بالنسبة لاختبارات التوافق الحيوي التي تتطلب سمية جينية ، فإننا نقدم أنواعًا متعددة من الاختبارات ، بما في ذلك Ames Mutagenicity و Chromosomal Aberration و Mouse Lymphoma و Mouse Micronucleus ، اعتمادًا على نوع المنتج الخاص بك ومتطلبات البيانات. تتوافق هذه الاختبارات مع إرشادات منظمة التعاون الاقتصادي والتنمية (OECD) و ISO كواحد من ثلاثة مستويات اختبار في المختبر للسمية الجينية.
يستخدم اختبار Ames Mutagenicity لتحديد نشاط الطفرات الجينية المحتمل لمستخلص من جهاز / مادة طبية. يتم إجراء اختبار الطفرة البكتيرية العكسية (اختبار أميس) كجزء من مجموعة اختبارات السمية الجينية لتحديد ما إذا كانت التسريبات من جهاز / مادة طبية تسبب الطفرات.
يستخدم اختبار انحراف الكروموسومات لفحص الأجهزة / المستلزمات الطبية لتحديد ما إذا كانت تسبب تشوهات بنيوية في الكروموسومات في خلايا مبيض الهامستر الصيني (CHO). يتم إجراء الاختبار على أجهزة / مواد ذات اتصال دائم بالمريض أو اتصال طويل الأمد بالمريض أو ملامسة للدم. يتوافق اختبار انحراف الكروموسومات مع إرشادات منظمة التعاون الاقتصادي والتنمية (OECD) و ISO كواحد من ثلاثة مستويات للاختبار في المختبر للسمية الجينية
غالبًا ما يستخدم اختبار سرطان الغدد الليمفاوية في الفئران مزارع خلايا الثدييات لتحديد الطفرات الجينية ، والتغيير في بنية الكروموسوم وعدده ، والسميات الجينية الأخرى التي تسببها الأجهزة أو المواد أو المستخلصات الطبية. تُستخدم هذه الاختبارات للتأكد من أن الأجهزة التي لها اتصال طويل الأمد بالجسم لا تكشف عن سمية جينية يمكن أن تؤدي إلى طفرات جينية مع احتمال الإصابة بالسرطان.
يتم استخدام اختبار Mouse Micronucleus لتقييم إمكانات جهاز طبي للحث على تكوين النواة الدقيقة في كريات الدم الحمراء متعددة الألوان غير الناضجة الموجودة في نخاع عظم الفئران البالغة.
اميس الطفرات
يستخدم اختبار Ames Mutagenicity العديد من سلالات Salmonella typhimurium المختارة لقابليتها للتأثر بالطفرات بسبب:
تتطلب سلالات الاختبار أيضًا الهيستدين للنمو بسبب طفرة في الجين الذي يتحكم في إنتاج الهيستيدين. يتم إجراء اختبارات أميس عن طريق خلط مستخلص من مادة الاختبار مع كائن الاختبار في محلول أجار ناعم يحتوي على كمية صغيرة فقط من الهيستيدين. يسمح الهيستيدين للكائن الحي المختبر الملقح بدخول عدد محدود من الحجرات ولكنه غير كاف للسماح بالنمو الطبيعي.
ومع ذلك ، إذا خضعت السلالة لطفرة عكسية (عفوية أو ناتجة عن مادة الاختبار أو مادة تحكم إيجابية) ، فإن الكائن الحي لم يعد بحاجة إلى الهيستيدين لينمو ويمكن أن ينتج مستعمرة مرئية أو معكوسة. تؤدي الطفرات في كائن الاختبار فقط في منطقة الجين الهيستيدين إلى قيام الكائن المختبر بعكس الطفرة إلى كائن حي ، والذي لم يعد يتطلب الهيستدين.
يتم اختيار سلالات الاختبار لاكتشاف أنواع مختلفة من الطفرات. سلالات الاختبار المستخدمة هي TA97A و TA98 و TA100 و TA102 و TA1535. يتم أيضًا إجراء اختبار موضعي حيث يتم تلوين مقتطفات من منتج الاختبار على لوحة تحتوي على كمية صغيرة من كائن الاختبار المحتوي على الهيستيدين. عندما تنتشر مادة الاختبار من خلال الأجار ، تصبح أكثر تمييعًا. هذا يسمح باكتشاف المطفرات التي تسبب بعض تثبيط السلالات المختبرة. يتم إجراء الاختبارات بتنشيط S-9 أو بدون تنشيط S-9. تم تصميم نظام التنشيط S-9 لمحاكاة أنظمة إنزيمات الكبد في الثدييات ويستخدم لاكتشاف المواد التي تخضع للتنشيط الأيضي من الأشكال غير المطفرة.
