, stratum spinosum, stratum granulosum). Lapisan korneum mestilah berbilang lapisan, mengandungi profil lipid penting untuk membentuk penghalang berfungsi dengan keliatan untuk menahan penembusan pantas bahan kimia rujukan sitotoksik, contohnya, natrium dodeasil sulfat.

Fungsi penghalang mesti ditunjukkan dan boleh dinilai dengan menentukan kepekatan bahan kimia rujukan mengurangkan daya maju tisu sebanyak 50 peratus selepas masa pendedahan tetap, atau dengan menentukan masa pendedahan yang diperlukan untuk mengurangkan daya maju sel sebanyak 50 peratus selepas penggunaan bahan kimia rujukan pada kepekatan tetap yang ditetapkan. Sifat pengekalan model RhE (epidermis manusia yang dibina semula) harus menghalang bahan di sekeliling stratum korneum daripada berhijrah ke dalam tisu hidup, mengakibatkan pemodelan pendedahan kulit yang lemah. Model RhE mestilah bebas daripada bakteria, virus, mycoplasma atau pencemaran kulat.

Di antara pelbagai kajian ujian, pengukuran, analisis dan penilaian yang disediakan oleh organisasi kami untuk perniagaan dalam pelbagai sektor, dengan kakitangan terlatih dan pakar serta peralatan teknologi canggih, kami juga menyediakan perkhidmatan ujian yang ditakrifkan dalam "OECD TG 439 Kerengsaan kulit in vitro: Manusia yang dibina semula. kaedah ujian epidermis" standard. memberi.