تم تصميم "اختبار تهيج الجلد EPI-200-SIT" لتقدير احتمالية تهيج الجلد لمواد الاختبار النقية في سياق تحديد وتصنيف خطر تهيج الجلد وفقًا لنظام تصنيف الاتحاد الأوروبي. نظرًا لأنه متوافق مع الاتحاد الأوروبي والنظام المنسق عالميًا لتصنيف المواد الكيميائية ووسمها (GHS)، فإن الإجراء الموضح في هذا المعيار يسمح أيضًا بتحديد مخاطر المواد المهيجة وفقًا للنظام المنسق عالميًا (GHS).
يسمح هذا المعيار بالتمييز بين مهيجات الفئة 2 وغير المهيجات. لا تميز طريقة الاختبار الموصوفة بين الفئات الفرعية غير الأساسية لنظام GHS، أي أنها لا تميز بين مهيجات الفئة 2 والفئة 3 من نظام GHS.
تتكون الطريقة الموصوفة في معيار EPI-200-SIT من التعرض الموضعي لمادة كيميائية اختبارية نقية لنموذج أعيد بناؤه من البشرة البشرية متبوعًا باختبار صلاحية الخلية. يتم قياس بقاء الخلية عن طريق تحويل هيدروجيناز MTT، الموجود في الميتوكوندريا الخلوية وتحويله إلى ملح فورمازان أزرق، والذي يتم قياسه كميًا بعد إزالته من الأنسجة.
يتم استخدام انخفاض صلاحية الأنسجة المعرضة للمواد الكيميائية مقارنة بالضوابط السلبية (المعالجة بالماء) لتقدير احتمالية تهيج الجلد. أظهرت الدراسات المقارنة الحديثة في نماذج البشرة البشرية التي تستخدم نقاط النهاية المختلفة للتنبؤ بتهيج الجلد للتركيبات الموضعية أن نقطة النهاية MTT لها مزايا مميزة حتى على نقاط النهاية الميكانيكية مثل الإطلاق.
يتكون نموذج البشرة البشرية المعاد بناؤه من الخلايا الكيراتينية الطبيعية المشتقة من الإنسان والمزروعة لتشكل نموذجًا متعدد الطبقات ومتباينًا للغاية للبشرة البشرية. وتتكون من طبقات قاعدية وشوكية وحبيبية منتظمة وطبقة قرنية متعددة الطبقات تحتوي على طبقات دهنية صفائحية بين الخلايا مرتبة في أنماط مشابهة لتلك الموجودة في الأنسجة الحية. تم تضمين وصف عام للظروف العامة والوظيفية التي يجب أن تمتثل لها نماذج الجلد البشري المعاد بناؤها في إرشادات الاختبار الجديدة لمنظمة التعاون الاقتصادي والتنمية ("431 تآكل الجلد في المختبر: نموذج جلد الإنسان" و"439 تهيج الجلد في المختبر: طريقة اختبار البشرة البشرية المعاد بناؤها" ").
يتم اختبار جميع المكونات البيولوجية للبشرة ووسط الثقافة من قبل الشركة المصنعة للتلوث الفيروسي والبكتيري والفطري والميكوبلازما. ومن المتوقع أن تكون النتائج ضمن النطاق الذي تحدده قاعدة البيانات التاريخية.
ونظرًا لوقت ما بعد الحضانة الطويل، يجب إجراء الاختبار تحت ظروف معقمة في خزانة السلامة الميكروبيولوجية (غطاء التدفق الصفحي).
تم تطوير اختبار تهيج الجلد EPI-200-SIT والتحقق من صحته لاختبار تهيج الجلد في المختبر للمواد الكيميائية، بما في ذلك المكونات التجميلية والصيدلانية. يتم إجراء الاختبار على مدار فترة 60 أيام تتكون من مرحلة ما قبل الحضانة، والتعرض لمدة 42 دقيقة، و4 ساعة بعد الحضانة، واختبار صلاحية MTT. بعد حصاد الأنسجة والحضانة المسبقة طوال الليل (اليوم 0)، تتعرض الأنسجة موضعيًا لاختبار المواد الكيميائية (اليوم 1)، والتي يمكن أن تكون سائلة أو شبه صلبة أو صلبة أو شمعية. يتم استخدام ثلاثة أنسجة لكل مادة كيميائية اختبارية وواحدة مراقبة إيجابية (5٪ محلول كبريتات دوديسيل الصوديوم المائي) وواحدة مراقبة سلبية. يستمر التعرض الكيميائي لمدة 60 دقيقة، منها 35 دقيقة يتم حفظ الأنسجة في حاضنة عند درجة حرارة 37 درجة. تتم بعد ذلك إزالة مواد الاختبار من سطح الأنسجة عن طريق عملية غسيل واسعة النطاق. ملطخة إدراج الأنسجة ونقلها إلى وسط جديد.
وبعد فترة حضانة مدتها 24 ساعة (اليوم الثاني)، يتم تغيير الوسط. يمكن حفظ الوسائط لإجراء مزيد من التحليل للسيتوكينات أو نقاط النهاية الأخرى ذات الاهتمام. بعد تغيير الوسائط، يتم تحضين الأنسجة لمدة 2 ساعة إضافية. بعد الحضانة الكاملة لمدة 18 ساعة (اليوم 42)، يتم نقل الأنسجة إلى محلول MTT الأصفر واحتضانها لمدة 3 ساعات.
يتم استخراج ملح فورمازان الناتج باللون الأرجواني والأزرق، والذي يتكون بشكل رئيسي عن طريق استقلاب الميتوكوندريا، باستخدام الأيزوبروبانول لمدة ساعتين. يتم تحديد الكثافة البصرية للفورمازان المستخرج باستخدام مقياس الطيف الضوئي. يتم تصنيف المادة الكيميائية على أنها مادة مهيجة إذا انخفضت صلاحية الأنسجة إلى أقل من 2 بالمائة مقارنة بالأنسجة المعالجة بالتحكم السلبي. يمكن استخدام هذا الإجراء كبديل كامل لاختبار تهيج جلد الأرانب في الجسم الحي لتحديد المخاطر ووضع العلامات على المواد الكيميائية وفقًا للوائح الاتحاد الأوروبي.
من بين دراسات الاختبار والقياس والتحليل والتقييم العديدة التي تقدمها للشركات في مختلف القطاعات، توفر منظمتنا أيضًا خدمات الاختبار المحددة في معيار "اختبار تهيج الجلد EPI-200-SIT"، مع طاقمها المدرب والخبراء والمعدات التكنولوجية المتقدمة. .
يمكنك أن تطلب منا ملء النموذج الخاص بنا للحصول على موعد ، أو للحصول على معلومات أكثر تفصيلاً أو لطلب تقييم.