يتم إجراء اختبار انحراف الكروموسومات عن طريق تعريض خلايا CHO لمستخلص مادة الاختبار. يتم تضمين وسيط النزيف في الاختبار كعنصر تحكم سلبي.
يتم زرع خلايا CHO في قوارير استنبات خلوية بحجم 75 سم 2 وتحضينها مع مستنبت خلية + 10٪ مصل حتى التقاء 40-60٪.
تتعرض خلايا CHO لاختبار مستخلص المنتج في وجود وغياب نظام تنشيط التمثيل الغذائي. نظام التنشيط الأيضي هو خليط من S9 homogenate و isocitrate و NADP. الضوابط الإيجابية المستخدمة هي سيكلوفوسفاميد مع تنشيط التمثيل الغذائي و Mitomycin C بدون تنشيط التمثيل الغذائي.
قبل حصاد الخلايا ، يتم فحص الخلايا للسمية الخلوية. يتم تسجيل القوارير وفقًا لدرجة السمية الخلوية المورفولوجية المميزة على مقياس نسبي من 10993-5 وفقًا لـ AAMI / ANSI / ISO 87-0 و USP <4>. تم حساب متوسط النتائج من الزجاجات الثلاث لإعطاء النتيجة النهائية للسمية الخلوية.
في نهاية فترتي التعرض والتعبير ، يتم إلقاء القبض على الخلايا في الطور الفوقي مع كولتازيد. ثم يتم إزالة الخلايا من القوارير ومعالجتها بمحلول منخفض التوتر ومثبت. ترسب الخلايا على شرائح المجهر. الكروموسومات ملطخة بصبغة جيمسا ومغطاة بـ Permount®. ثم يتم فحص الخلايا مجهريًا بحثًا عن تشوهات الكروموسومات.
التوافق الحيوي في اختبار السمية الجينية ، تُستخدم خلايا سرطان الغدد الليمفاوية في الفئران لتحديد ما إذا كانت مادة الاختبار قادرة على إحداث طفرات نقطية أو تكسير صبغي في خط خلية الثدييات المستزرعة. في هذه الحالة ، فإن الجين المستهدف ، ثيميدين كيناز (TK) ، هو جين يمكن الاستغناء عنه. يشير فقدان نشاط المعارف التقليدية إلى حدوث طفرة. نظرًا لأن TK متورطة في مسار الإنقاذ المشتق من استقلاب الحمض النووي ، يمكن للخلايا تصنيع ثيميدين دي نوفو. لذلك ، فإن فقدان المعارف التقليدية لا يجعل الخلية غير حية.
يمكن اختيار المسوخات ويمكن اشتقاق الترددات الطافرة من خلال دمج نظير الثيميدين (ثلاثي فلوروثيميدين أو TFT) في وسط استنبات الخلايا بعد التعرض لمواد الاختبار. تشمل الخلايا العادية ذات المعارف التقليدية السليمة التناظرية والقالب ؛ تعيش الخلايا الطافرة (التي تفتقر إلى نشاط TK) وتشكل مستعمرات وتحدد الكم.
في اختبار Mouse Micronucleus ، تتم إزالة جهاز طبي في بيئة قطبية وغير قطبية. تدار الضوابط الإيجابية لاستخراج المنتج المختبر والضوابط السلبية عند 20 مل / كغ في كل من ذكور وإناث الفئران. ثم يتم حصاد النخاع العظمي بعد 24 و 48 ساعة من الجرعات وفحص وجود كريات الدم الحمراء متعددة النوى (PCEs). يعد وجود PCEs مؤشرًا على تسرب مادة مطفرة من الجهاز.
EUROLAB، مع فريقها ذو الخبرة العالية والمختبرات المعتمدة دوليا، اختبار السمية الوراثية تقوم بجميع خدمات الاختبار والتحليل والقياس والتقييم وإعداد التقارير بشكل كامل وموثوق.
يمكنك أن تطلب منا ملء النموذج الخاص بنا للحصول على موعد ، أو للحصول على معلومات أكثر تفصيلاً أو لطلب تقييم.
