"Ujian kerengsaan kulit EPI-200-SIT" direka untuk menganggar potensi kerengsaan kulit bahan ujian tulen dalam konteks pengenalpastian dan klasifikasi bahaya kerengsaan kulit mengikut sistem pengelasan Kesatuan Eropah. Memandangkan ia diselaraskan dengan Kesatuan Eropah dan Sistem Pengkelasan dan Pelabelan Bahan Kimia yang Diharmonikan Secara Global (GHS), prosedur yang diterangkan dalam piawaian ini juga membenarkan pengecaman bahaya perengsa mengikut GHS.
Piawaian ini membenarkan perbezaan antara perengsa kategori 2 dan bukan perengsa. Kaedah ujian yang diterangkan tidak membezakan antara subkategori GHS yang tidak penting, iaitu ia tidak membezakan antara perengsa GHS kategori 2 dan kategori 3.
Kaedah yang diterangkan dalam standard EPI-200-SIT terdiri daripada pendedahan topikal bahan kimia ujian tulen kepada model epidermis manusia yang dibina semula diikuti dengan ujian daya maju sel. Daya maju sel diukur dengan penukaran dehidrogenase MTT, yang terdapat dalam mitokondria sel dan ditukar kepada garam formazan biru, yang diukur secara kuantitatif selepas penyingkiran daripada tisu.
Daya maju yang berkurangan tisu terdedah kepada bahan kimia berbanding kawalan negatif (dirawat dengan air) digunakan untuk menganggarkan potensi kerengsaan kulit. Kajian perbandingan terkini dalam model epidermis manusia menggunakan pelbagai titik akhir untuk meramalkan kerengsaan kulit daripada formulasi topikal telah menunjukkan bahawa titik akhir MTT mempunyai kelebihan yang berbeza berbanding titik akhir berasaskan mekanikal seperti pelepasan.
Model epidermis manusia yang dibina semula terdiri daripada keratinosit epidermis asal manusia biasa yang dikultur untuk membentuk model epidermis manusia berbilang lapisan dan sangat berbeza. Ia terdiri daripada lapisan basal, berduri dan berbutir biasa dan stratum korneum berbilang lapisan yang mengandungi lapisan lipid lamelar antara sel yang disusun dalam corak yang serupa dengan yang terdapat dalam tisu hidup. Penerangan umum tentang keadaan umum dan fungsi yang mesti dipatuhi oleh model kulit manusia yang dibina semula disertakan dalam garis panduan ujian OECD baharu (“431 Kakisan kulit in vitro: Model kulit manusia” dan “439 Kerengsaan kulit in vitro: Kaedah ujian epidermis manusia yang dibina semula ”).
Semua komponen biologi epidermis dan medium kultur diuji oleh pengilang untuk pencemaran virus, bakteria, kulat dan mikoplasma. Hasilnya dijangka berada dalam julat yang ditentukan oleh pangkalan data sejarah.
Oleh kerana masa selepas pengeraman yang panjang, ujian mesti dilakukan di bawah keadaan aseptik dalam kabinet keselamatan mikrobiologi (tudung aliran laminar).
Ujian kerengsaan kulit EPI-200-SIT telah dibangunkan dan disahkan untuk ujian kerengsaan kulit in vitro terhadap bahan kimia, termasuk bahan kosmetik dan farmaseutikal. Ujian dilakukan dalam tempoh 60 hari yang terdiri daripada pra-inkubasi, pendedahan 42 minit, 4 jam selepas inkubasi dan ujian daya maju MTT. Selepas penuaian tisu dan prainkubasi semalaman (hari 0), tisu secara topikal terdedah kepada bahan kimia ujian (hari 1), yang boleh berupa cecair, separuh pepejal, pepejal atau lilin. Tiga tisu digunakan untuk setiap bahan kimia ujian dan satu kawalan positif (5 peratus larutan natrium dodesil sulfat berair) dan satu kawalan negatif. Pendedahan kimia berlangsung selama 60 minit, di mana 35 minit tisu disimpan dalam inkubator pada 37 darjah. Bahan ujian kemudiannya dikeluarkan dari permukaan tisu dengan prosedur pencucian yang meluas. Sisipan tisu diwarnakan dan dipindahkan ke medium segar.
Selepas tempoh inkubasi 24 jam (hari ke-2), medium ditukar. Media boleh disimpan untuk analisis lanjut sitokin atau titik akhir lain yang menarik. Selepas pertukaran media, tisu diinkubasi selama 18 jam tambahan. Selepas keseluruhan pengeraman 42 jam (hari ke-3), tisu dipindahkan ke larutan MTT kuning dan diinkubasi selama 3 jam.
Garam formazan ungu-biru yang terhasil, dibentuk terutamanya oleh metabolisme mitokondria, diekstrak menggunakan isopropanol selama 2 jam. Ketumpatan optik formazan yang diekstrak ditentukan menggunakan spektrofotometer. Bahan kimia diklasifikasikan sebagai perengsa jika daya maju tisu jatuh di bawah 50 peratus berbanding dengan tisu yang dirawat dengan kawalan negatif. Prosedur ini boleh digunakan sebagai pengganti lengkap untuk ujian kerengsaan kulit arnab in vivo untuk pengecaman bahaya dan pelabelan bahan kimia mengikut peraturan Kesatuan Eropah.
Di antara pelbagai ujian, pengukuran, analisis dan kajian penilaian yang disediakan untuk perniagaan dalam pelbagai sektor, organisasi kami juga menyediakan perkhidmatan ujian yang ditakrifkan dalam piawaian "Ujian kerengsaan kulit EPI-200-SIT", dengan kakitangan terlatih dan pakar serta peralatan teknologi canggih. .
Anda boleh meminta kami mengisi borang kami untuk mendapatkan temujanji, mendapatkan maklumat terperinci atau meminta penilaian.
