„EPI-200-SIT Тест за иритација на кожата“ е дизајниран да го процени потенцијалот за иритација на кожата на чистите супстанци за испитување во контекст на идентификација и класификација на опасност од иритација на кожата според системот за класификација на Европската унија. Бидејќи е усогласен со Европската Унија и Глобално хармонизираниот систем за класификација и означување на хемикалии (GHS), постапката опишана во овој стандард исто така дозволува идентификација на опасноста на надразнувачи во согласност со GHS.
Овој стандард овозможува разлика помеѓу надразнувачи од категорија 2 и неиританти. Опишаниот метод на тестирање не прави разлика помеѓу несуштинските подкатегории на GHS, односно не прави разлика помеѓу GHS категорија 2 и категорија 3 надразнувачи.
Методот опишан во стандардот EPI-200-SIT се состои од локално изложување на чиста хемикалија за тестирање на реконструиран модел на човечки епидермис проследено со тестирање за одржливост на клетките. Одржливоста на клетките се мери со конверзија на дехидрогеназа на МТТ, која е присутна во клеточните митохондрии и се претвора во сина формазанска сол, која се мери квантитативно по отстранувањето од ткивата.
Намалената одржливост на ткивата изложени на хемикалии во споредба со негативните контроли (третирани со вода) се користи за да се процени потенцијалот за иритација на кожата. Неодамнешните компаративни студии во модели на човечки епидермис кои користат различни крајни точки за предвидување на иритација на кожата на топични формулации покажаа дека крајната точка на MTT има различни предности дури и во однос на механички базираните крајни точки, како што е ослободувањето.
Реконструираниот човечки епидермален модел се состои од нормални епидермални кератиноцити добиени од човекот, култивирани за да формираат повеќеслоен, високо диференциран модел на човечки епидермис. Се состои од правилни базални, боцки и зрнести слоеви и повеќеслоен роговиден слој кој содржи меѓуклеточни ламеларни липидни слоеви распоредени во обрасци слични на оние што се наоѓаат во живото ткиво. Општ опис на општите и функционалните услови со кои треба да се усогласат моделите на реконструирана човечка кожа е вклучен во новите упатства за тестирање на ОЕЦД („431 In vitro корозија на кожата: модел на човечка кожа“ и „439 In vitro иритација на кожата: метод за тестирање на реконструиран човечки епидермис ”).
Сите биолошки компоненти на епидермисот и медиумот за култура се тестирани од производителот за вирусна, бактериска, габична и микоплазма контаминација. Резултатите се очекува да бидат во опсегот определен од историската база на податоци.
Поради долгото време по инкубацијата, тестот мора да се изврши под асептични услови во микробиолошка безбедносна ормара (хауба со ламинарен проток).
Тестот за иритација на кожата EPI-200-SIT беше развиен и потврден за ин витро тестирање за иритација на кожата на хемикалии, вклучувајќи козметички и фармацевтски состојки. Тестирањето се изведува во период од 60 дена кој се состои од прединкубација, 42-минутна изложеност, 4-часовна пост-инкубација и тестирање на одржливост на МТТ. По бербата на ткивото и преинкубацијата преку ноќ (ден 0), ткивата се локално изложени на хемикалии за тестирање (ден 1), кои можат да бидат течни, полуцврсти, цврсти или восок. За секоја хемикалија за испитување се користат три ткива и позитивна контрола (5 проценти воден раствор на натриум додекал сулфат) и негативна контрола. Хемиската изложеност трае 60 минути, од кои 35 минути ткивата се чуваат во инкубатор на 37 степени. Супстанциите за испитување потоа се отстрануваат од површината на ткивото со обемна процедура за перење. Ткивните влошки се обоени и префрлени на свеж медиум.
По 24-часовен период на инкубација (ден 2), медиумот се менува. Медиумите може да се зачуваат за понатамошна анализа на цитокини или други крајни точки од интерес. По промената на медиумот, ткивата се инкубираат дополнителни 18 часа. По целата 42-часовна инкубација (ден 3), ткивата се пренесуваат во жолт МТТ раствор и се инкубираат 3 часа.
Добиената пурпурно-сина формазанска сол, формирана главно од митохондријалниот метаболизам, се екстрахира со употреба на изопропанол 2 часа. Оптичката густина на извлечениот формазан се одредува со помош на спектрофотометар. Хемикалијата е класифицирана како иритант ако одржливоста на ткивото падне под 50 проценти во однос на ткивата третирани со негативна контрола. Оваа постапка може да се користи како целосна замена за in vivo тестот за иритација на кожата на зајакот за идентификација на опасност и означување на хемикалии во согласност со регулативите на Европската унија.
Меѓу бројните студии за тестирање, мерење, анализа и евалуација што ги обезбедува за бизниси во различни сектори, нашата организација обезбедува и услуги за тестирање дефинирани во стандардот „EPI-200-SIT Тест за иритација на кожата“, со обучен и стручен персонал и напредна технолошка опрема .
Можете да побарате од нас да ја пополните нашата форма за да закажете состанок, да добиете подетални информации или да побарате проценка.
